Введение к работе
Настоящая работа посвящена изучению и поиску полиморфных л оку сов ДНК, пригодный для проведения ДНК-диагностики миодистрофии Дюшенна.
Актуальность темы В настоящее время разработаны технологии, позволяющие использовать полиморфные локусы ДНК для проведения ДНК-диагностики ряда наследственных заболеваний человека. Актуальной задачей является иследование эффективности имеющийся и поиск дополнительных полиморфных маркеров, сцепленных с геном, ответственным за возникновение миодистрофии Дюшенна. Миодистрофия Дюшенна - наиболее частое К-сцепленное рецессивное заболевание (Galjaard, 1986), которое встречается приблизительно у одного из 2500-4000 новорожденны:-: мальчиков и приводит к летальному исходу в возрасте до 20 лет (Emery, 1387). Обнаружение новых полиморфных маркеров позволяет разработать более эффективные и точные методики ДНК: диагностики заболевания.
Цель и задачи исследования. Целью работы являлись изучение и поиск полиморфных маркеров ДНК в районе гена, ответственного за возникновение миодистрофии Дюшенна. При этом ставились следующие основные задачи:
Провести анализ популяционных частот аллелей полиморфных маркеров, тесно сцепленных с локусом МДД.
Исследовать эффективность применения маркеров, тесно уцепленных с локусом МДД, при проведении ДНК-диагностики этого заболевания. На основе полученных данных выбрать наиболее «формативные маркеры и оптимизировать схему проведения косвенной ДНК-диагностики заболевания.
Разработать простой метод регистрация полиморфизма -іокуса pERT87-1/Mva I внутри гена дистролина путем амплификации : последующей рестрикцией.
Провести поиск полиморфизма длины рестрикционных фрагментов в 5" концевой области гена днстрофина.
Научная новизна. В ходе данной работы проведена оценка топуляционных частот аллелей ряда полиморфных маркеров, тесно
сцепленных с локусом МДД для контингента исследованных
семей. Впервые определена первичная последовательность ДНК
большей части зонда pERT87-1 и разработана методика проведения
косвенной ДНК-диагностики МДД с использованием
полиморфизма данного локуса на основе ПЦР.
Показано отличие в популяции нашей страны последовательности ДНК 5' концевой области гена дистрофина от последовательности клонированной кДНК (Koenig et al, 1987J и ее соответствие, геномной версии (Klannut et al, 1989).
Практическая ценность работы. Данные, полученные в ходе работы позволяют оптимизировать проведение ДНК-диагностики МДД и увеличивают информативность метода ПЦР с последующей рестрикцией при проведении ДНК-диагностики этого заболевания. Сформулирована стратегия проведения косвенной диагностики МДД с использованием изученных полиморфных маркеров. Применение полученных результатов позволяет повысить эффективность косвенной ДНК-диагностики заболевания и снизить ее стоимость.
Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на 1-ом и 2-ом Всесоюзных симпозиумах "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии" (Москва, 1990; Самарканд 1991); II Всесоюзном съезде медицинских генетиков (Алма-Ата. -1990).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 11Є страницах машинописного текста, содержит 2 таблицы и 17 рисунков. Список литературы включает 131 работу.