Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1 Реконституция клеточного иммунитета, как ключевой фактор достижения противоопухолевого ответа у больных гемобластозами после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 12
1.2 История вопроса 13
1.3 Иммунофенотипические характеристики клеточного звена иммунной системы 16
1.3.1 Иммунофенотипические характеристики Т-лимфоцитов 16
1.3.2 Иммунофенотипические характеристики B-лимфоцитов 18
1.3.3 Иммунофенотипические характеристики НК-клеток 21
1.3.4 Иммунофенотипические характеристики моноцитов 21
1.3.5 Иммунофенотипические характеристики гранулоцитов 23
1.4 Реконституция Т-клеточного звена иммунной системы у пациентов после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 24
1.5 Реконституция ДН-клеток после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 27
1.6 Реконституция НК-клеток после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 28
1.7 Реконституция B-клеток после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 29
1.8 Реконституция моноцитов после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 31
1.9 Реконституция гранулоцитов после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 33
1.10 Реконституция клеточного звена иммунной системы после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток в зависимости от типа донора 33
1.11 Участие клеточного звена иммунной системы в реакции «трансплантатпротив хозяина» 35
1.12 Участие клеточного звена иммунной системы в реакции «трансплантат против лейкоза» 37
1.13 Влияние режима кондиционирования на реконституцию клеточного звена иммунной системы после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток 39
1.14 Влияние режимов профилактики острой реакции «трансплантат против хозяина» на реконституцию клеточного звена иммунной системы 40
Заключение 44
Глава 2. Материалы и методы. 46
2.1. Клиническая характеристика больных 46
2.2 Дизайн, этапы исследования и временной регламент 48
2.3 Схемы предтрансплантационного кондиционирования, используемые у больных, включенных в исследование 51
2.4 Схемы профилактики острой реакции «трансплантат против хозяина» (препараты, дозы, дни введения) 52
2.5 Проточная цитометрия 53
2.6 Пробоподготовка при определении различных субпопуляций лейкоцитов с использованием метода «лизис с отмывкой» 54
2.7 Статистический анализ данных 58
Глава 3. Результаты исследования и обсуждение 60
3.1 Клинические результаты 60
3.1.1 Вероятность восстановления лейкоцитарного ростка 61
3.1.2 Влияние режима профилактики РТПХ на бессобытийную выживаемость у больных после алло-ТГСК в зависимости от статуса заболевания 65
3.1.3 Влияние режима профилактики РТПХ на общую выживаемость у больных после алло-ТГСК в зависимости от статуса заболевания 67
3.1.4 Влияние режима профилактики РТПХ на вероятность развития рецидива у больных после алло-ТГСК в зависимости от статуса заболевания 70
3.1.5 Влияние режима иммуносупрессивной профилактики на вероятность развития РТПХ у больных после алло-ТГСК в зависимости от статуса заболевания 72
3.2 Клиническая значимость ранней реконституции субпопуляций лейкоцитов после алло-ТГСК различных у больных с острыми лейкозами, которым трансплантация была выполнена в ремиссии 74
3.3 Характеристика реконституции субпопуляций лимфоцитов в зависимости от источника трансплантата и режима профилактики реакции «трансплантат против хозяина» 77
3.3.1 Восстановление Т-лимфоцитов 77
3.3.2 Восстановление Т-хелперов 79
3.3.3 Восстановление цитотоксических Т-лимфоцитов 82
3.3.4 Восстановление B-лимфоцитов 84
3.3.5 Восстановление НК-клеток 86
3.3.6 Восстановление ДН-клеток 88
3.4 Характеристика реконституции субпопуляций моноцитов в зависимости от источника трансплантата 89
3.4.1 Восстановление классических моноцитов 90
3.4.2 Восстановление патрулирующих моноцитов 92
3.4.3 Восстановление провоспалительных моноцитов 94
3.5 Характеристика реконституции субпопуляций гранулоцитов в зависимости от источника трансплантата 96
3.5.1 Восстановление сегментоядерных гранулоцитов 96
3.5.2 Восстановление иммуносупрессивных гранулоцитов 97
3.5.3 Восстановление палочкоядерных гранулоцитов 99
3.6 Исследование динамики реконституции различных субпопуляций лейкоцитов в зависимости от источника трансплантата 101
3.7 Особенности реконституции субпопуляций лимфоцитов у больных, у которых диагностирована острая реакция «трансплантат против хозяина» после +30 дня алло-ТГСК 102
3.8 Особенности реконституции субпопуляций моноцитов у больных, у которых диагностирована острая реакция «трансплантат против хозяина» после +30 дня алло-ТГСК 106
3.9 Особенности реконституции субпопуляций гранулоцитов у больных, у которых диагностирована острая реакция «трансплантат против хозяина» после +30 дня алло-ТГСК 108
Глава 4. Заключение 112
Выводы 119
Список литературы 121
Приложение 147
- Реконституция Т-клеточного звена иммунной системы у пациентов после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток
- Вероятность восстановления лейкоцитарного ростка
- Восстановление Т-хелперов
- Особенности реконституции субпопуляций лимфоцитов у больных, у которых диагностирована острая реакция «трансплантат против хозяина» после +30 дня алло-ТГСК
Введение к работе
Актуальность проблемы
Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) является единственным методом излечения большинства гемобластозов [Thomas E.D. et. al., 2000]. Ее действие основано на таком мощном иммунологическом феномене, как реакция «трансплантат против лейкоза» (РТПЛ) [Bleakley M. et. al., 2004; Bolwel B.J. et.al., 2003].
