Введение к работе
Актуальность проблемы. За последние несколько лет значительно возрос интерес к полиморфизму генов главного комплекса гистосоЕыестишсти (ГКГ) сельскохозяйственных животных. Это вызвано тем, что продукты генов ГКГ играют важную роль в иммунном ответе организма и его резистентности к болезням.
ГКГ представляет собой кластер тесно сцепленных генов, состоянии из трех областей (гены I ,11 и III классов). Антигены- II класса преимущественно экспреесируотоя на поверхности иммунных клеток В-лимфоцитов, суОпопуляций Т-клеток и макрофагов. Гены II класса образуют пять локусов : DQ. DR, DZ, DP, DO.
Исследование полиморфизма генов ГКГ позволяет выявить связи между полиморфизмом генов ГКГ и резистентностью к заболеваниям. У крупного рогатого скота была показана ассоциация между галлотипом DQ 1А и предрасположенностью к клиническому маститу: другие гаплотипы DQ и DYA не проявляли: такого эффекта (Lunden et al.1987).
Для исследования полиморфизма генов ГКГ активно разрабатываются молекулярно-генетические подходы, основанные на анализе полиморфизма ДНК, методы, позволяющие упростить такой анализ и сделать его доступным для массового тестирования животных. В настоящее время предложен метод анализа специфических последовательностей ДНК после их амплификации in vitro с помощью по-лимеразной цепной реакции (ІЩР). Рестрикционный полиморфизм таких амплифицированных последовательностей можно определять без применения изотопных методов анализа, а путем простого сравнения подвижностей полученных фрагментов после электрофо-ретического разделения в полиакриламидном и агарозных гелях.
Целью исследований было изучение генетического разнообразия генов главного комплекса гистосовместимости класса II DRB и DQB у разных пород крупного рогатого скота и зубров и поиск ассоциации полиморфных вариантов с устойчивостью к маститам.
Для этого были поставлены следующие задачи:
1. Разработка условий анализа полиморфизма ДНК генов DQB и
DRB ГКГ у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цеп
ной реакции (ПЦР-аналцз),
2. Исследование полиморфизма генов ГКГ класса II DRB и DQB
у холмогорской, черно-пестрой и герефордской пород крупного ро
га" гатого скота и зубров методом ЩР.
| 3. Шиск внутрипородных и межпородных и межвидовых раз ли-
5 чий генов DRB и DQB.
Ї 4. Выявление ассоциации между аллельными вариантами генов
І DRB и DQB с устойчивостью к маститам.
- A -
5. Анализ генетического равновесия локусов DRB и DQB.
Научная новизна полученных результатов. В работе предложен метод полимеразнои цепной реакции для изучения полиморфизма генов ГКГ у крупного рогатого скота, проведена оптимизация условий полимеразнои цепной реакции. Впервые изучен полимор-.физм генов класса I1 ГКГ у холмогорской, герефордекой. черно-пестрой пород крупного рогатого скота и зубров. Впервые изучены меж- и внутрипородные различия у этих пород крупного рогатого скота и зубров. Впервые показан рестрикционный полиморфизм по эндонуклеазам Hinf I и Мзр I генов DQB и DRB.
Практическая ценность. Практическое использование результатов работы позволяет глубоко и целенаправленно изучать структуру генов ГКГ у крупного рогатого скота. Полученные данные следует использовать для маркирования животных по генам ГКГ в связи с резистентностью к болезням. Перспективно также использование полученных дачных в качестве учебного материала в подготовке специалистов биологического профиля.
Апробация работы прошла во Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства (Москва,1991) на 44-й научно-методической конференции аспирантов и молодых ученых по теме: "Проблемы интенсификации животноводства", а также на IV совещании СНГ по проблеме селекции сельскохозяйственных животных на устойчивость к болезням (Сумы, 1992). Материалы диссертации докладывались на межлабораторном семинаре "Генетика животных" ИОГен им. к И. Вавилова, РАК Представлены тезисы на UI съезд общества генетиков и селекционеров им. Вавилова (Минск, 1992) и на конференцию по частной генетике сельскохозяйственных животных (Аскания-Нова, 1992г).
По теме диссертации опубликовано 4 статьи.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на ... страницах машинописного текста. Она состоит из введения, обзора литературы, методической части, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы.