Введение к работе
AjuaaJRHP.Q.a.jCaK заключается s том. что она направлена па решение задач, поставленных ХХУІЇ съездом КПСС.
В двенадцатой пятилетке предсто.гт довести производство мяса то 21 миллиона тонн, молока до I06-II0 миллионов тонн. Большое значение для выполнения этих планов имеет использование достижений научно-технического прогресса, особенно в селекции.
Перевод животноводства на промышленную технологию обусловливает неотложную необходимость создания высокопродуктивных порок, линий, отвечающих современным требованиям промышленной технологии, повышения уровня селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных и сохранности поголовья.
Объективно селекционную работу и увеличение поголовья крупного рогатого скота тормозит то. что от самок в условиях промышленной технология получают за их жизнь 4-5 телят.
Однако, крупный рогатый окот.обладает большим генеративным потенциалом. Так, со А.ВЛІемялову (1934) в яичниках трехмесячной телочки имеется до 75000 яйцеклеток,- у 3-летней коровы -21000, у 10-летней коровы - 2500. По данным Л.Хенриета (1955), чисто зародышевых клеток у животных 200-400 тысяч. Использовать более эффективно столь большой генеративный потенциал позволяет биотехнический метод трансплантации эмбрионов.
На современном этапе реализация метода трансплантации встречает затруднения как в условиях производства, так к во многих научно-исследовательских учреждениях. Не достаточно надежны методы вызывания множеетвешюй овуляции, высока вариабельность результатов гормональных воздействай, непредсказуема реакция яичников на гормональные препараты. Все е>че остается несовершенной t техника извлечения и пересадки эмбрионов.
И ель и задачу иердздований,,., Целью исследований являлось оо-воеюге и усовершенствование методов гормональных воздействий для направленного индуцирования половых циклов я получения суперовуляции, а также выявление роли ряда факторов технологии трансцервикального долученая и пересадки эмбрионов* Исходя из этого были поставлены следупвде задачи: I, Освоить и усове]хвонствовать метод гормонального индуцирования половых циклов коров-доноров а телок-реципиентов путем, применения стандартного препарата ГСЗІЇ" (-Іоллигоп) в сочеттсяи
о простагландином.
-
Изучить в сравнительном аспекте эффективность метопов гормонального вызывания суперовуляцид гонадотропинами ФСГ-л и ТСЖ у коров-доноров в спонтанный и индуцированный половые НИКЛЫ.
-
Определить наличие возможной связи гормонального фона коров-донороа перед обработкой с уровнем индуцированной супер-овуляцна.
-
Исследовать влияние исходного гормонального фон а крови телок-реципиентов на результативность пересадок.
-
Усовершенствовать технологию тренсцервякального извлечения и пересадхи эмбрионов с использованием различных инструментов и методов премедикацаи.
-
На основе полученных данных выявить степень влияния исходного гормонального профиля на результаты оугеровуляции и при-живляемость эмбрионов, определить значение этих показателей при выборе доноров и реципиентов; оценить методы премадикации реципиентов и эффективность использования различных инструментов при трансаершкальном извлечения и пересадке эмбрионов.
Нахаиа^.нйшаш_дйіійіа включается в том , что впервые
изучены физиологические факторы, оказывающие влияние на качество индуцированных половых циклов корое-доноров и телок-реципиен- . тов. определена степень зависимости суперовуляции от типа гона-цотрошюа и исходного гормонального фона, выявлены-оптимальные концентрации прогестерона в кровя телок перед пересадками свеже-получеяных и ваиорожеино-оттаянных эмбрионов. Изучены факторы» влияющие на результаты траиоиервикального извлечения и пересадки эмбрионов.
практическое значену работы. Полученные нами ценные позволяют целенаправленно отбирать .коров-доноров и. телок-рецики-ентов; получать качественные и стабильные результаты гормональных воздействий с целью синхронизации охоты и получения суперовуляции; более эффективно проводить извлечение и пересадку эмбрионов.
Внедрений. Научше разработки внедрены в ОПХ "Дубровицы" Подольский район Московская обл., а также используются в учебном процессе при изложении курса акушерства и искусственного осеменения в Горском с.-х. институте.
Апробация работы,. Материалы диссертации цоложеш на расши-
реннон заседания кафедры акушерства и искусственного осеменения Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии им. К.И.Скрябина и на Всесоюзной конференции тлодкх ученых (Москва, 1995).
Публикация результатов ипслрлордтй.д По теме диссертации опубликовано 3 работы.
Объем, работы^ Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, иллюстрирована 27 таблицами, 7 рисунками. Список литературы включает 193 источника, в том числе 144 иностранных.