Реконституция клеточного звена иммунной системы представляется важным фактором, влияющим на иммунный ответ после алло-ТГСК [Зотиков Е. и соавт., 1996; Vries et. al., 2000].
От скорости и характера этого процесса зависит тяжесть инфекционных осложнений,
вероятность развития рецидива основного заболевания и реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) [Brink M. et. al., 2004; Ogonek J. et. al., 2016].
Скорость восстановления различных субпопуляций лейкоцитов после алло-ТГСК широко варьируется [Bahceci E. et. al., 2003; Scarselli A. et. al., 2015]. Так гранулоциты восстанавливаются, в среднем, в течении месяца после трансплантации, в то время как реконституция T- и B-лимфоцитов занимает от 3 месяцев до нескольких лет. Количество натуральных киллеров (НК-клеток) в периферической крови достигает референсных значений в среднем в течение 3 месяцев [Rommeley M. et. al., 2011; Chang Y. et. al., 2014].
В настоящий момент, не смотря на существование большого количества донорских регистров, только у 30% пациентов удается найти HLA-идентичного донора [Singh A. et. al., 2016]. Поэтому в последнее время, алло-ТГСК все чаще выполняют от частично совместимых неродственных или гаплоидентичных родственных доноров, что, в свою очередь, увеличивает вероятность развития РТПХ [Park et. al., 2012].
В настоящее время не существует универсального подхода в проведении профилактики РТПХ. В различных трансплантационных центрах используются различные схемы. Одной из основных задач при алло-ТГСК является уменьшение частоты развития РТПХ при сохранении РТПЛ [Bleakley et.al., 2004].
При алло-ТГСК от частично-совместимого донора стандартные схемы профилактики РТПХ на основе ингибиторов кальциневрина не позволяют существенно уменьшить частоту развития данного осложнения [Klein O. et. al., 2016]. Применяемые в некоторых педиатрических центрах методы деплеции или позитивной селекции
отдельных субпопуляций лимфоцитов с целью профилактики РТПХ, у этих пациентов являются достаточно дорогостоящими процедурами, и сопряжены с высоким риском тяжелых вирусных инфекций [Li Pira G. et. al., 2016]. В настоящее время одним из самых «экономически обоснованных» методов профилактики РТПХ может считаться циклофосфамид (ЦФ) в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации [Ram R. et.al., 2013]. В экспериментах на животных было доказано, что использование ЦФ в высоких дозах после алло-ТГСК приводит к элиминации пролиферирующих аллореактивных Т-лимфоцитов, при этом не оказывая влияния на гемопоэтические клетки- предшественники и Т-клетки памяти [Kirsten M. et. al., 2009]. Данный способ профилактики РТПХ широко применяется, также, и при гаплоидентичных алло-ТГСК [Luznik L. et. al., 2009].
