Введение к работе
Актуальность исследования. Настоящая работа явилась логическим продолжением ранее проведенных работ по изучению мутации fused (Fu). Было показано, что мутантний ген Fu обладает неполной пенетрантностью, варьирующей экспрессивностью (Reed, 1937). Пенетрантность гена Fu зависит от генетического фона и от направления скрещивания (частота проявления гена Pu материнского происхождения, как правило, ниже частоты проявления гена Pu отцовского происхождения). Было показано, что линия мышей C57BL/6 имеет доминантный ген-супрессор, который оказывает сильное действие на проявление гена Pu после оплодотворения (Рувинский, Агульник, 1990).
В настоящей работе выбор метода получения химерных мышей позволял изучать закономерности формирования фенотипа особи при взаимодействий мутантного гена Fu и гена-супрессора из линии мышей C57BL/6 после 8-клеточной стадии развития.
Химерных животных получают в результате агрегации двух синхронно развивающихся эмбрионов разного генотипа. Для получения большого количества синхронно развивающихся зародышей часто используются экзогенные гонадотропные гормоны. Индуцированная овуляция ооцитов происходит через 2,5 суток после первой инъекции. Из ранее проводимых исследований известно, что инъекция гидрокортизона самцам, несущим мутацию Pu, за 2-3 дня до оплодотворения приводила к достоверному снижению пенетрантности гена Fu в потомстве (Беляев и др., 1983).
Цели и задачи исследования.
Главная цель работы состояла в проведении анализа фенотипического проявления доминантной мутации fused (Pu), при взаимодействии с геном-супрессором данной мутации, которое осуществлялось после оплодотворения. Такая возможность могла быть реализована с помощью химерных животных. Для получения химерных животных была использована суперовуляторная обработка самок. В контрольном скрещивании было обнаружено достоверное снижение пенетрантности мутации fused после введения гонадотропних гормонов. Поэтому был проведэн дополнительный анализ по выяснению возможных
механизмов влияния суперовулящш на раннее развитие эмбрионов.
Таким образом, при выполнении данной работы перед нами стояли следующие конкретные задачи:
-
Получить химерных мышей, несущих мутацию fused (Pu) в одном компоненте и ген-супрессор данной мутации из линии C57BL/6 в другом компоненте.
-
Проанализировать характер фенотипического проявления мутации fused под действием гена-сулрессора, резко сникающего пенетрантность гена fused (Fu) при гибридизации.
-
Определить возможные причины изменения пенетрантности мутации fused под действием экзогенных гормонов, используемых для вызывания индуцированной овуляции.
Научная новизна и практическая ценность.
-
Получены химерные мыши, несущие мутацию fused (Fu) в одном компоненте и ген-супрессор данной мутации в другом компоненте.
-
Показано, что ген-супрессор не оказывает влияние на пенетрантность мутации fused у химерных мышей, или фенотипическое проявление мутации Pu определяется на очень ранних стадиях развития - до 8-клеточной стадии.
-
Показано, что присутствие клеток нормального генотипа C57BL/6 не оказывает влияние на экспрессивность мутации Fu.
-
Отмечено достоверное снижение пенетрантности мутации Pu под действием гонадотропних гормонов при индукции суперовуляции.
5) Проведен первый этап анализа возможных причин
снижения пенетрантности мутации Pu при использовании
гонадотропних гормонов.
Основные результаты были получены автором самостоятельно. Получение химер проводилось совместно с А.И.Железовой и А.Н.Голубщей. Работа выполнена в лаборатории генетики животных (зав.лабораторией д.б.н. А.О.Рувинский) и в секторе генетики мейоза (зав.лабораторией д.б.н. П.М.Бородин) ЙЦиГ СО РАН.
Апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи в отечественных и зарубежных журналах. Материалы
диссертации докладывались на 9-ом международном совещании по молекулярной генетике мыши, Эдинбург (Великобритания), 1994; на ежегодной конференции Отделения генетики Иельского Университета, Вудс Холл (США), 1994; на отчетной сессии ИЦиГ СО АН СССР, 1991; на межлабораторном семинаре по генетике животных в Институте Цитологии и Генетики СО РАН; Структура и объем диссертации.
Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 265 наименований. Работа изложена на 131 страницах машинописного текста, иллюстрирована II рисунками и содержит 7 таблиц.