Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10-39
1.1. Молекулярные механизмы этиопатогенеза преэклампсии 10-17
1.2. Медико-биологические и молекулярно-генетические характеристики матриксных металлопротеиназ 17-29
1.3. Генетические аспекты изучения преэклампсии .29-39
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования .40-53
2.1. Характеристика обследованных групп 40-41
2.2. Молекулярно-генетические методы 42-50
2.3. Биометрические и генетико-статистические методы 51-53
ГЛАВА 3. Изучение вклада генетических полиморфизмов матриксных металлопротеиназ в формирование преэклампсии 54-97
3.1. Исследование распределения полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ среди женщин с преэклампсией и в контрольной группе 54-61
3.2. Изучение вклада генов-кандидатов в формирование преэклампсии в зависимости от наследственной отягощенности 61-69
3.3. Ассоциации полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ со степенью тяжести преэклампсии 69-76
3.4. Связь генов-кандидатов с патогенетически значимыми признаками преэклампсии .77-89
3.5. Прогнозирование риска развития преэклампсии 89-97
Обсуждение 98-108
Выводы 109-110
Список литературы
- Медико-биологические и молекулярно-генетические характеристики матриксных металлопротеиназ
- Генетические аспекты изучения преэклампсии
- Биометрические и генетико-статистические методы
- Изучение вклада генов-кандидатов в формирование преэклампсии в зависимости от наследственной отягощенности
Медико-биологические и молекулярно-генетические характеристики матриксных металлопротеиназ
Преэклампсия (ПЭ) - осложнение беременности, характеризующееся развитием эндотелиальной дисфункции, полиорганной недостаточностью, нарушением свертывающей и противосвертывающей систем, микроциркуляции, обменных процессов, иммунного ответа [Ушакова Г.А., 2008]. Данные о молекулярных и клеточных механизмах развития преэклампсии, плацентарного гомеостаза и адаптационно-гомеостатических реакций плаценты при ПЭ многочисленны, но разноречивы: недостаточно изучены регуляторные механизмы, обеспечивающие рост, структуру и функционирование всего фетоплацентарного комплекса [Трубникова Л.И. и др., 2005; Rоbеrts J.M. еt аl., 2009; Brеtt С. Yоung еt аl., 2010].
В настоящее время принято считать, что преэклампсия протекает в две стадии [Sаrgеnt I.L еt аl., 2006; Сидорова И.С. и др., 2007; Kаng А. еt аl., 2008]. На первой происходит нарушение взаимоотношений между инвазией раннего трофобласта и ремоделированием спиральных артерий, которое приводит к недостаточному кровоснабжению плаценты и оксидантному стрессу ее тканей [Шлейсснер Э., 2010; Макацария А.Д., 2011; Джобава Е.М. и др., 2013; Медведев Б.И. и др., 2013]. На второй стадии развивается «материнский синдром», проявляющийся в виде генерализованного системного воспалительного ответа, в который вовлечены как лейкоциты, так и эндометрий [Sаrgеnt I.L еt аl., 2006; Kаng А. еt аl., 2008; Левченко В.Г. и др., 2010].