Учитывая влияние циклофосфамида на реконституцию клеточного звена иммунной системы у больных после алло-ТГСК, в литературе активно обсуждается использование его в качестве индуктора толерантности [Ram R. et. al. 2013; Yi W. et. al., 2016]. Большинство авторов фокусируются на восстановлении Т-клеточного звена иммунной системы, поскольку именно Т-лимфоциты играют основную роль в развитии РТПХ [Li Pira G. et. al. 2016]. Однако в развитии аллоиммунных осложнений участвуют и другие субпопуляции лейкоцитов – моноциты и гранулоциты [Nishimori H. et. al. 2013; , Ferrara J. et. al. 1996]. Также показана роль B-лимфоцитов в развитии хронической РТПХ [Shimabukuro-vornhagen A. et.al., 2016]. Однако большинство исследований, посвященных данной проблеме, носят сугубо клинический характер. Литературный обзор работ по сравнению влияния циклофосфамида в дозе 50мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации и классической иммуносупрессии на реконституцию различных клеточный популяций после алло-ТГСК представляется недостаточным, что и послужило поводом к проведению собственного исследования.
Цель исследования
Изучить влияние циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут на +3,+4 день после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, при использовании его в качестве профилактики реакции «трансплантат против хозяина», на раннюю (до 100 дней) реконституцию клеточного звена иммунной системы у пациентов после трансплантации аллогенного костного мозга и стволовых клеток крови.
Задачи исследования
-
Выполнить сравнительное исследование влияния циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут на +3; +4 день на реконституцию различных субпопуляций лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов в периферической крови пациентов с гематологическими заболеваниями в контрольные сроки (+14, +30, +60, +90 дни) в зависимости от источника трансплантата.
-
Оценить восстановления клеточных субпопуляций у больных гематологическими заболеваниями в ранние сроки (до 100 дней) после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток в зависимости от режима иммуносупрессии и от источника трансплантата.
-
Проанализировать влияние восстановления клеточных субпопуляций у больных острым лейкозом после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток на общую выживаемость.
-
Сравнить влияние режимов иммуносупрессии на показатели выживаемости, а также приживление и вероятность развития рецидивов и реакции «трансплантат против хозяина» у больных гематологическими заболеваниями после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.
-
Выявить связь между реконституцией различных субпопуляций лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов в периферической крови пациентов с гематологическими заболеваниями в первый месяц после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток и вероятностью развития реакции «трансплантат против хозяина».
Научная новизна и практическая значимость работы
Впервые изучено влияние применения циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации на реконституцию различных субпопуляций лейкоцитов в сравнении с классической схемой профилактики реакции «трансплантат против хозяина» в зависимости от источника трансплантата. Получены данные о сопоставимой эффективности и безопасности использования данного метода.
Полученные результаты исследования показывают преимущество при
использовании стволовых клеток крови в качестве трансплантата у реципиентов с частично-совместимым или гаплоидентичным донором, т.е. всех тех, у кого профилактика реакции «трансплантат против хозяина» проводится с использованием циклофосфамида в дозе 50мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации. Эти результаты будут учтены при разработке протоколов алло-ТГСК.
Реконституция Т-клеточного звена иммунной системы у пациентов после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток
Т-клеточная иммунная система необходима для защиты организма от тяжелых оппортунистических инфекций и для контроля за опухолевой пролиферацией. Полноценное ее восстановление после алло-ТГСК является одним из ключевых факторов, влияющих на вероятность безрецидивной выживаемости у пациентов после алло-ТГСК. Только после успешного приживления лимфоидных предшественников происходит реконституция субпопуляций В-, Т- и НК-клеток. Каждая Т-клетка экспрессирует на своей поверхности уникальный Т-клеточный рецептор.
Активированные клетки быстро пролиферируют, образуя клон, клетки которого в свою очередь превращаются в эффекторные Т-клетки и Т-клетки памяти. Эффекторные Т-клетки мигрируют к месту присутствия антигена и выполняют такие функции, как клеточно-опосредованная цитотоксичность и продукция различных цитокинов. Благодаря позитивной селекции Т-клеток в тимусе, ТКР разделяют на два типа. Большая часть экспрессирует антигенсвязывающие еф цепи на ТКР, которые, являясь гетеродимерами суперсемейства белков Ig связанными дисульфидной связью, формируют уникальную структуру на каждой клетке. офТ-лимфоциты обладают разнообразным репертуаром рецепторов распознавания антигенов и представляют собой зрелые Т-клетки, отвечающие за развитие адаптивного иммунного ответа. Небольшая доля клеток экспрессирует у8 цепи на ТКР, они гораздо менее гетерогенны и присутствуют, в основном, в коже и слизистых оболочках [39].
