Введение к работе
Актуальность темя. Успех селекционной рабаты в значительной степени зависит от точности определения племенной ценности генотипа животных. В связи с этим особенно возрастает значение разработки методов, позволяющих более обоснованно и своевременно выявлять лучших животных, прогнозировать их племенные и продуктивные качества в раннем возрасте и в процессе трансплантации эмбрионов. Известно, что генетические варианты по полиморфным системам белков молока связаны с некоторыми показателями молочной продук-
тивности, в частности полокусам каппа-казеина и бета-лактоглобу-лина ( Жебровский Л.С, 19??; Митвтько В.Е. ,1990; Комиссаренко А.Д,,1994: Ng-Kwai-Hang K.F.,1984; Gonyon D.C. et al, 198?). Изучение частоты аллелей и генетических вариантов по этим локусам представляет научный и практический интерес, так как гомозиготная форма В-аллели к-казеина в молоке связана с выходом сыра и его качеством (Korini D. et al, 1979; Marzlali A.S et al, 1986; McLe-
'ari D.M. et al, 1989). В молоке эти аллели могут быть легко определены с помощью электрофореза белков, но для проведения генетического анализа и эффективной селекционной работы необходимо тестировать быков-производителей и молодых животных, для чего целесообразнее применять молекулярно-генетические подходы, в частности анализ полиморфизма ДНК (Яковлев А.Ф., 1987; Сулимова Г.Е., 1993; Couan СМ. et al, 1992).
В последнее время в "литературе появились сообщения об использовании методов молекулярной генетики для оценки генотипа по локусам каппа-казеина, бета-казеина и определения пола эмбрионов, в частности на эмбрионах крупного рогатого скота. Hochnan P. et al (1994) использовали для определения пола эмбрионов крупного рогатого скота, полученных путем оплодотворения in vitro, метод поли-меразной цепной реакции.
Одна из малоизученных областей современной генетики животных является изучение распространенности наследственных болезней и разработка методов их диагностики. Дефицит адгезии лейкоцитов (Bovine Leucocyte Adhesion Deficiency-BLAD)- наследственная ауто-сомальная рецессивная болезнь, обусловленная точечной мутацией в кодирующей части гена СДІ8. Мутация связана с пониженной резистентностью потомков к бактериальным инфекциям. Частота D128G аллеля
среди быков голатинской породы .в СМЛ составила і5/i, а среди коров 67. Ежегодный экономический ущерб, наносимый данной болезнью, определили в пределах пяти миллионов долларов США (Shus'ter D.E. et al 1932; Gilbert R.O et al, 1ЭЭЗ).
Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось изучение частоты различных аллелей генов, определяющих белковый состав молока и мутации BLAD, связанной с резистентностью к заболеваниям у быков-производителей,
Были поставлены следующие задачи: -разработать технологии ПЦР длягенотипирования быков-производителей и предимплантационных эмбрионов, -изучить частоту отдельных типов каппа-казеина, бета-лактоглобу-лина и BLAD среди быков голштинской и черно-пестрой пород, -сделать попытку провести анализ связей изученных аллелей с хозяйственно полезными признаками животных.
Научная новизна работы. Впервые на основе использования ДНК криоконсервированного семени и метода полимеразной цепной реакции установлена частота генов каппа-казеина и бета-лактоглобулина и проведена паспортизация быков-производителей в популяциях черно-пестрой и голатинской пород Ленинградской области. Частота генетических вариантов каппа-казенина АА, АВ и ББ соотвественно составила 28,0. 67,0% и 57, бета-лактоглабулина - 20Х, 57/І и 23/i. Показано отсутствие среди исследуемых быков носителей мутации СД 128Є, связанной с пониженной резистентностью к заболеваниям. Разработана технология генотипирования предимплантационных эмбрионов по изучаемым генам,
Практическая значимость работы. Результаты аттестации быков используются в селекции. Показана возможность генотипирования эмбрионов по типам вакных в хозяйственном отношении генов перед трансплантацией,
Апробация работы. Результаты исследований неоднократно докладывались на аспирантских сессиях ВНИИГРЙ (.1992-1994), Ученом совете ВНИИГРМ (1992-1994), на-международном симпозиуме "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с-х животных" (Санкт-Петербург, 19S4) и получили положительную оценку.
Публикации. По результатам исследований опубликовано 5 печат
ных работ, . '
->
Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материала и методики исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов и предложений производству и списка литературы, включающего 172 источника, в.т.ч. 118 на иностранных языках. Работа изложена на из страницах, содеряит 15 таблиц,14 рисунков.