Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1 Ренин-ангиотензин-альдостероновая система (РААС) 9
1.2 Эндотелиновая система 24
1.3 Тромбоцитарный рецептор - интегрин IIb3 31
1.4 Влияние изучаемых полиморфизмов на эффективность медикаментозного лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы .. 33
Глава 2. Материал и методы исследования 37
Глава 3. Результаты и обсуждение 44
3.1. Распределение аллелей и генотипов по полиморфизмам генов ангиотензинового звена РААС среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России 44
3.2. Распределение аллелей и генотипов по полиморфизмам генов эндотелиновой системы среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России 60
3.3. Распределение аллелей и генотипов по полиморфизму Leu33Pro гена ITGB3 тромбоцитарного рецептора фибриногена среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России 69
3.4. Особенности распределения минорных генотипов по полиморфизмам генов ACE, AGT, AGTR1, EDN1, EDNRA и ITGB3 среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России 73
Заключение 78
Список сокращений 80
Список литературы 81
- Тромбоцитарный рецептор - интегрин IIb3
- Влияние изучаемых полиморфизмов на эффективность медикаментозного лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы
- Распределение аллелей и генотипов по полиморфизмам генов эндотелиновой системы среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России
- Распределение аллелей и генотипов по полиморфизму Leu33Pro гена ITGB3 тромбоцитарного рецептора фибриногена среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России
Введение к работе
Актуальность проблемы. Заболевания сердечно-сосудистой системы (ССЗ)
представляют собой группу мультифакториальных болезней, занимающих
лидирующие места среди причин смертности. Так, по данным Всемирной
организации здравоохранения с ними связано более 30% смертельных исходов в
мире и 14,6% - в арабских странах [ВОЗ 2011; Mokdad A.H. et al., 2014].
Генетическая компонента играет значительную роль в их развитии, в связи с чем в
последние годы активно ведутся исследования, посвященные идентификации
генов-кандидатов, ассоциированных с ССЗ. Ряд проектов, направленных на
изучение генома человека, в числе которых The SNP Consortium (TSC), the Human
Genome Project (HGP), Hap Map project и The 1000 Genomes projects, позволили
выявить новые гены, локализовать SNP (Single Nucleotide Polymorphism) в геноме
человека и создать информативные базы данных, способствующие дальнейшему
изучению полиморфизмов, ассоциированных с различной патологией
(Sachidanandam J.B. et al., 2001; 1000 Genomes Project Consortium, 2010; Christopher
J. et al., 2011; Robert R. et al., 2013). Среди генных полиморфизмов,
ассоциированных с развитием и прогрессированием ССЗ, ведущие позиции
занимают полиморфные варианты генов ренин-ангиотензин-альдостероновой
(РААС) и эндотелиновой систем, а также тромбоцитарного рецептора
фибриногена, вовлеченных в регуляцию деятельности сердечно-сосудистой
системы. К настоящему времени накоплено множество данных об ассоциации
полиморфизмов указанных генов с инфарктом миокарда, артериальной
гипертензией, гипертрофией левого желудочка, гипертрофической
кардиомиопатией, сосудистыми осложнениями сахарного диабета (Yanagisawa M.,
1988; Jeunemaitre X., 1992, 1993; Bonnardeaux A., 1994; Moiseev V.S. et al., 1997;
Моисеев В.С. и соавт., 2001; Кобалава Ж.Д. и соавт., 2002; Mustafina О.Е. et al.,
2002; Pousada G. et al., 2015). Также в последние годы появились работы,
посвященные изучению эффективности медикаментозного лечения пациентов с
различными генотипами по указанным генам (Cooper-DeHoff R.M. and Johnson J.A.,
2016). Однако данные достаточно противоречивы (Meroufel D.N. et al., 2014;
Fragoso J.M. et al., 2015), что может быть обусловлено существенным влиянием
средовых факторов на проявление полиморфизмов. Вместе с тем, анализ
литературы показал, что исследования, направленные на изучение полиморфизмов, ассоциированных с развитием патологии сердечно-сосудистой системы, среди арабского населения Алжира и Сирии крайне малочисленны, и данный вопрос требует более детального изучения.