Реконституция Т-лимфоцитов у реципиентов алло-ТГСК включает кло-нальную экспансию (1) зрелых донорских лимфоцитов (как аллореактивных, так и не аллореактивных), которые попали в организм реципиента вместе с трансплантатом, (2) остаточных лимфоцитов реципиента, резистентных к режиму кондиционирования, (3) тимусзависимых или, возможно, тимуснезависимых de novo-генерируемых донорских лимфоцитов. У молодых пациентов тимус может поддерживать de novo генерацию Т-клеток из донорских гемопоэтических клеток-предшественников. Однако его вклад в реконституцию зависит от интенсивности кондиционирования, облучения, возраста пациента (степени возрастной инволюции тимуса), приживления трансплантата, наличия РТПХ, применения против о-микробных и иммуносупрессивных препаратов [38].
В исследованиях было показано, что у пациентов, которым была выполнена алло-ТГСК с Т-деплецией, дефицит Т-клеточного иммунитета в первый год после трансплантации был обусловлен не только недостаточным количеством Т-клеток, но и недостаточным репертуаром ТКР [26, 188, 196]. Т-клеточное восстановление, вероятнее всего, зависит от репопуляции наивных Т-клеток из тимуса. Тимус, а также – интактные тимические предшественники, играют важную роль в реконституции Т-клеточного иммунитета. Но и новым Т-клеткам (тимическим иммигрантам), а также зрелым Т-клеткам из аллотрансплантата, требуется и экс-тратимическая поддержка для выживания и пролиферации. Факторы, определяющие гомеостаз периферических Т-клеток, только в начале изучения. Так, процесс гомеостатической пролиферации, который особенно актуален при лимфопе-нических состояниях, включает такие цитокины, как интерлейкин-7 и интерлей-кин-15, которые признаны важными факторами посттрансплантационной Т-клеточной реконституции [12–14]. Также очень важен витальный статус Т клеток. У взрослых реципиентов аллогенного костного мозга и стволовых клеток крови отмечается 5-10 - кратное увеличение количества Т-клеток, находящихся на различных стадиях апоптоза, по сравнению со здоровыми донорами, что в свою очередь часто ассоциировано с наличием HLA-несовместимости между донором и реципиентом, временем после трансплантации и развитием РТПХ экспрессией FAS(CD95) и BCL-2 [118, 147].
Группа CD4+ Т-лимфоцитов делится на две основные субпопуляции: CD4+CD45RA+ (наивные клетки) и CD4+CD45RO+ (клетки памяти). В ранние сроки после алло-ТГСК CD4+ клетки экспрессируют в основном CD45RA. Медленное восстановление наивных клеток связано с утерей функции тимуса. С возрастом их выработка снижается [135].
Субпопуляция клеток памяти восстанавливается в течение года после трансплантации, и именно с ее медленной реконституцией обычно связывают высокую частоту развития оппортунистических инфекций.
CD4+ клетки восстанавливаются позже, чем CD8+ лимфоциты, и в большей степени зависимы от генерации тимусом наивных Т-клеток [97].
В исследовании С.Martinez (1999) было показано, что в первые 6 месяцев после трансплантации периферических стволовых клеток крови, наблюдается более медленное восстановление числа CD4+, CD4+CD45RA+ клеток, чем у тех больных, у которых в качестве источника трансплантата использовался костный мозг. Однако эти различия исчезали к 8 месяцу [135]. В других же исследованиях отмечалась медленная реконституция CD4+ клеток у реципиентов костного мозга, с восстановлением до нормальных значений лишь спустя год после алло-ТГСК [113, 196, 224].
Цитотоксические T-клетки, относящиеся к субпопуляции CD8+ , распознают антигены, презентированные в ассоциации с молекулами MHC класса I.
При взаимодействии цитотоксических Т-лимфоцитов с инфекционными агентами и дисфункциональными соматическими клетками происходит высвобождение цитокинов (гранзимы, перфорины, гранулизины). За счет активации перфоринов, гранзимы проникают в цитоплазму клетки, сериновые протеазы запускают каскад каспаз, что в конечном итоге приводит к апоптозу клетки [3].