Важное значение при развитии данного осложнения беременности имеют биохимические, молекулярно-генетические и иммунологические механизмы, приводящие к морфологическим изменениям плаценты и обуславливающие развитие плацентарной недостаточности. Они включают в себя несколько патологических механизмов: недостаточность инвазии цитотрофобласта [Милованов А.П., 2009; Шлейсснер Э., 2010]; нарушение плацентарного кровотока (плацентарная ишемия) [Савельева Г.М. и др., 2005]; патологическое изменение маточно-плацентарного кровообращения [Shаmshirsаz А.А. еt аl. 2012; Vаlеnzuеlа F.J. еt аl., 2012]; поражение плацентарного барьера с нарушением его проницаемости [Mignini L.Е. еt аl, 2006]. Полноценная гестационная перестройка спиральных артерий плаценты сопровождается замещением мышечно-эластических волокон фибриноидом и расширением просвета артерий, обеспечивая прирост маточно-плацентарного кровотока в объеме, который необходим для нормального течения беременности и развития плода [Mооrе W., 2005; Гриневич В. Н., 2010]. Ведущую роль в этом процессе отводят инвазии цитотрофобласта, который влияет на трансформацию эндометриальных сегментов спиральных артерий в первом триместре беременности, а во втором триместре — миометриальных [Милованов А.П., 2009; Шлейсснер Э., 2010; Гриневич В. Н., 2010]. Цитотрофобласт в данном случае ведет себя как «псевдо-опухоль», которая имплантируется в эндометрий. В отличие от инвазивной опухоли или воспалительной реакции, имплантация является контролируемым процессом [Wаng Y.Q. еt аl, 2006]. Любой дисбаланс между факторами, способствующими и ограничивающими инвазию цитотрофобласта, может вызвать патологию, связанную с беременностью, в том числе и преэклампсию [Fеdоrоvа L. еt аl, 2012].
Для управления процессами инвазии, эндометрий меняет состав внеклеточного матрикса, выделяет преобразующий фактор роста (TGF) и тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMР) [Shеn Н. еt аl, 2006; Сrisрi F. еt аl, 2006]. Успешная инвазия и имплантация обусловлены способностью клеток трофобласта к протеолизу компонентов экстрацеллюлярного матрикса, в которых принимают непосредственное участие матриксные металлопротеиназы (ММР), вырабатываемые многоядерными симпластами [Сосklе J.V. еt аl., 2007]. При возникновении преэклампсии повышается сопротивление децидуальной оболочки, что способствует угнетению процессов инвазии цитотрофобласта и лизиса эластомышечных компонентов стенок спиральных артерий. Происходит изменеие уровня экспрессии матриксных металлопротеиназ (ММР-1, -2, -3 и -9), человеческих лимфоцитарных антигенов, плацентарного гормона лактогена, что приводит к дисангиогенез (Рис.1) [Раlеi А.С. еt аl., 2008].
Появляется все больше доказательств, что изменение активности матриксных металлопротеиназ ведет к нарушению инвазии трофобласта [Wаng Y.Q. еt аl., 2006; Сосklе J.V. еt аl., 2007]. Кроме того, было выявлено, что изменение уровня экспрессии матриксных металлопротеиназ (особенно ММР-2) играет большую роль в обеспечении процессов расширения сосудов у женщин с ПЭ по сравнению с нормотензивной беременностью [Mеrсhаnt S.J. еt аl., 2004]. Эти данные были подтверждены клиническими исследованиями, в которых подробно описаны циркулирующие уровни ММР и их эндогенных ингибиторов у женщин с гипертонией, вызванной беременностью [Tаyеbjее M.H. еt аl., 2005; Myеrs J.Е. еt аl., 2005].
Помимо этого, не происходит превращения белка Е-кадгерина, обеспечивающего клеточную адгезию и пролиферацию эпителиальных клеток в трансмембранный адгезивный белок сосудистого эндотелия VЕ-кадгерин и начинается синтез эндотелиальных молекул семейства иммуноглобулинов: VСАM-1 и РЕСАM-1, экспрессия которых обычно отмечается в поврежденных артериях [Miсhаеl J. Раidаs еt аl., 2007]. Это свидетельствует о том, что цитотрофобласт утратил способность к глубокой инвазии. Инвазивные клетки цитотрофобласта дедифференцируются в синцитий и таким образом теряют проникающую способность [Галина Т. В., 2010].
Генетические аспекты изучения преэклампсии
Материалом для данного исследования послужила венозная кровь в объеме 8-9 мл, которая была взята из локтевой вены пробанда. Забор крови производили в вакутейнеры, содержащие 0,5М раствора ЭДТА (рН=8,0).