Цель исследования. Изучить встречаемость полиморфизмов,
ассоциированных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы, среди населения Алжира и Сирии и сравнить полученные результаты с таковыми среди русских из Центральной России.
Задачи исследования
-
Исследовать частоты аллелей и генотипов по полиморфизмам T174M и M235T гена ангиотензиногена, I/D гена ангиотензин-превращающего фермента и А1166С гена рецептора к ангиотензину II среди населения Алжира, Сирии и русских из Центральной России.
-
Изучить встречаемость аллелей и генотипов по полиморфизмам Lys198Asn гена эндотелина и H323H гена ЕТА-рецептора к эндотелину-1 среди алжирцев, сирийцев и русских.
-
Определить частоты аллелей и генотипов по полиморфизму Leu33Pro гена ITGB3, кодирующего интегрин 3, являющийся компонентом тромбоцитарного рецептора фибриногена, в выборках из популяций Алжира, Сирии и Центральной России.
-
Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов по исследуемым полиморфизмам среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России.
Научная новизна работы. Впервые исследована встречаемость
полиморфизмов генов ангиотензинового звена РААС и гена ITGB3 среди
арабского населения Сирии и алжирских берберов.
Впервые изучено распределение полиморфизмов генов эндотелиновой
системы (Lys198Asn гена эндотелина и H323H гена ЕТА-рецептора) в популяциях Сирии и Алжира.
Впервые определена встречаемость аллелей и генотипов по полиморфизму H323H гена ЕТА-рецептора к эндотелину-1 среди русских Центральной России.
В результате проведенного в выборках из популяций Алжира и Сирии
сравнительного исследования выявлены отличительные особенности в
распределении аллелей и генотипов по изученным полиморфизмам,
ассоциированным с сердечно-сосудистыми заболеваниями.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные в рамках
представленной работы данные о встречаемости полиморфизмов генов
эндотелиновой системы и ангиотензинового звена РААС, а также гена ITGB3 среди населения Алжира, Сирии и русских Центральной России могут быть использованы для формирования групп сравнения при проведении клинических исследований, направленных на выявление ассоциации данных полиморфизмов с мультифакториальными заболеваниями человека. Результаты диссертационного исследования также могут оказаться полезными для персонифицированной медицины и разработки индивидуального подхода к тренировкам с целью достижения высоких спортивных результатов и подбора оптимальной физической нагрузки для спортсменов, принадлежащих к различным этническим группам. Выявленные особенности генетической структуры популяций Алжира и Сирии по изучаемым полиморфизмам представляют определенный интерес не только для медицинской, но и для эволюционной генетики.
Методология и методы диссертационного исследования. Для
определения встречаемости изучаемых в рамках настоящей работы генных
полиморфизмов проводилось генотипирование методом полимеразной цепной
реакции с последующей электрофоретической детекцией результатов.
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программ «Microsoft Excel» и «R language» (R Core Team, 2015).
Положения, выносимые на защиту
1. Частоты аллелей и генотипов по генам ACE, AGT и AGTR1
ангиотензинового звена РААС, генам EDN1 и EDNRA эндотелиновой системы, а
также гена ITGB3 тромбоцитарного рецептора фибриногена имеют этнические и
популяционные особенности.
2. Наиболее значимыми из анализируемых генетических факторов,
вовлеченных в формирование предрасположенности к развитию сердечно-
сосудистых заболеваний, у населения арабских стран являются аллели D гена ACE, 235Т гена AGT и C гена EDNRA.
3. Для русских из Центральной России наиболее характерными минорными аллелями, ассоциированными с патологией сердечно-сосудистой системы, являются аллели D гена ACE и 235Т гена AGT. Вместе с тем, частота аллеля D в данной этнической группе значимо ниже, чем среди жителей Алжира и Сирии.
Степень достоверности. Достоверность результатов исследования
подтверждается достаточным объемом проведенных исследований (1190), применением современных технологий генотипирования и использованием методов статистической обработки данных, полностью соответствующих поставленным задачам.
