Введение к работе
I.I. Актуальность теми. Экономическое и со-іяьнов развитие страны в большой степени зависит от обеспече-i населения доброкачественннаа я в достаточной количестве )дуктами животноводства. Выполнение этой задачи возможно лнгаь і внедрении в шшотноводство висоЕоинтенстзнкх технологий, ба~ эушцихся на спациалязапдп производства. Однако при интейснфи-
Г2П ГИВОТПОЕОДСТВа ВОСПРОЛЗЕОДСТОЛЫШЭ ^ЦЗДЦ. ЗЕВОТНЫХ 0ЕЕЗІІ-
отся понихенньма, сервис-период увеличивается, возрастает чнс-дней бесплодия. В связи о этим неизмеримо возрастает погребіть в эффективных методах предотвращения неблагоприятного воз-їствия факторов промышленной технологии на здоровье, продук-зность г воспроизводительную способность животных.
Современные исследования в,области физиологии, зндокршго-гаи, гинекологии значительно расширили наши представления о оцессах, сопровоядаицих становление половой функции самок, связи с этим актуальное значение приобретают исследования, правленные на разработку п внедрение в прагтигу кзропрйЯхйй, 9 среди многих мер зажншл звеном является использование гор-нальных препаратов.
С целью восстановления расстройств воспроизводительной нкцяи у коров предложены различные гормональные средства, также их сочетания с другими биологически активныш препара-ма (Б.М.Завадовскнй, 1945; А.П.Студйнцов, 1953; И.Ф.Заянчховс-й, IS64; Д.Д.ЛОГВИНОВ, 1964; П.И.Шаталов, 1965; В.С.Шилилов, S8; А.А.Сысоев, 1971; Г.А.Чврешкишов, 1972; Т.А.Кононов, 76; Ю.Д.Юшнскин, 1977; В.А.Акатов, 1977; Н.И.Додянцев, 1973; Н.Шамберев, 1979; Ы.И.Прокофьев, 1983; А.И.Гладкова, 1986; Г.Ыехданов, 1996,а др.).
Как показывают физиологические исследования гормональных оредотв, стероидные соединения способны через высшие центры нейро-эндокринной регуляции создавать в крови животного повышенный уровень гонадотропних гормонов, способствующих росту фолликулов и овуляции*
Одним из гормональних средств, перспективных для коррекц воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных, яв ляется црегнадиен, синтезированный в Харьковском НИИ зндокрн» логни и химии гормонов. Он рекомендован для восстановления ее ральннх циклов у женщин и как оральный контрацептив. Его прей мущество перед другими гормональными средствами по отсутствии сенсибилизирующих свойств на повторное введение (чего нельзя оказать, например, о ИК), выраженное специфическое действие, неслитная технология промышленного производства (в сравнении с простагландинами). а также относительная дешевизна послужит основанием для более глубокого изучения его физиологической аз тиввооти по регуляции воспроизводительной функции самок.
1.2, Ц е л ь и задачи исследования. Цахья ваших исследований было выявление особенностей механизма влиянья прегнадиена на воспроизводительные функции самок с теї чтобы обооновать возможность применения его отдельно или в сочетаниях о другими биологически активными средствами для упрэд двния половой цикличностью у коров.
В задачи исследований входило:
- обоснование оптимальной дозы прегнадиена, способной корректировать гормональный фон в крови коров, имеющих функцио надьные расстройства яичников, до физиологического уровня, характерного для стадии возбуждения подового цикла, и стимулировать течку, охоту и овуляцию;
изучение влияния прегыадиана на сократительную активность тки у лабораторных животных и коров;
выявление характера изменений Н-холинолитиком половой кличности у самок;
определение гормонального статуса крови на фоне внключв-я Н-холинореактивных систем;
изучение особенностей действия гормональных средств, ям'иадчбна, дигятола) на фоне блокада Н-хотаїорецзптороз з ясненив роли Н-холинореактивных систем в регуляции половой кличности;
ВНЯВЛеНИе ВОЗМОЖНЫХ ГИСТОМОрфОЛОГНЧОСКИХ ПЗМеНеНИЙ В Г8-
талиях коров после инъекции прегнадиена;
изучение биохимического, в т.ч. гормонального статуса овн при действии прегнадиена;
экспериментальное обоснование возиохностя вішзчаїшя івгнаддена в схему обработки коро?-доноров с целью сулэровуля-д;
разработка показаний к пртдэнэнн» прегнадиена душ коррек-ж дисфункций яичников, предупреждения задержания последа и лэ-!ния коров при эндометритах;
совершенствование техники нехирургичесяой трансплантации ібрионов у коров-доноров.