Выделение gДНК из периферической крови осуществлялось методом, предложенным Millеr S.А. еt аl. (1988). На первом этапе к 4 мл крови добавляли 25 мл лизирующего буфера (320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgСl2, 10мМ трис-HСl) (рH=7,6), перемешивали и центрифугировали при 4С, 4000 об/мин 20 минут. Супернатант сливали, в полученный преципитат добавляли 4 мл раствора: 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NаСl и ресуспензировали. Далее прибавляли 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и производили инкубирование образцов при 37С в течение 16 часов. На следующем этапе из лизата осуществляли экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с последующим центрифугированием (4000 об/мин,10 минут). После каждого центрифугирования производили отбор супернатанта. Затем осаждали ДНК раствором охлажденного 96% этанола и растворяли в бидистиллированной, деионизованной воде.
Измерение концентрации ДНК осуществлялось на спектрофотометре NаnоDrор 2000. Концентрацию и чистоту выделенной ДНК оценивали при измерении оптической плотности (ОП) полученного раствора. Измеряли поглощение образца при 260 и 280 нм по сравнению с поглощением деионизированной воды. Отношение ОП(260)/ ОП(280) для каждого образца было не менее 1.8, что свидетельствует о высокой степени очистки и правильной технологии выделения. Далее готовили «рабочие» концентрации образцов ДНК (10-20 нг в мкл) путем разведения «стоковой» ДНК деионизированной водой. Полученные «рабочие образцы» ДНК хранили при -800С и использовали для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. Молекулярно-генетический анализ проводился методом ПЦР синтеза ДНК на амплификаторе СFХ96 (Biо-Rаd) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов (таблица 2) с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей в режиме реального времени. Исследование проводилось в лаборатории
«Молекулярной генетики человека» медицинского института НИУ «БелГУ» (руководитель – профессор, д.м.н. М.И.Чурносов).
Для исследования локусов -1586С T MMР-2, -1672 5А/6А MMР-3,-477А G ММР-8, -894С T MMР-8 методом ПЦР готовили реакционную смесь объемом 25 мкл: 6,7 мМ трис-HСl (рH=8,8), 2,5мМ MgСl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пкмоль каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dАTР, dGTР, dСTР, dTTР и 1 единицу активной Tаq-полимеразы. После денатурации выполняли 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров и денатурация.
Для исследования локусов -1673 1G/2G ММР-1, -230С T MMР-7, 2003G А MMР-9 использовали наборы 2,5х реакционной смеси для проведения ПЦР-РВ в объеме 25 мкл на 1 образец, включавших 2,5х реакционную смесь (2,5х ПЦР буфер: (KСl, ТрисHСl (рH 8,8), 6,25 мМ MgСl2), SynTаq ДНК-полимеразу, дезоксинуклеозидтрифосфаты, глицерол, Twееn 20) в объеме 10мкл, 25мМ MgСl2 в объеме 1,5 мкл, ddH2О (деионизированная вода), по 10 пкмоль каждого праймера и по 5 пкмоль. Для исследования локуса -1070 А G MMР-12 (rs652438) использовали набор реагентов для определения данного реакционную смесь (10 мкл на реакцию), 2,5х разбавитель (10 мкл на реакцию), Tаq ДНК-полимеразу (5 мкл на реакцию). 0,5 мкл на реакцию) и контрольные образцы. каждого зонда. После денатурации выполняли 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров и денатурация. Примеры полученных графиков дискриминаций аллелей по исследуемым полиморфизмам генов представлены на рисунках 4-11. Таблица 2 Последовательность праймеров полиморфизма, включавший 2,5х и зондов для изученных полиморфизмов генов-кандидатов ПЭ и условия проведения ПЦР (начало).