Апробация результатов диссертации. Материалы диссертации доложены
на научных конференциях: «Современная парадигма научного знания» (Москва,
2014 г.), «Проблемы профилактической и восстановительной медицины» (Москва,
2014 г.), «Рецепторы и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2015 г.),
Science4health (Москва, 2015 г., 2016 г.) и заседании кафедры биологии и общей генетики медицинского института РУДН (2016 г.).
Внедрение результатов в практику. Результаты представленной работы внедрены в учебный процесс при изучении дисциплины «Биология» на кафедре биологии и общей генетики и дисциплины «Патофизиология» на кафедре общей патологии и патологической физиологии медицинского института ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов».
Публикация результатов исследования. По материалам исследования опубликовано 14 научных работ, из них 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации для публикации результатов диссертационных исследований.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения и списка литературы. Работа изложена на 131 странице машинописного текста, содержит 15 рисунков и 22 таблицы. Библиография включает 393 источника российской и зарубежной литературы.
Тромбоцитарный рецептор - интегрин IIb3
К настоящему времени выявлено несколько полиморфных вариантов гена AGT, однако наиболее активно изучаются полиморфизм М235Т (NCBI SNP ID: rs699), приводящий к замене метионина (М) в 235-м положении на треонин (Т) в результате нуклеотидной замены T C, и полиморфизм T174M (NCBI SNPID: rs4762) с заменой треонина (Т) в 174-м положении на метионин (М) вследствие нуклеотидной замены C T (Рис. 2). Оба полиморфизма расположены во 2-м экзоне. Следует отметить, что, хотя указанные выше названия данных полиморфизмов наиболее распространены, в связи с изменением нумерации аминокислот белка ангиотензиногена, полиморфизм M235T теперь обозначается как M268T, а T174M как T207M [NCBI/SNP].
Обнаружено, что M235T ассоциирован с повышением уровня AGT в плазме на 10-20% [Jeunemaitre X. et al, 1992; Corvol P. et al., 1999; Balam-Ortiz E. et al., 2011]. Но в связи с тем, что аминокислота 235 расположена далеко от сайта расщепления ренином, молекулярный механизм, участвующий в повышении уровня AGT в плазме объясняется лишь вариантом AGT 235T, т.к. предполагается, что вариант А полиморфизма A/G в точке -6 промоторной области гена AGT находится в неравновесном сцеплении с 235T и повышает концентрацию ангиотензиногена в плазме, влияя на транскрипцию гена [Nakajima T. et al., 2002; Kumar A., 2005; Jeunemaitre X., 2008; Alves A.J.et al., 2010]. Частота полиморфизмов T174M и M235T гена AGT варьирует в различных популяциях. Обнаружено, что аллель 174М встречается довольно редко: 0,111 и 0,205 у корейцев и китайцев, соответственно, 0,125 у белых европейцев, 0,048 у афроамериканцев и 0,041 среди населения субсахарской Африки [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=4762]. При изучении полиморфизма M235T гена AGT в ряде популяций было отмечено, что частота аллеля 235T повышена у африканцев (0.8 - 0.96) [Kooffreh et al., 2013] и японцев (0.65 - 0.75) [Hata A. et al., 1994; Ishigami et al A., 1995], и умеренна у немцев (0.36) [Mondry A. et al., 2005] и других белых европейцев (0.40). [Corvol P.et al., 1999]. Распространенность аллелей 235T и 174Т в большинстве человеческих популяций и наличие 235T аллеля у приматов, объясняется тем, что они являются предковыми аллелями [http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi?rs=4762; Corvol P. et al., 1999; Nakajima T. et al., 2002; Nakajima T. et al., 2004]. Renner W. и соавт. (2005) полагают, что предковый гаплотип 235T/174Т ассоциирован с повышенной концентрацией ангиотензиногена, но не с повышенным АД или с ишемической болезнью сердца (ИБС). Большинство ученых, в том числе Corvol Р. и соавт., предполагают, что если эти предковые аллели связаны с повышенной активностью РААС, они могли бы обеспечить преимущество в сохранении соли, регулировании объема жидкости в организме и АД в тот период эволюции человека, когда доступ к соли был ограничен [Corvol P. et al., 1999; Nakajima T. et al., 2002].
