Введение к работе
Актуальность проблемы. Развитие современной биотехнологии требует разработки генно-инженерных конструкций для получения белков, которые полностью соответствуют природным аналогам с точки зрения их третичной структуры и гликозилирования.
Наиболее пригодны для этих целей эукариотические акспрессионные системы, в которых белки проходят естественный соматический процессинг. Векторные конструкции, использующие мощный репликативный аппарат РНК-содержащих вирусов, позволяют достигать значительных показателей выхода рекомбинантного продукта - от 10 до 25% от содержания белка в культивируемых клетках.
В своей работе мы занимались разработкой модельных рекомбинантных конструкций, содержащих гены env и gag вируса иммунодефецита человека на основе
^n.^r^unSup Нол прлИоннп интересовали КОНСТРУКЦИИ.
рр =
">y^^ia.o'JHaj-fe. паксииядкидй выдад, ц^_^|явы>
антигенов Env и Gag. Именно эти антигены актуальны не только с теоретической точки зрения, но и на практике и для создания диагностических препаратов. Они позволят повысить быстроту и точность анализа в сравнении с сегодняшними диагностическими тест-системами.
Кроме этого в работе исследована возможность получения иммунного ответа in vivo на целевые антигены Env и Gag после введения рекомбинантных РНК
Цели и задами исследования. Целью настоящей работы являлось получение рекомбинантных конструкций на основе вируса Синдбис, несущих в своем составе гетерологичные гены env и gag вируса иммунодефецита человека.
При достижении этой цели решались следующие задачи:
-
Конструирование рекомбинантной плазмиды pSIN/rep5/env, содержащей под промотором субгеномной РНК вируса Синдбис ген env вируса иммунодефицита человека.
-
Конструирование рекомбинантной плазмиды pSIN/rep5/gag, содержащей под промотором субгеномной РНК вируса Синдбис ген gag вируса иммунодефицита человека.
3. Получение вирусспецифического гуморального
иммунного ответа при введении лабораторным животным
текомбинантных РНК.
Научная новизна. Впервые получены рекомбинантныа конструкции с полными генами gag и env вируса иммунодефицита человека первого типа на основе вируса Синдбис. Осуществлена экспрессия генов env и gag в составе рекомбинантной РНК вируса Синдбис. Показан гуморальный иммунный ответ на вирусные антигены при введении лабораторным животным рекомбинантных РНК.
Практическая аначимость. Результаты диссертации приняты к использованию для создания тест-систем нового поколения и при получении рекомбинантных вакцин нового поколения в рамках Федеральной целевой программы "Вакцинопрофилактика" на УГ МПБП МЗ РФ.
Положения и результаты выносимые на защиту:
1. Впервые получены генно-инженерные конструкции
РНК-содержащего вируса с полными генами gag и env вируса иммунодефицита человека первого типа.
-
Получена рекомбинантная плазмида pSIN/rep5/env, содержащая под промотором субгеномной РНК вируса Синдбис ген env вируса иммунодефицита человека.
-
Получена рекомбинантная плазмида pSIN/rep5lgag, содержащая под промотором субгеномной РНК вируса Синдбис ген gag вируса иммунодефицита человека. '.
4. Впервые осуществлена экспрессия генов env и gag
в составе рекомбинантной РНК вируса Синдбис.
5. Показан гуморальный иммунный ответ при
иммунизации лабораторных животных рекомбинантными
РНК SIN/rep5/env и pSIN/rep5/gag.
Апробация работы. По ходу выполнения
исследований результаты для обсуждения
представлялись на научных конференциях: 2-ая
международная конференция "СПИД, рак и ретровирусы человека" 1993 г. С-Петербург, 3-я международная конференция "СПИД, рак и связаные проблемы" 1995 г. С-Петербург, Augustusburg conference of advanced science "Viral infections in Pregnancy", 1997, Augustusburg, Saxony, Germany.
Публикации. По материалам диссертации
опубликовано 4 работы, перечень которых представлен в конце автореферата.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на
87 страницах машинописного текста и состоит из
введения, обзора литературы, описания материалов и
методов исследования, результатов и обсуждения
экспериментальных исследований и библиографического
указателя, включающего 121 источник. Работа