1,3. Научная повпзна її ценность а б о т ы. Впервые изучено влияние прегнадиена на воспроизво-стельные функции у коров и объяснены процессы, лежащие в осно-> этого влияния. Доказана эффэктганость применения препарата ш нормализации половой ігдашчноста при дасфункцзя яичников, также для синхронизации охоты а повышения качества эибргояов ж суперовудядад коров-доноров.
Впервые изучены моторака матки, гиотоморфологическке вэме ненкя в репродуктивных органах к биохимический статус крови пр дейотвжв прегнадиена.
На основании экспериментальных исследований предложены но вые способы гормональной коррекции воспроизводительной функция в торможения сократительной активности матки у коров.
По данным изменений гормонального статуса крови, гисто-структуры яичников-, продолжительности отдельных фаз полового цикла, сроков проявления охоты ж результатов суперовуляции на фоне действия гормональных средств в Н-холинолжтвка определвне роль холввореахтившсс систем в регуляции половой цикличности, что позволяет считать обоснованными пути поиска модуляторов подовых циклов среди нейротропных средотв, .вмешиващяхся в синалтические процессы, которые обеспечивают прямую в обратнуї связь центральной нервной системы о гонадами.
Предложены также усовершенствованные инструменты для неп рургического извлечения эмбрионов в оригинальные методы регисі радив сокращений матки в биопсия ее эндометрия.
Новизна материалов диссертационной работы подтверждена 8 авторскими свидетельствами и патентами, выданными Госкомизобр< тений. CGGP в патентным ведомством Россия.
1.4. Практическое значение работ Разработаны способы применения с цельв индукции половой охоты восстановления половой цикличности, нарушенной персистенцией желтого тела или гипофункцией яичников, одного прегнадиена (оплодотворение 74,0 и 67,0 соответственно) или его сочетаниі с хорионическин гонадотрошшом человека (оплодотворение 70,5 и 70,0 соответственно), сывороточным гонадотрошшом и эстро-фаном (оплодотворение 85,0 и 83,3 соответственно). Предлагается применять прегнадиен для синхронизация охоты, лрофилакти
ідергаїшя последа после родов совместно с витамином А и )Д-ф2, при лечении эндометритов совместно с дигнтолои и биосазы.
Практические аспекты работы отражены в методических реко-эндациях и пособиях: "Трансплантация эмбрионов крупного рога-эго окота" (Москва, 1990), "Основные направления улучшения эспроизводитальной функции воров" (Москва, 1990), "Нарушения эгулящш воспроизводительной функции у коров и их фармакокор-экцня" (Москва, 1991), "Стероиды пролонгированного действия ри восстановлении полового цикла у животных" (Белгород, 1995).
-
Апробация работы. Материалы диссертации или представлены на Еоесоюзной научно-практической конференции Эндокринная система организма в вредные факторы внешней среды" Ленинград, 1987), Международной конференции "Биологические особы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных" (Бо-овск, 1990), Всесоюзной научной конференции "Повышение продук-ивности сельскохозяйственных животных и совершенствование мер орьбы о болезнями в условиях интенсивного ведения животноводст а и создания фермерских хозяйств" (Харьков, 1991), научно-прак ической конференции "Биотехнология и воспроизводство В ЖИВОТНО одстве" (Горки, 1991), 6-й Межгосударственной межвузовской на-чно-практической конференции "Новые фармакологические средства і ветеринарии" (С.-Петербург, 1994), отчетных и научно-произ-юдственных конференциях при Белгородском сельскохозяйственном інституте (Белгородокой сельскохозяйственной академии) по пла-ювой тематике НИР (Ш гос. регистрации 01.88.0125985; 11.86.0125978), на расширенном заседании кафедры физиологии и іармакологии Белгородской сельскохозяйственной академии (1996;.