Безусловный интерес для исследователей представляет также тот факт, что полиморфизм М235Т AGT ассоциирован со склонностью к определенным видам физической активности [Karjalainen J. et al ., 1999; Gomez-Gallego F. et al., 2009; Zarbska A. et al., 2013; Ahmetov I.I. and Fedotovskaya O.N., 2015]. В ряде исследований было показано, что аллель Т определяет способность выдерживать нагрузки, требующие демонстрации скорости и силы среди элитных испанских и польских спортсменов [Gomez-Gallego F. et al., 2009; Zarbska A. et al., 2013]. Однако в других работах наличие подобных ассоциаций опровергается [Bae J.S. et al., 2007]. Возможной причиной неоднозначных результатов может быть как недостаточное количество проведенных исследований, так и наличие определенных популяционных и этнических особенностей. Jeunemaitre Х. и соавт. впервые выявили связь молекулярных вариантов M235T и Т174М гена AGT с гипертензией среди европеоидов [Jeunemaitre X. et al., 1992]. В дальнейшем была обнаружена корреляция между наличием в генотипе аллеля 235Т и атеросклерозом коронарных сосудов и ИБС [Van Rijn M.J. et al., 2007]. Также было показано, что аллель 235Т ассоциирован с эссенциальной гипертензией (ЭГ) у представителей различных этнических групп, в том числе у японцев [Hata A. et al., 1994], китайцев, жителей Европы, Египта, Малайзии и России [Martinez E. et al., 2002; Yugaroledo J.C. et al., 2011; Say Y.H. et al., 2005; Сaprioli J. et al., 2008; Ji L.D. et al ., 2010; Обыденникова О.Н., 2010; 2011., Муженя Д.В. и соавт., 2010; AbdeRaboh N.R. et al., 2012; Shamaa M.M. et al., 2015]. В работах Газизовой Р.Г., проведенных в Татарстане, было выявлено, что частоты аллелей AGT 174М и 235Т повышены у русских по сравнению с татарами. Кроме того, показана ассоциация данных аллелей с развитием артериальной гипертензии преимущественно у русских [Газизова Р.Г., 2007]. Также была выявлена ассоциация аллеля 174М с риском развития ЭГ у адыгов [Калакуток З.Н. и соавт., 2002], у русских и татар, проживающих в Башкортостане [Mustafina O.E. et al., 2002] и у женщин из Индии [Mohana V.U. et al., 2012]. Вероятно, что наибольшее влияние T174M оказывает на риск развития гипертонии у азиатов и в предковых популяциях [Pereira T.V. et al., 2008]. Mehri S. и соавт. показали в исследовании, проведенном среди страдающих артериальной гипертонией жителей Туниса, что аллель Т235 гена AGT, аллель D гена ACE и аллель С 1166 гена AGTR1 связаны с ЭГ и что, комбинация аллеля D с ожирением является независимым фактором гипертензии [Mehri S. et al., 2012]. Однако существует ряд исследований, не обнаруживших ассоциации М235Т и/или Т174М c гипертензией среди жителей Ливана [Saab Y.B. et al., 2011], Алжира [Amrani A. et al., 2014] и европейцев [Glavnik N. et al., 2007]. Аналогичный результат был получен и при изучении выборок афроамериканцев, несмотря на то, что частота аллеля 235T среди них весьма высока (0,8-0,9) [Kooffreh M.A. et al., 2013].
Изучая выборку из 422 больных из Новой Зеландии, Katsuya Т. и соавт. показали, что аллель 235Т является независимым фактором риска ишемической болезни сердца (ИБС) и примерно в два раза повышает риск этого заболевания [Katsuya T. et al 1995]. В работе Нгуен Т.Ч. и Шкурат Т.П. была установлена ассоциация 235Т и 174М полиморфных вариантов AGT с ИБС у русских, проживающих в Ростове-на-Дону [Нгуен Т.Ч. и Шкурат Т.П., 2010], подобные результаты были выявлены у тунисцев [Abboud N. et al., 2010] и китайцев [Li X. et al., 2013a]. Shakeri O.G. и соавт. также установили связь минорного аллеля 235Т с ИБС у больных из Египта и Испании [Rodriguez Perez J.C. et al., 2001; Shakeri O.G. et al., 2009]. В исследовании, проведенном среди японцев, показано, что комбинация 235Т аллеля гена AGT и D аллеля гена АСЕ является независимым прогностическим фактором инфаркта миокарда (ИМ) [Kamitani A. et al., 1995]. В мета-анализе включающем 21 исследование, было выявлено, что 235Т является прогностическим фактором ИМ среди азиатов [Wang Y.J.et al., 2014]. Goldenberg I. и соавт. показали, что 235Т значительно влияет на проявление периодических коронарных событий у афроамериканцев, перенесших ИМ [Goldenberg I. et al., 2006]. Также обнаружено, что аллель 174М ассоциирован с атеросклерозом коронарных сосудов [Spiridonova M.G. et al., 2001].