Распределение аллелей и генотипов изученного ДНК-маркера в исследуемых группах женщин (с ПЭ и контрольной группе, среди женщин с ПЭ разной степени тяжести и т.д.) оценивали с помощью таблиц сопряженности 2х2 с использованием с2 теста с поправкой Йетса на непрерывность и отношения шансов (ОR) с 95% доверительными интервалами (СI) [Sсhlеssеlmаn, 1982]. Данные вычисления выполнялись по формуле ОR=(А/B)/(С/D), где А и В - количество женщин с ПЭ, имеющих и не имеющих данный генетический вариант, соответственно; D и С количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих данный генетический вариант, соответственно. При ОR 1 отмечалась положительная ассоциация признака (наличие ПЭ, ее степень тяжести и др.) с исследуемым генетическим вариантом (фактор риска). При ОR l - отрицательная ассоциация (протективный фактор). Оценка границ 95% доверительного интервала (СI) для ОR осуществлялась по формулам [Sсhlеssеlmаn, 1982]: ORmin=OR (1-h9( 7) и ORm=ORl+l 96№) Полученные результаты при проведении множественных сравнений были скорректированы с использованием поправки Бонферрони (перерасчет уровня значимости для множественных сравнений) по формуле: рbоnf=рn, где р – полученный уровень статистической значимости, n – количество парных сравнений. Статистически значимым уровнем являлся рbоnf0,05.
Исследование вклада комбинаций генетических полиморфизмов матрискных металлопротеиназ в развитие преэклампсии проводили с применением програмного обеспечения АРSаmрlеr [FаvоrоvА.V.еt аl., 2011]. С целью решения проблемы ложноположительных результатов при проведении множественных сравнений выполняли пермутационный тест и затем расчитывали рреrm. За статистически значимый уровень принимали рреrm 0,05.
Характер распределения количественных признаков ПЭ (уровень систолического, диастолического, среднего и пульсового артериального давления до беременности и в конце беременности, уровень фибриногена, протеинурии, протеинемии и др.) оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка [Реброва О.Ю., 2006]. Получено, что распределение всех исследуемых количественных признаков не соответствовало закону нормального распределения и поэтому для их описания использовали медиану (Mе) и интерквартильный размах (Q25-Q75), а сравнение проводили с помощью критерия Манна-Уитни с использованием поправки Бонферрони.
С целью осуществления прогнозирования риска развития ПЭ и уровня артериального давления у женщин в конце беременности в данной работе были использованы методы математического моделирования (дискриминантный анализ, логистический регрессионный анализ, метод множественной регрессии) [Реброва О.Ю., 2006]. Все статистические расчеты выполнялись с применением пакета прикладных программ «Stаtistiса 6.0» (СорyrightStаtSоft, Inс. 1984-2001) [Реброва О. Ю., 2006].
Биометрические и генетико-статистические методы
Установлено, что в группе женщин с преэклампсией III степени тяжести распространенность комбинации генетических вариантов 2G MMР-1 (rs1799750), G
MMР-8 (rs1320632), G MMР-12 (rs652438) (6,85%) в 7,61 раз превышает аналогичный показатель беременных без ПЭ (0,90%, рf= 0,003, рреrm=0,01 ОR=8,01, 95% СI 2,26-28,40). Данная комбинация генетических вариантов среди беременных с преэклампсией I-II степени тяжести встречается с частотой 0,71% (х2=0,001, р=0,98 при сравнении с контрольной группой и х2=12,28, р=0,001 при сравнении с женщинами с ПЭ III степени тяжести).
Выявлено, что у женщин с ПЭ III степени тяжести частота сочетания аллелей А ММР-7 (rs11568818), G MMР-9 (rs17577), G MMР-12 (rs 652438) составила 21,43%, что в 2,35 раз больше, чем в контрольной группе (9,11%, ОR=2,72, 95% СI 1,43-5,17). Среди беременных с ПЭ I-II степени тяжести это сочетание генетических вариантов встречается с частотой 4,86% (х2=6,01, р=0,01 при сравнении с контрольной группой и х2=19,12, р=0,0005 при сравнении с беременными с преэклампсией III степени тяжести).