Исследования проводили в 1984-1985 тт. в Центре но трансплантация эмбрионов ВПК и опытно-производстьенном хозяйстве БЖ -"Щапово". Опыты по синхронизации охоты у доноров и реципиентов проведены на 64 коровах и СЗ телках* Изучение эффективности гормонального вызывания суперовуляции проведено на 125 коровах*. Влияние исходного гормонального профиля на уровень суперовуляции я эффективности пересадок на 75 донорах я 94 реципиентах. Технология трансцервпкального извлечения и пересадки, фактори влияющие на ее эффективность изучены на 72 донорах и 260 реципиентах.
В качестве доноров использовали коров черно-пестрой породи 4-6-летнего возраста, живой массой 5O0-S5O кг, упоем 4-7 тыс,кг молока за лактацию.
В качестве реципиентов использовали телок черно-пестрой породы в возрасте 16-18 месяцев с живой массой 350-380 кг.
Кормление животных осуществляли по нормам ВИЯ.
При выборе животных для экспериментов учитывали общее состояние здоровья, упитанность, состояние репродуктивных органов. , Использовали только здоровых животных с правильным чередованием полевых циклов. Охоту определяли ш четко выраженному рефлексу неподвижности во время прогулки в стоЯловый период один раз в сутки, в летний - два раза утром и вечером.
В своих исследованиях мы'применяли фоллигон - стандартный препарат ГСКК высокой степени очистки, ССГ-к - препарат, представляющий собой фолликулостямулируший гормон высокой степени очистки, получаемый из гипофиза свиней я эстрофан - синтетический аналог простагландина F2' -* .
С целью синхронизация охоты корогам инъецировали фоллигон
в дозе 500 И.Е. и через 4& чалов - зстро^ан в дозе 500 мкг; тел-кам-фоллкгон в дозе 250 И.Е. к эстрофан и дозе 500 мкг одновременно в две различило точки. Крепараты вводили внутримышечно независимо от дня полового цикла. Качество иняуцированного цикла у аокоров определяли по результатам индуцированной нолиовуляшш. у реципиентов - по результатам аппликаций 7-8-яневных эмбрионов.
Для получения суперовуляции у доноров <КГ-п вводили, внутримышечно с В по 12 день спонтанного полового цикла ежедневно утром и вечером по 5 кг с китарій лом 12 часов (общая доза 60 мг) и иа Il-tt день - эстрскран в дозе 500 мкг, Фэллнгон инъецировали на И-й день индуцированного полового цикла в дозе 2500-3000 И.Е. Через 48 часов после инъекции фоллигона вводили эстрофан в дозе 500 мкг*
Через 48 часов после инъекции эстрогена короь-доноров осеменяли на протяжении охоты с интервалом 12 часов двойной дозой замороже дао-оттаянной спаі*ш от одного быка. На каждое осеменение расходовалось 50 млн.слврмиев. Лень первого осеменения принимался за 0. Извлечеіше зародышей осуществляли на 7-й день.
При подведении итогов ректальной пальпацией перед извлечением учитывали: число желтых тэл я неовулировавших $олликулов; после нехирургического извлечения - общее количество зародышей, число нормальных, дегелерированных эмбрионов и неошюцотворен- . лых яйцеклеток.
Нехирургическоо извлечение зародышей осуществляли катетерами модели Ш и "Нойштадт". Оценку моделей проводили по трано-цервикальной проходимости, объему введенной и выведенной среды, числу извлеченных зародышей. .
Взятие крови для изучения эндокринных влияний на суперову-ляцшо и приживляемоеп осуществляли путем пункции яремной вены за 1-2 часа перед обработкой и пересадкой. Пробы центрифугировали и сыворотку консервировали в жидком азоте. Определение концентраций прогестерона и эстрадиола проводили'родиоиммунологн-ческнм методом.
Трансцервикальную перисадку проводили катетерами НЕЇ и "Нойштадт". Снятие напряжения с шейки и рогов матки осуществляли проведением сакральной анестезии ила маточним релаксантом. Для сакральной анестезия ітрименяля двухпроцентные раствори новокаина либо лигновета в дозе 5 мл. Маточньй релаксант вводили внутримышечно в дозе 20 мл за 20 мініут до пересадки.
Трансплантировали свежеполученные» культивированные я эамо-роженно-оттаянные эмбрионы телкам, синхронным по половым циклам донорам лень в день либо ±1 день. Эмбрионы апплицировэли в верхушку рога . ипеялатерального яичнику о желтым телом.
Результаты определяли по 3-*іесячной стельности и по отелам. Цифровой материал обработан 6itoMStp«4ecKHM методом.