Влияние изучаемых полиморфизмов на эффективность медикаментозного лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы
Эффективность лекарственной терапии ССЗ зависит от многих факторов, к числу которых относятся и генетические. Многочисленные исследования показали, что определенные полиморфизмы отвечают за взаимодействие с некоторыми лекарственными препаратами, эффективность которых варьирует в различных популяциях и этнических группах [Cascorbi I.et al., 2004; Johnson J.A., 2008; Johnson J.A., 2010; Beitelshees A.L. and Zineh I., 2010; Konoshita T., 2011; Anwar M.S. et al., 2015; Cooper-DeHoff R.M. and Johnson J.A., 2016]. Так, было отмечено, что европеоиды лучше реагируют на применение ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента по сравнению с пациентами африканского происхождения [Johnson J.A., 2008]. Исследования, проведенные в Университете Питтсбурга, показали, что более высокие дозы ингибиторов АСЕ или бета-блокаторов снижают риск смертности у пациентов с сердечной недостаточностью, имеющих генотип DD по гену ACE, так как данный генотип ассоциирован с повышенным уровнем АСЕ в плазме. [McNamara D.M. et al., 2001; Murphy G.A.et al., 2010; Taylor M.R. et al., 2014]. Сравнительное исследование 1196 европеоидов из когорты Studies Of Left Ventricular Dysfunction (SOLVD) и 800 африканцев выявило, что во второй группе эффективность ингибитора АСЕ эналаприла ниже при применении его с целью профилактики сердечной недостаточности [Exner D.V.et al., 2001]. Однако причиной таких этнических особенностей может быть влияние сразу нескольких полиморфизмов [Taylor M.R. et al., 2014], Так, было показано, что генотип T235T не только ассоциирован с эссенциальной гипертензией у жителей Северной Индии, но и с большей эффективностью применения эналаприла у этих пациентов [Srivastava K. et al., 2012].
Частота аллеля 1166C понижена среди африканцев, и при этом используются более низкие дозы блокаторов рецепторов к ангиотензину II. Канадские ученые показали, что кандесартан (candesartan) более эффективен для европеоидов с сердечной недостаточностью, несущих аллель 1166С [de Denus S. et al., 2008; Fiuzat M., Bristow M.R., 2011]. Также было показано, что лозартан значительно уменьшает миокардиальную жесткость у гипертоников с генотипом А1166А [Diez C. et al., 2003].
В исследовании, проведенном на пациентах с сердечной недостаточностью из когорты Beta-Blocker Evaluation of Survival Trial (BEST), было выявлено, что аллель 198Asn гена EDN1 понижает эффективность бета-блокатора буциндолола, и это объясняется тем, что полиморфизм Lys198Asn гена EDN1 ассоциирован с повышенным уровнем ЕТ-1 в плазме [Taylor M.R.et al., 2009].
В то же время, существуют некоторые работы, опровергающие существование этнических особенностей, влияющих на эффективность лекарственной терапии. Мета-анализ, базирующийся на 15 исследованиях выявил, что примерно 80-95% европеоидов и африканцев демонстрируют схожий ответ на часто используемые гипотензивные средства [Sehgal A.R., 2004].