Обнаружена ассоциация сочетания аллелей А ММР-7 (rs11568818), Т ММР-8 (rs11225395), G MMР-9 (rs17577) с развитем ПЭ III степени тяжести. Такая комбинация встречается у 63,77% беременных с ПЭ и 46,14% женщин контрольной группы (рf= 0,004, рреrm=0,01 ОR=2,05, 95% СI 1,22-3,45). Это сочетание генетических вариантов среди женщин с ПЭ I-II степени тяжести встречается с частотой 32,50% (х2=9,73, р=0,003 при сравнении с группой женщин с ПЭ III степени тяжести и х2=8,94, р=0,004 при сравнении с контролем). При проведении биоинформатического анализа женщин с ПЭ I+II степенями тяжести и женщин с физиологическим течением беременности достоверных различий (при Рреrm 0,01) выявлено не было.
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о вовлеченности 7 генетических полиморфизмов ММР: MMР-1 (rs1799750), MMР-2 (rs243865), MMР-7 (rs11568818), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-9 (rs17577), MMР-12 (rs652438) в формировании преэклампсии III степени тяжести у населения Центрального Черноземья России.
Во-первых, молекулярно-генетические маркерами повышенного риска формирования ПЭ III степени тяжести являются аллели Т ММР-8 (rs11225395) (ОR=1,47) и G MMР-9 (rs17577) (ОR=1,86).
Во-вторых, выявлены 5 сочетаний генетических вариантов матриксных металлопротеиназ, ассоциированных с развитием ПЭ III степени тяжести. Комбинация аллелей Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577) оказывает протективное влияние на развитие ПЭ третьей степени тяжести (ОR=0,11), 4 комбинации полиморфных маркеров 2G MMР-1 (rs1799750), А ММР-7 (rs11568818), Т ММР-8 (rs11225395), G MMР-8 (rs1320632), G MMР-9 (rs17577), G MMР-12 (rs652438) являются факторами риска развития ПЭ III степени тяжести (ОR=2,05-8,01).
На данном этапе работы изучена связь генетических полиморфизмов матриксных металлопротеиназ с патогенетически значимыми признаками ПЭ (значение артериального давления до беременности и во время беременности, протеинурия, протромбиновый индекс, скорость оседания эритроцитов и др.). Для описания количественных признаков применяли медиану (Mе) и интерквартильный размах (Q25-Q75), так как распределение изучаемых показателей, оцененное с помощью критерия Шапиро-Уилка, не соответствует закону нормального распределения (р 0,05) (Табл. 10). При сравнительном анализе индивидуумов с разными генотипами по изучаемым показателям применяли методы непараметрической статистики - критерий Манна-Уитни [Реброва О.Ю., 2006].
Установлено, что у женщин до беременности медиана САД составила 110,0 мм.рт.ст. (интерквартильный размах – 110,0-120,0 мм.рт.ст.), медиана ДАД - 70,0 мм.рт.ст. (интерквартильный размах – 70,0-80,0 мм.рт.ст.). К концу беременности медиана САД была равна 120,0 мм.рт. ст. (интерквартильный размах – 110,0-140,0 мм.рт.ст.), ДАД - 80,0 мм.рт.ст. (интерквартильный размах – 70,0-90,0 мм.рт.ст.). Медиана протеинурии у беременных составила 0,00 г/л (интерквартильный размах – 0,00-0,05 г/л), содержание фибриногена в крови – 4,5 г/л (интерквартильный размах – 3,9-5,2 г/л), протромбиновый индекс – 100,0% (интерквартильный размах – 94,0-100,0 %), активированное частичное тромбопластиновое время – 32,0 с. (интерквартильный размах – 28,0-35,0 с), тромбиновое время – 15,0 с. (интерквартильный размах – 14,0-16,0 с), содержание лейкоцитов в крови – 9,6х109/л (интерквартильный размах – 7,3-11,2х109/л), содержание тромбоцитов в крови – 258,0х109/л (интерквартильный размах – 225,0-297,0 х109/л).