-
Структура и объем работы. Диссер-'ация изложена на 416 страницах машинописного текста, содержит
68 таблиц и 53 рисунка. Структурно она состоит вз введення, глав обзора литературы, описания материала и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и пракм ческих предложений. Список использованной литературы включает 602 работы, в том числе 199 отечественных авторов. 2. МАТЕРНАЯ И ЫБТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования проведены в 1985-1995 гг. В работе использова но 24 белые мыли, 250 белых крыс, 26 кроликов, 3 собаки, 777 по ловозралых телок и коров. Подопытные животные содержались в лаборатории кафедры в на физиологическом комплексе сельхозакадеш иди в производственных условиях - в учхозе "Центральное", на фермах АО "Красная Нива" и "Новая жизнь" Белгородского района и колхозе вы. Дзержинского Яковлевского района Белгородской области.
Алгоритм проведенных исследований представлен на схеме. . Изучался прегнадаен, синтезированный в Харьковском НИИ э. «ринологии и химии гормонов и выпускаемый в форме 0,3#-НОГ0 масляного раствора. Другие препараты были заводского произведет ва.
Острую и хроническую токсичность прегнадаена определяли на белых мышах и крысах. Препарат вводили перорально. Учитывали из мевевия з поведении животных, массу тела, выживаемость, а также гематологические показатели, морфологические и гистоструктурные характеристики внутренних органов, в т.ч. яичников и матки. При этом использовались общепринятые методы исследования, описанные в руководствах В.Н.Никитина.(1956), А.Я.Альтгаузена (І962), В.С.Роюгаа (1968), М.Д.Рыловой (1956), И.В.Саноцкого (1970), О.Н.Елизаровой (1971) и других.
Івстагенная активность проверялась на кроликах и учитывалась по тесту Клауберга.
1.ИСХОДНЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТЫ Скашшвт:
Первичяыа - сопоставление химической структуры в раду гестягеков. Общее действие.
Раздражающее влияние. Острая и хроническая токсичность. Эыбриотоксичносгъ.
Спещкфілеския: &7\
гестагеннся утеротропное влияние на
влияние (моторика, био- ^<Г половую
О од
Полоаіі свит
Суперовушщия lbf Синхронизация біоті.
потенциалы) f Л цикличность
гЦЕЛВБЫК ЭКСПЕТИМВНТЫ Buf «в гггжмжлимі Діти - 5 it) кантеї
Подоїм виглячвоетк Коррекяяі половых цжклоа
Выяснение иеххшпм* дейетжна
Лнэстральные циклы
Мзрфо (гисто) структура: гонал, эндометрия, внутренних органов
Супероауляциі Нормальные циклы
О" О о- Оо
Г»у]ЩНЖ1ДНМЙ ГЛПуС Ш1Я1МЫ кр*шм
Суперовуляция Нормальные
О0# О
Прогестерон, эстрадиол, ЛГ, иортиэол, тестостерон, пролактин
Суперовуляция Нормальные циклы Анэстралънь» циклы
Эгжтгххлиты, лейэоошгга, лейквгтд^
кислоты, иммуноглобулины; общие лилиды, фосфоли! 1нды, холестерол, триацилглицерияы;
бактерицидная,и лизсіошная активность сыворотки*.
- ^фос
3. ПРИ к л Профвлактвка плевясшм аоемжа
Биосан
Пенициллин Стрептомицин Ихтиол Окситоцин
А АСД
V/ + Плацебо
витамин А
Йодвисмутсульф?мид биосан
Рекомендаций по при-манению в производстве
Публикации в научной литературе - 21
прегнадиеи прогестерон - -мепрегенола ацетат ф -эстрофан Н-Н-холинопитніе
4.ВЫХ0Д Авторских свидетельств и патентов - 8
Обозначен
ни*
Л. -хорионичеекмй гонааот-ппин (2 чывороточиый гонадат». .;ЛИН Д -зигитоя
Ф-фоллигулин
П-питуитрин
Биоэлектрическую и сократительную активності матки регисі рировали при поисди специально сконструированных устройств (а. І386І65 и 1625485) и прибора УШ-4 с самописцем КСП-4 и Н-308. Утерограшш получены на кроликах, собаках и коровах.