Также значительное внимание было уделено изучению влияния полиморфизма Leu33Pro гена ITGB3 на эффективность некоторых антиагрегантов, таких как аспирин и клопидогрел. У тунисских пациентов с ИБС, принимающих аспирин и гомозиготных по аллелю Leu33, наблюдалась гиперактивность тромбоцитов [Abderrazek F.et al., 2010]. Также была показана ассоциация Leu33Pro с резистентностью к аспирину [Goodman T. et al., 2008]. Кроме того, аллель 33Pro отрицательно влияет на антитромботическое действие аспирина [Undas A. et al., 2001]. Однако, проведя мета-анализ, Floyd C.N. и соавт. не нашли ассоциации между аллелем 33Pro и резистентностью к антитромботическим препаратам как у здоровых людей, так и у пациентов с ССЗ [Floyd C.N.и A. Ferro, 2014].
Таким образом, ренин-ангиотензин-альдостероновая и эндотелиновая системы, а также факторы, обеспечивающие гемостаз, включая тромбоцитарный рецептор к фибриногену, являются важнейшими регуляторами деятельности сердечно-сосудистой системы. Изменение одного или нескольких их компонентов может способствовать развитию ССЗ или их осложнений, а также влиять на эффективность терапии данных заболеваний. В настоящее время известно, что распределение аллелей и генотипов по полиморфизмам генов, кодирующих звенья РААС и эндотелиновой системы, имеет явно выраженные этнические особенности. Подробный анализ литературных данных выявил, что, несмотря на масштабные исследования, проводимые всему миру, сведений о генетических аспектах предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям среди населения арабских стран явно недостаточно. Клинико-генетические исследования, посвященные молекулярно-генетическим основам ССЗ у арабского населения Сирии и Алжира немногочисленны и затрагивают, в основном, гены системы РААС, в то время как работ, направленных на изучение генных полиморфизмов эндотелиновой системы, не проводилось. В этой связи несомненно интересным и актуальным представляется изучение встречаемости среди населения Алжира и Сирии полиморфизмов генов ренин-ангиотензиновой и эндотелиновой систем и тромбоцитарного рецептора к фибриногену в сравнении с соответствующими показателями у русских из Центральной России.
Распределение аллелей и генотипов по полиморфизмам генов эндотелиновой системы среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России
Статистический анализ выявил достоверные отличия между берберами и сирийцами (Р=0.018), однако при сравнении алжирских и сирийских арабов, несмотря на явную тенденцию, отличие показателей статистически значимого порога не достигло (Р= 0.086). Алжирские арабы и берберы также между собой не отличаются (Р=0.196), что, возможно, обусловлено отсутствием жесткой изоляции между разными этническими группами алжирцев.
При сравнении частот аллелей в исследованных группах, достоверных отличий русских от алжирцев (Р=0.8277) и от сирийцев (Р=0.3105) обнаружено не было, в случае алжирцев и сирийцев некая тенденция есть, но она не достигает статистически значимого уровня (Р=0.1479). Таким образом, во всех изучаемых популяциях частота аллеля Т существенно превышает встречаемость аллеля М, что соответствует литературным данным.
Распределению аллелей и генотипов по данному полиморфизму посвящено много исследований, проведенных в России, в том числе в Москве и Курске [Туракулов Р.И. , 1998; Чистяков Д.А. и соавт., 1999; Бабунова Н.Б., 2004; Ушачев Д.В., 2011]. Полученные нами результаты в группе русских из Центральной России полностью согласуются с литературными данными.
Встречаемость аллеля М у сирийцев ниже, чем в двух других группах, и, поскольку нами впервые было изучено распределение данного полиморфизма среди сирийцев, можем лишь отметить, что его частота колеблется в диапазоне, характерном для афроамериканских популяций (0.048-0.08). В единственном исследовании, проведенном в северо-западном Алжире, распределение генотипов ТТ, ТМ, и ММ (55.8%, 19.4%, 24.7%, соответственно) отличается от полученного нами (75%, 23.21% и 1.79%), что может быть обусловлено тем фактом, что исследованная нами выборка включает арабов и берберов – выходцев, в основном, из восточного Алжира. В то же время наши результаты соответствуют данным, полученным при исследовании жителей Италии [Fatini C. et al., 2000] и Франции [Tiret L. et al., 2000], а также кореных жителей ОАЭ [Frossard P.M.et al.,1998].
