Введение к работе
Актуальность проблемы. Иобилыше элементы дрозофилы представляет собой обиирнуо группу, в которую входят представител:. многих семейств. Около 10% генома D.melanocaste- поктодитсу на мобильные элементы. Многие из чих активі'і транскрибируется и играют важную роль в мутагенезе у дрозо*"'.^- (Около 70 спонтанных мутация V D.melanogaster вызвано Ъгобильными элементами.)
Мобильные элементы типа LINE (Long Interspersed Nuclear Elements), обнаруженные у Drosophila melanogaster, являются иироко
распространенной группой, представители которой обнаружены у многих
4 5 эукариот. Количество их в геноме сильно варьирует, от 10-10 копий
.1 з геноме крысы до 30-40 копия 1-злемента у D:melanogaster.
Структурная организация LINE принципиально отличается от других
«юбильных элементов тем, что они не содержат повторов на концах,
эднако имеют А-богатую. последовательность и предшествуюиия ея
:игнал для полиаденилирования на 3' конце. В геноме копии LINE
жружены дупликацией коротких последовательностей хозяйской ДНК.
Зсе это позволяет отнести LINE к ретропозонам - геномным
юследователькостям,образовавшимся путем внедрения в геном копия
IHK, синтезированых на РКК путем обратной транскрипции. Однако
фямых данных, подтверждавших, что транспозиция LINE происходит
ерез транскрипцию и обратную транскрипцио пока не получено, что
:вязано в первуг очередь с трудностями в изучении транскрипции
.INE. Изучение транскрипции LINE является зажним не только для
[снимания механизма их транспозиции, но и для понимания обідих
;акономерііостей" транскрипции в клетках эукариот.
Цель работн. В данной' работе мы ставили задачу
'характеризовать новая мобильный эламент дрозофилы жокея,
ітносясийся к ретропозонам типа LINE, изучить его структурную
организации, распространенность у различных видов дрозофилы и механизм его транскрипции.
Научная новизна- и практическая ценность 'работы. Изучена структурная организация и распространение двyx^ типов копий мобильного элемента жокея у различных видов дрозофилы- Обнаружено два типа транскриптов жокея, содержащихся в поли(А)+-РНК. Установлено направление транскрипции жокея и доказано, что транскрипты начинается внутри последовательностей мобильного элемента на расстоянии нескольких нуклеотидов от его 5'-конца. Путем анализа созданных конструкций, содержащих ген хлорамфениколацетилтрансферазы без промотора с присоединенными к нему 5'-концевой последовательностью одной из копий жокея с прилежащей к ней клеточной последовательностью, усеченными в различой степени слева, однозначно установлено, что транскрипция жокея целиком контролируется его внутренним промотором. Таким образом впервые для LINE установлено наличие внутреннего промотора. Показано, что жокеи транскрибируется РНК-полимеразой II, что является первым случаем, когда транскрипция гена, имеющего внутренний промотор осуществляется этой полимеразои.
Прдученные данные и использование методические подходы позволяют осуществить более детальное изучение других LINE элементов-
Апробация работы. Основные научные результаты диссертации докладывались на Вколе по молекулярной биологии, (Усть-Нарва, 1968) и на совещании молодых ученых по применению иолекулярно-биологически методов в репении проблем биологии развития (Москва, 19671.
Публикации. По теме диссертации опубликовано б печатных работ.
Структура и об-ьеи работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, изложения результатов, их обсуждения, выводов и списка цитированной литературы (150 ссылок). Диссертация изложена на 100 страницах машинописного текста, содержит 13 рисунков и 1 таблицу.