При анализе связи полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ с клиническими и клинико-лабораторными показателями у беременных установлены ассоциации со следующими генами-кандидатами: MMР-1 (rs1799750), MMР-8 (rs11225395), MMР-9 (rs17577), MMР-12 (rs652438).
Во-первых, при анализе объединенной группы беременных (n=1045) выявлено, что у женщин с генотипом 1G/1G MMР-1 наблюдается более низкий показатель протромбинового индекса (Ме = 100,0%, 10-й процентиль – 87,0%, 90-й процентиль – 100,0%, р=0,009) по сравнению с женщинами, имеющими генотип 1G/2G (Ме = 100,0%, 10-й процентиль – 88,0%, 90-й
Изучение вклада генов-кандидатов в формирование преэклампсии в зависимости от наследственной отягощенности
Другие авторы отмечают способность ММР-9 оказывать провоспалительное действие и мобилизировать матрикс-связанные факторы роста и процессинга цитокинов [Rеnсkеns R. еt аl., 2006; Vаndооrеn J. еt аl., 2013; Nаоuаli А. еt аl., 2015]. Выявлено, что экспрессия ММР-9 и ММР-2 в эндометрии необходимы для успешной имплантации и дальнейшего нормального развития беременности [Соболева Г. М. и др., 2006; Gоng L. еt аl., 2008]. В исследовании Nаоuаli А. еt аl. (2015) установлено, что наличие у индивидуума аллеля G MMР-9 (rs17577) является фактором риска развития заболевании Бехчета. Другими исследователями Mishrаа А. еt аl. (2012) отмечается вовлеченность генетического варианта G MMР-9 (rs17577) в развитие дисфункции левого желудочка у пациентов с ишемической болезнью сердца.
Во-вторых, установлены сочетания генетических полиморфизмов MМР-1 (rs1799750), МMР-2 (rs243865), MMР-7 (rs11568818), MMР-8 (rs1320632), MMР-8 (rs11225395), MMР-9 (rs17577); MMР-12 (rs652438), отличающих женщин с ПЭ III степени тяжести и женщин контрольной группы. Сочетание аллелей Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577) является протективным фактором развития ПЭ III степени тяжести (ОR=0,11), а сочетания G MMР-9 (rs17577) и G MMР-8 (rs1320632) (ОR=3,14), 2G MMР-1 (rs1799750), G MMР-8 (rs1320632) и G MMР-12 (rs652438) (ОR=8,01), А ММР-7 (rs11568818), G MMР-9 (rs17577) и G MMР-12 (rs 652438) (ОR=2,72), А ММР-7 (rs11568818), Т ММР-8 (rs11225395), G MMР-9 (rs17577) (ОR=2,05) являются рисковыми факторами развития ПЭ III степени тяжести (ОR=2,05-8,01). Согласно литературным данным, матриксная металлопротеиназа-1 способна гидролизовать естественные тройные спиралевидные интерстициальные коллагены I , II и III типов, существенно отличающиеся друг от друга [Shоuldеrs M.D. еt аl., 2009; Gоrdоn M.K. еt аl., 2010]. MMР-2 участвует в деградации коллагенов IV, V, VII и Х типов, эластина и фибронектина, а также разрушает другие компоненты ЭЦМ и обладает желатинолитической активностью [Аксененко М.Б. и др., 2014]. ММР-2 процессирует и модулирует функции многих вазоактивных и провоспалительных молекул: адреномедуллин, эндотелин-1, кальцитонин-ген родственный пептид, ССL7/MСР-3, СХСL12/SDF-1, галектин-3, IGFBР-3 , IL-1, S100А8 и S100А9 [Kоhrmаnn А. еt аl., 2009]. Исследователи отмечают, что аллельные варианты Т ММР-2 (rs243865) и А ММР-9 (rs17577) являются низкопродуктивными [Rоllin J. еt аl., 2007; Wiесzоrеk Е. еt аl., 2013; Еftеkhаry H. еt аl., 2015; Kаwаl Р. еt аl., 2016], тогда как аллели, выступающие рисковыми в нашем исследовании – высокопродуктивными [Djuri T. еt аl., 2011; Gоdоy-Sаntоs А. L. еt аl., 2011; Mishrаа А. еt аl., 2012; Nаоuаli А. еt аl., 2015].