При анализе распределения генотипов по полиморфизму М235Т гена AGT наблюдается отсутствие в изучаемых выборках отклонений от популяционного равновесия Харди—Вайнберга (Р 0.05) (табл. 8).
Исследование частот генотипов по полиморфизму М235Т показало, что среди алжирцев и сирийцев встречаемость гетерозигот превышает частоту гомозигот, и это особенно выражено у сирийцев (44.64% и 54%, соответственно). Однако среди русских из Центральной России гомозиготы ММ встречаются чаще гетерозигот и гомозигот ТТ (табл. 9). Таблица 8
Проанализировав литературные данные, мы не нашли информации о встречаемости аллелей по полиморфизму М235Т среди сирийцев. Но в городе Оране, расположенном в северо-западном Алжире, было проведено исследование среди мужчин и обнаружено, что частоты генотипов ММ, МТ и ТТ составляют 28.4%, 47.7% и 23.9%, соответственно [Meroufel D.N. et al., 2014], что полностью согласуется с полученными нами результатами. Вместе с тем, данные исследований, проведенных ранее среди русских, проживающих в Москве, Курске и Адыгее [Бабунова Н.Б., 2004; Ушачев Д.В., 2011; Тугуз А.Р. и соавт., 2011], отличались от наших более высокой частотой гетерозиготных генотипов.
Многочисленные клинико-генетические исследования, проведенные в различных регионах мира, показали, что полиморфные маркеры T174M и М235Т гена AGT ассоциированы с повышенным уровнем AGT в плазме крови и риском развития артериальной гипертензии у русских из Татарстана [ГазизоваР.Г., 2007], у адыгов [Калакуток З.Н. et al., 2002] у русских и татар из Башкортостана [Mustafina O.E. et al., 2002], а также у жителей Объединенных Арабских Эмиратов [Frossard P.M. et al.,1998]. Однако подобной ассоциации у алжирцев и ливанцев выявлено не было [Saab Y.B. et al., 2011; Meroufel D.N. et al., 2014; Amrani A. et al., 2014]. Также установлено, что аллели 235Т и 174М вовлечены в развитие ИБС у русских, проживающих в г. Ростов-на-Дону [Нгуен Т.Ч. и Шкурат Т.П., 2010], тунисцев [Abboud L. et al., 2010], египтян [Shaker O.G. et al., 2009], но не в ОАЭ [Frossard P.M. et al., 1998]. Таким образом, отмечается вариабельность как в распределении аллелей и генотипов, так и в их ассоциации с сердечнососудистой патологией в различных популяциях.
Известно, что аллели 235Т и 174Т являются предковыми и часто встречаются среди африканских популяций [Corvol P. et al., 1999; Nakajima T. et al., 2002; Nakajima T. et al., 2004; Renner W. et al., 2005], и их одновременное наличие в генотипе ассоциировано с повышенной концентрацией AGT в плазме крови, но не с гипертонией или ИБС [Renner T. et al., 2005]. Как отмечалось выше, вероятно, такое сочетание генов давало преимущество для сохранения соли в организме, регуляции водного баланса и артериального давления предковым популяциям, проживавшим в Африке, у которых доступ к соли был ограничен.
Распределение аллелей и генотипов по полиморфизму Leu33Pro гена ITGB3 тромбоцитарного рецептора фибриногена среди алжирцев, сирийцев и русских из Центральной России
Тромбоцитарный рецептор фибриногена участвует в обеспечении первичного гемостаза, способствуя агрегации тромбоцитов. В последнее время активно проводятся исследования, направленные на изучение полиморфизма Leu33Pro гена ITGB3, при котором замена тимина на цитозин приводит к замене лейцина на пролин в 33-м положении. Обнаружено, что он ассоциирован с развитием ССЗ, и его распределение географически и этнически варьирует [Naran N.H. et al., 2008; Salem A. et al., 2014]. Однако до настоящего времени данный полиморфный маркер не был исследован среди сирийского населения, также крайне малочисленны сведения о его распространенности среди алжирцев. В этой связи представляется весьма актуальным изучение встречаемости данного полиморфизма среди населения Сирии и Алжира в сравнении с русскими из Центральной России.