Другим путем индукции апоптоза является поверхностное взаимодействие между Т-лимфоцитом и инфицированной клеткой. При активации Т-клетки происходит активация экспрессии поверхностного белка FAS-лиганда (FasL)(Apo1L) (CD95L), который связывается с FAS (APO1) (CD95) молекулами, экспрессирую-щимися на клетках-мишенях. Конечным результатом является апоптоз клетки [39].
После алло-ТГСК CD8+ субпопуляция Т-клеток восстанавливается быстрее, по сравнению с CD4+.[107]. Кроме того, быстрая реконституция CD8+ лимфоцитов к 90-му дню после трансплантации ассоциирована с лучшим противоопухолевым ответом у пациентов с гемобластозами [217].
Вероятность восстановления лейкоцитарного ростка
Медиана восстановления лейкоцитов у реципиентов костного мозга, получивших стандартную иммуносупрессию, составила 21 день, а при использовании циклофосфамида в дозе 50 мг/кг на +3, +4 день после алло-ТГСК – 25 дней. У реципиентов стволовых клеток крови при проведении стандартной иммуносупрес-сии и при использовании циклофосфамида 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации медиана восстановления лейкоцитов составила 20 дней. В группе реципиентов костного мозга отмечалась тенденция к более медленному восстановлению лейкоцитов при использовании циклофосфамида, однако эта разница была незначима.
Таким образом, было показано, что использование циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут в качестве режима профилактики РТПХ значимо не увеличивает период агранулоцитоза у больных после алло-ТГСК в сравнении с классической схемой иммуносупрессии.
На рисунке 5 представлены данные о вероятности восстановления лейкоцитарного ростка у пациентов после алло-ТГСК в зависимости от режима профилактики реакции «трансплантат против хозяина».
Вероятность приживления лейкоцитов после алло-ТГСК у больных вне зависимости от статуса заболевания при использовании циклофосфамида в посттрансплантационный период составила 89.7% (n=26), а при стандартной иммуно-супрессии – 93.9% (n=31). Таким образом, приживление лейкоцитарного ростка не зависело от режима профилактики РТПХ.
Для того чтобы исключить влияние такого фактора, как статус заболевания до транстплантации, мы проанализировали отдельно больных, которым трансплантация была выполнена в ремиссии, и больных, находящихся на момент трансплантации вне ремиссии заболевания.
Вероятность приживления лейкоцитарного ростка у больных, которым трансплантация была выполнена в ремиссии заболевания, представлена на рисун ке 6.
Вероятность приживления лейкоцитарного ростка у больных после алло-ТГСК в ремиссии заболевания с профилактическим введением циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации составила 92.9% (n=13), а при использовании стандартной иммуносупрессией – 96.4% (n=27). Таким образом, у больных, которым трансплантация была проведена в ремиссии основного заболевания, мы также не выявили значимых различий.
Вероятность приживления лейкоцитарного ростка у больных, которым трансплантация была выполнена вне ремиссии заболевания, представлена на рисунке 7.
Вероятность приживления лейкоцитов у больных после алло-ТГСК вне ремиссии заболевания с циклофосфамидом в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после трансплантации составила 86.7% (n=13), а со стандартной иммуносупрессией – 80% (n=4). В этой группе больных мы также не выявили влияния схемы профилактики РТПХ на приживление лейкоцитарного ростка.
Таким образом, согласно полученным нами данных, восстановление лейкоцитов не зависело от режима профилактики РТПХ и статуса заболевания. По литературным данным, циклофосфамид также не ухудшал результаты приживления лейкоцитов у больных после алло-ТГСК [122].
Восстановление Т-хелперов
Помимо реконституции общей Т-клеточной популяции, было также исследовано восстановление Т-хелперов. Данная популяция включает в себя множество различных субпопуляций, таких как Т-хелперы 1 типа, Т-хелперы 2 типа, Т-хелперы 17 типа, Т-хелперы 22 типа, Т-регуляторные клетки и др. [230], однако рамках этого исследования оценивалась только общая реконституция CD4+ клеток. В таблицах 8 и 9 представлены данные, полученные при исследовании рекон-ституции CD4+ клеток.