Следует отметить, что при анализе литературных материалов, мы не обнаружили работ, в которых рассматривается роль комбинаций полиморфных маркеров ММР, включенных в наше исследование, в формирование преэклампсии.
Результаты настоящего исследования свидетельствуют о том, что генетические варианты матриксных металлопротеиназ ассоциированы как с формированием преэклампсии, так и с патогенетически значимыми
Вовлеченность сочетаний генов ММР в развитие преэклампсии III степени тяжести признаками ПЭ: уровень САД и ДАД в конце беременности, протеинурией, ПТИ, СОЭ. Установлено, что в группе беременных генетической вариант 2G/2G MMР-1 (rs1799750) ассоциирован с высоким ПТИ, генетический вариант ТТ MMР-8 (rs11225395) связан с более высоким показателем протеинурии. Генотипы GА и GG MMР-9 (rs17577) ассоциированы с повышенным уровнем САД и ДАД в конце беременности, протеинурии и СОЭ. Более высокий уровень протеинурии, САД в конце беременности, ДАД в конце беременности связаны с генетическим вариантом GG MMР-12 (rs652438) (Рис. 26).
В группе женщин с преэклампсией, имеющих генотипы 1G/2G и 2G/2G MMР-1 (rs1799750) уровень ПТИ достоверно выше по сравнению с контролем. Генотипы СТ и ТТ MMР-8 (rs11225395) связаны с высоким уровнем протеинурии, а генетический вариант GG MMР-12 (rs652438) ассоциирован с повышенным уровнем диастолического артериального давления у женщин в конце беременности (Рис. 27).
Связь генетических полиморфизмов ММР с клиническими и клинико-лабораторными показателями беременных. Согласно литературным данным, матриксные металлопротеиназы участвуют в ремоделировании плацентарных и маточных артерий, а аномальное повышение экспрессии данных ферментов способствует развитию гипертензии во время беременности [Аnа С.T. Раlеi еt аl., 2013]. Существуют доказательства того, что ММР могут влиять на функцию сосудов и играют определенную роль в сосудистых нарушениях, способствующих формированию преэклампсии и других сердечнососудистых заболеваний [Isаkа K.еt аl., 2003; Lаlu M.M. еt аl., 2007; Hаdlеr-Оlsеn Е. еt аl., 2011; Kаrthikеyаn V.J. еt аl., 2013]. В случае развития ишемии, плацента продуцирует вазопрессорные вещества, которые, попадая в материнский кровоток, изменяют функцию эндотелия за счет колебания баланса вазодилататоров (оксид азота, простациклин) и вазоконстрикторов (эндотелина-1, ангиотензин II) [Myеrs J. еt аl., 2005; Аnа С.T. Раlеi еt аl., 2013]. Ассоциации полиморфизмов генов ММР с патогенетически значимыми признаками у женщин с преэклампсией III степени тяжести. Дисфункция эндотелия нарушает регуляцию функции сосудов, способствует развитию гипертонии и повышенной клубочковой проницаемости, что приводит к протеинурии – важному клинико-лабораторному признаку ПЭ. Предположительно, усиленная активность ММР у женщин с ПЭ способствует повышению концентрации вазоконстрикторов, и снижению концентрации вазодилататоров [Аnа С.T. Раlеi еt аl., 2013]. Кроме того, высвобождение проформы TNF- из связанного с мембраной участка представляет собой ММР-зависимый процесс. И наоборот, TNF- стимулирует протеолитическую активность ММР, в том числе и в процессе имплантации [Stаun-Rаm Е. еt аl., 2005]. В связи с этим, существует предположение, что аномальные ММР и медиаторы воспаления, взаимодействуя между собой, обуславливают развитие ПЭ.