При анализе распределения генотипов по данному полиморфизму выявлено отсутствие в изучаемых выборках отклонений от популяционного равновесия Харди—Вайнберга (Р 0.05) (табл.20).
Как видно из приведенных данных, частота гомозигот ТТ превышает частоту гетерозигот, причем это более выражено у русских. Для сирийцев характерна наиболее высокая встречаемость гетерозигот, в то время как гомозиготы по мутантному аллелю С среди них обнаружены не были. Таким образом, установлено, что сирийцы и русские достоверно отличаются по частотам изучаемых генотипов (Р=0.006), однако отличие по соответствующим показателям между русскими и алжирцами, несмотря на выраженную тенденцию, не оказалось статистически значимым (Р=0.206). Таблица 22 Частоты аллелей и генотипов по полиморфизму Leu33Pro гена ITGB3 среди алжирских арабов, берберов и в общей группе арабов
Последующий анализ в подгруппах (табл. 22) продемонстрировал достоверные отличия по встречаемости генотипов между алжирскими арабами и берберами (Р=0.012), а также алжирскими арабами и русскими (Р=0.034). Тенденция к появлению отличий отмечается при сравнении объединенной группы арабов и русских (Р=0.053), а также алжирских арабов и сирийцев (Р=0.0539).
При анализе встречаемости аллелей данного полиморфного маркера достоверных отличий между изучаемыми выборками обнаружено не было. Таким образом, среди населения Алжира, Сирии и Центральной России частота аллеля Т превышает встречаемость мутантного аллеля С. Данные, полученные нами в выборке русских, полностью соответствуют результатам исследования, проведенного среди русских, проживающих в г. Томске [Муслимова Э.Ф., 2016]. Brouk H. и соавт. (2010) исследовали распределение данного полиморфизма в разных популяционных выборках алжирцев и установили следующие частоты генотипов: ТТ - 58.06-80%; ТС - 17.5 41.94%; СС – 0-4.35%, а также определили, что частота аллеля С может варьировать в пределах 0.113-0.207, чему соответствуют и полученные нами в подгруппах берберов и алжирских арабов результаты. Как отмечалось в главе, посвященной обзору литературы, полиморфизм Leu33Pro вовлечен в возникновение некоторых ССЗ. Так, у русских аллель С ассоциирован с осложнениями ИБС и необходимостью более объемной и продолжительной антигипертензивной терапии у больных с дислипидемиями, страдающих от гипертензии и ИБС [Касапова Е.Н. и соавт., 2006; Мяндина Г.И. и соавт., 2014]. У пациентов с острой коронарной недостаточностью, артериальной гипертензией и дислипидемиями наблюдалось более тяжелое течение гипертензии при наличии аллеля С [Зотова Т.Ю. и соавт., 2013]. Однако исследований, направленных на выявление ассоциации данного полиморфизма с ССЗ в Алжире и Сирии не проводилось.
Сердечно-сосудистые заболевания относятся к мультифакториальным, и в их формирование вовлечены различные мутации и разнообразные факторы среды. Как отмечалось выше, с развитием данных болезней ассоциированы, как правило, минорные аллели рассматриваемых нами полиморфизмов. Можно полагать, что в разных популяциях и этнических группах вклад различных полиморфизмов в формирование предрасположенности к патологии сердечно-сосудистой системы варьирует. В этой связи в рамках представленной работы мы решили рассмотреть особенности распределения гомозиготных генотипов по минорным аллелям исследуемых полиморфизмов в изучаемых популяциях. Было обнаружено, что среди алжирцев встречаемость генотипа DD по гену ACE наиболее высока (76,79%). Частота генотипа 235ТТ по гену AGT составила 21,43%, тогда как гетерозиготы встречались в два раза чаще (44.64%). Частота генотипа 323СС по гену EDNRA составила 16,07% и существенно не отличалась от частоты гетерозигот (21.43%). В отношении полиморфизма Leu33 Pro по гену ITGB3 можно отметить, что генотип СС встречался всего лишь в 3,57% случаев. Что касается полиморфизмов Т174М по гену AGT, A1166C по гену AGTR1и Lys198Asn по гену EDN1, встречаемость гомозигот по мутантным аллелям была очень низка и составляла 1,79% (рис. 12).