Введение к работе
Актуальность темы. В иаотоящев время биотехнология как перспективное и приоритетное напра&адгаэ в кивотноводотве развивается у окоренными темпами. Одним из ваших ее разделов является клеточная илязнорля, в основе которой лежит культивирс^ валив'гамат и эмбрионов »«. vitro ,
В последние годы достигнуты существенные успехи а разработке методов культивирования и экстракорпорального оплодотворения ооцитов коров и получения на этой, основе эмбрионов (Эрнст и др., IS83; Кузьмина* 1993). Технология оплодотворения invUro приобрела большое значение'как в практическом - источник получения эмбрионов для целей трансплантация, клеточной и генетической'инженерии, так н в теоретическом плане - моделирование дозревания ооцитов на основа различных систем культивирования, что позволяет изучать механизмы мейоза з раннего эмбриогенеза. , .
Однако до сих пор в технологии экстракорпорального созревания и оплодотворения ооцитов оущесгвуег ряд нерешенных вопросов. Один из них - изучение механизмов функцпоначьной активности фолликулов и социтов л роли в этих процессах ионов Са.
В связи о-этим возникает необходимость в получении данных, касащихся флуктуации мембрансвязанного Са в процессе фолли-куло- и оогенеза, его роли в мейотическом созревании ооцита и развитии ранних эмбрионов.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось изучение роли мембрансвязанного Са в мейотическом созревания и оплодотворении ооцитов коров і-*- vclro , в соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:'.
- определять содержание мембрансвязанного G& а ткани'фо&-
ЛИКУЛОН'ПРИ КУЛЬТИВИрОВаШШ U.vitro і
выявить характер влияния пролактина на интенсивность флуоресценции 'мембрансвязанного Са в ооцитах й тканях фоллику-лов коров;
изучить влияние ф&\ пролактина н эстрадиола на содержание йембрансЁязаняого Са в клетках гранулезы из фолликулов различного диаметра;'
исследовать оодерлание мембрансвязанного Са в ооцитах коров па различкнх стадиях меЯоза;.
изучить содержание кофермеитов окислительного фосфори-
лировашш в ооцитак, зиготах и эмбрионах;
- провести морфофункциональную оценку качества зигот и
ЭМбрИОНОВ КОРОВ, ПОЛУЧЄННЦХ i« viirp ,
Научная новизна. Разработан способ оценки качества соцн-тов и эмбрионов люминесцентным методом по уровню содержания в них мембрансвязанного кальция» В ооцитах обнаружено увеличение содержания мембрансвязанного Са при прохождении стадий мейоза. Установлено, что морфологические изменения эмбрионов, тканей фолликулов солровоадагагоя гипараккумулкцаой в них мембрансвя- . эанлого Са. В эмбрионах-с увеличением числа бластомероэ возрастает интенсивность флуоресценции мембрансвязанного кальция и количество восотановлеішого НАДИ. Показано, что при введении в среду культивирования пролактина увеличивается содержание мембрансвязанного Са в грану дезе фолликулов диаметром 10 ш и уменьшается в гранулеза .фолликулов диаметром 2-6 ш,.
Практическая значимость. Разработан метод комплексной оценки качества ооодтов к вибрионов, включая морфологическую характеристику и функциональное состояние (содержание в исследуемых объектах мембрансвязанного Са).
Апробацію работы. Основные результати исследований доло-зк'енц и обсувделы на отчетных сессиях аспирантов ВНВДГРІ {I992j 1393 гг.), на 1-й международной научной конференции молодше ученых и специалистов (Киев, 1994), на .Мзвдународном симпозиума '''Молекулярная Генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных" {Санкт-Петер-бург-Пушкин, 1994).
Публикации. По материалам диссертации опубликованы три работы» .
Объем и отпуктура дподертации. Диссертация состоит из введения, обзора литераїури, материалов и методов исследований, обсуждения, выводов И предложений, списка использованной литературы» вюшчавдего Г?1? источников, а том числе 144 иностранных.-Работа изложена на fleo страницах машинописного текста я содержит І2 таблиц, I -рисунок, 7. микрофотографий.