Половую цикличность у крыс определяли о учетом частоты встречаемости течки, продолжительности астральных циклов (ЭЦ) х их фаз - проэструса, еструса, ыетэструса (U3) и диэструса (ДЭ). По этим фазам выводили циклограмму. В опытах использовались как нормально циклирувдие, так и анэетрадышв животные.
Влияние првгнадаена в различных дозах и его сочетаний с другими средствами изучалось на половозрелых телках либо коровах: нормально циклирущих. используемых для синхронизации охо ты і" супэровудяции, имеющих дисфункции яичников (персистентное желтое тело, гипофункция), а также больных послеродовыми эндометритами. После введения препарата определяли время прихода в охоту, количество осеменений, процент плодотворно осемененных. индекс осеменения. Проводили биопсию эндометрия и овариоэктомш Для проведения биопсии использовали биотом собственной конструї дни (a.c. 1493253). Из извлеченных яичников и биоптата готовиш гиотопрепараты, которые окрашивали гематоксилином и эозином и изучали под микроскопом.
Суперовуляцип вызывали по стандартной схеме (французская методика). Для вымывания эмбрионов применяли устройство нашей конструкции (а.о. 1015890). Количество овулировавших фолликулов определяли при ректальном исследовании и после овариоэкто-мии. Качество вымытых эмбрионов оценивали но пятибалльной системе. Использовалась среда Двльбекко.
Влияние прегнаднена сопоставлялось о прогестероном и меп-регенола ацетатом, Прегнадиев в целевых экспериментах применялся отдельно или в сочетании о такими средствами, как эстро$ан,
тонический или сывороточный гонадотропин, дигитол, фоллику-[, питуитрин, а в прикладных исследованиях - с АСД-ф2, вита-юм А, дигитолом и биосаном (а.с. I60I833).
Дія выявления роли Н-холинороактивных систем в регуляции . ювой цикличности, суперовуляторных процессов а действии !гнадиана и дигитола применяли' бензогексоний в форме 2,5:1-'о раствора в дозах 0,1 мл/год кавдые 6 ч внутримышечно на ітяхении 15 сут для крыо и 10 мл/гол 21-ного раствора для >ов внутримышечно каждые 6 ч в течение 3 сут.
При нормальной и нарушенной половой цикличности, синхронніш охоты и суперовуляции, на фоне выключения Н-ходинореак-«шс систем и после применения прегнаддена и сочетаемых о і других средств изучались биохимические показатели крови.
Содержание в плазме крови прогестерона, эстрадиола, 1Г, отзола, тестостерона а прозаятнна определяла радиоаммуколо-іеским методой (наборы КИТов фирмы р jor-inT, Франция-Италия; сов А.Д. и др., 1988).
Содержание в цельной крови гемоглобина и глюкозы, в ео ізма - обукх липвдоз, фосфолшшдов, холестерола и триацил-шеридов, в сыворотка - белка и его фракций, иммуноглобули-!, бактерицидную а лизощшлув активность определяла общзпри-ыми методами, описанными С.П.Кудаченко, З.*".Коган (1979). В І0Т9 использовались аминокислотный анализатор ААА-38І (произ-істзо ЧССР), аппарат (камера) для электрофореза, 4ЭК.
Исследования крови на содержание гормонов проводили в іьковском НИИ эндокринологии и химии горлонов, на другие био-шческие показатели - в лаборатории биологических косладова-і Белгородской государственной сельскохозяйственной академии.
Цифровые данные, полученные при выполнении исследований,
рораоотаны статистическими методами в описании М.Л.Беленького (1963). Сравнительный анализ между вариантами опытов проведен по ^-критерию Стьвдента. Достоверными считались различия при р^0,05.