При анализе общего числа CD4+ клеток у реципиентов костного мозга при сравнении стандартной профилактики РТПХ и циклофосфамида в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после алло-ТГСК были получены достоверные различия на +14 (p=0.033) и +30 (p=0.012) дни. В первый месяц после трансплантации абсолютное количество CD4+ лимфоцитов было значимо ниже в группе, где был использован циклофосфамид в дозе 50 мг/кг/сут на +3, +4 день после алло-ТГСК. Затем эта разница исчезала. У реципиентов стволовых клеток крови достоверных различий не получено. (Рисунок 18)
Так же, как и в случае с реконституцией CD3+ лимфоцитов, у всех пациентов после трансплантации отмечалось снижение абсолютного числа CD4+ клеток в течение всего периода наблюдения. Референсные значения в первые 100 дней после трансплантации достигнуты не были. Кроме того, было показано, что у реципиентов костного мозга в группе с посттрансплантационным ЦФ реконституция CD4+ клеток в первый месяц после алло-ТГСК происходила значимо медленней, чем в группе со стандартной иммуносупрессией. Однако в более поздние сроки эта разница переставала быть значимой. У реципиентов стволовых клеток крови восстановление в обеих группах не различалось.
Согласно данным литературных источников, высокие дозы ЦФ уничтожают активированные Т-лимфоциты, не затрагивая Т-клетки памяти и Т-регуляторные клетки [122], обеспечивая таким образом защиту от РТПХ, а также – возможность бороться с инфекциями за счет Т-клеток памяти.
Исходя из полученных данных можно предположить, что использование стволовых клеток крови в сочетании с циклофосфамидом в дозе 50 мг/кг/сут на +3,+4 день после алло-ТГСК является наиболее целесообразным.
По данным литературы быстрая, но стабильная реконституция CD4+ клеток ассоциирована с лучшими показателями выживаемости вне зависимости от источника трансплантата. Быстрое же восстановление Т-хелперов со снижением их количества в более поздние сроки ассоциировано с высокой частотой развития вирусных инфекций и РТПХ [146].
Особенности реконституции субпопуляций лимфоцитов у больных, у которых диагностирована острая реакция «трансплантат против хозяина» после +30 дня алло-ТГСК
Мы также исследовали особенности реконституции различных субпопуляций лимфоцитов у больных, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК.
В контрольные сроки на +14, +30 дни после алло-ТГСК определяли количество CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, НК и ДН-клеток в периферической крови, принадлежащих донорскому кроветворению.
При анализе реконституции CD3+ клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, были получены достоверные различия на +14 день (р=0.041). (таблица 30)
Таким образом, абсолютное число CD3+ клеток у пациентов с острой РТПХ было достоверно выше. (рисунок 29)
Т-лимфоциты играют важную роль в патогенезе развития острой реакции «трансплантат против хозяина» [105]. Таким образом, нами показано, что пациенты, у которых в течение первого месяца происходит быстрый рост CD3+, имеют более высокий риск развития РТПХ. Таким образом, можно говорить о том, что реконституция общей популяции Т-лимфоцитов является предиктором развития острой РТПХ.
При анализе реконституции CD4+ клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, были получены достоверные различия на +30 день (р=0.019). (таблица 31)
Пациенты с более быстрым ростом CD4+клеток в течение первого месяца после алло-ТГСК имели более низкую вероятность развития РТПХ.
При анализе реконституции CD8+ клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, достоверных различий получено не было. (таблица 32)
Таким образом, мы не получили данных влияния восстановления цитотоксиче-ских Т-клеток на вероятность развития РТПХ.
Помимо анализа реконституции субпопуляций Т-лимфоцитов, мы также изучали влияние восстановления В-клеток на развитие РТПХ. Таким образом, при исследовании реконституции CD19+ клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, достоверных различий получено не было. (таблица 33)
Также, был проведен анализ реконституции НК-клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, достоверных различий получено не было. (таблица 34)
При анализе реконституции ДН-клеток у реципиентов алло-ТГСК, у которых была диагностирована острая РТПХ после +30 дня алло-ТГСК, достоверных различий получено не было. (таблица 35)
Таким образом, мы получили достоверную разницу в реконституции с Т-лимфоцитов, в частности CD4+клеток, при оценке влияния на вероятность развития острой РТПХ.
По результатам нашего исследования было выявлено, что восстановление общей субпопуляции Т-лимфоцитов, а также Т-хелперов может служить предиктором развития острой РТПХ.