Введение к работе
Актуальность работы. Важнейшей задачей, стоящей перед биологической и зоотехнической каукаии, является изыскание новых путей интенсификации животноводства. Одной из возможностей повышения рентабельности животноводства монет стать успешное решение задачи пеленаправленного регулирования овуляции и соотношения солов потомства млекопитающих. Успешное решение задачи рационализации методов впаивания овуляции позволит повысить результативность искусственного осеменения, благодаря введении семени в оптимальное для оплодотворения .время и иоключит необходимость его повторения.
Особенно актуальна данная проблема для кролиководства, т.к. в этой области метод искусственного осеменения до сих пор не находит вирокого применения ввиду сложностей с вызыванием овуляции* VVИзвестны гормональные методы вызывания овуляции. Но введение экзогенных гормонов может приводить к нарушении нервно-гуморальной регуляции функции яичников и вызывать нежелательные иммунные реакции у самок.
Для предотвращения этих явлений был разработан метод вызывания овуляции у крольчих с помощью внутривенного введения гяюкона-та меди (Ц.ІіХоколовская, Л.Ф.Бовдаревекая, 1978). Это вещество вффективно стимулирует овуляции и не нарушает воспроизводительные функции самок. Вместе с тем, глшонат меди возможно вводить только внутривенно, т.к. при внутримышечном или подкожном введении происходит некроз тканей, а. это затрудняет .введение препарата при массовых обработках cauotujj
.Проблема регулирования соотношения полов потомства животных
имеет большое народнохозяйственное значение. Но до настоящего
времени отсутствует эффективный метод регулирования пола потомст
ва у млекопитающих. \ р-"-^"^— ""
'("Лги. с;д. I з^а t ..:г.
Большие надежды исследователей связаны с иммунологическими подходаыи к данной проблеме, что обусловлено интенсивным развитием иммунологии и имшуногенетики.
Цель и задачи исследований. Б настоящей работе были поставлены следующие задачи:
1. Усовершенствовать метод вызывания овуляции у крольчих
ад тем изыскания возможности замены внутривенного введения препарата внутримышечный,
-
Выяснить возможность вызывания овуляции у крольчих путем введения медного препарата в составе разбавителя для семени кролика*
-
Изучить*некоторые физиологические процессы при действии меди ва овуляции у крольчих.
-
Выяснить возможность повышения эффективности искусственного осеменения овец путей внутримышечных ишьекция комплексоната меди.
-
Изучить влияние комплексоната меди на воспроизведение свиней.
-
Изучить влияние инкубации живчиков кролика с акрихином на соотношение полов потомства.
' 7. Определить возможные иммунологические подходы к проблеме регулирования соотношения полов потомства млекопитающих.
Научная новизна работы. Усовершенствован метод вызывания овуляцки у крольчих путем внутримышечного введения коїш лекеоната меди. Сконструирована новая среда - имплементор для семени кроликов, способная вызывать овуляцию у крольчих, ионаружеші, что в ответ на коитус у крольчих происходит рефлекторное повышение содержания меди s крозиЛ/становлёно, что медь является синергастом миотролных факторов в организме, Изучено влияние комплексоната
— 2 —
меди на воспроизведение у овец и евшей* Проведены некоторые иммунологические приемы обработки семени кроликов с целью воздействия на соотношение полов потомства.
Практическая значимость. Предлагаемый метод вызывания овуляции у крольчих дает возможность широкого внедрения искусственного осеменения в практику кролиководства. Стимулирование овуляции комплексонатом меди позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец и свиней с одновременной рационализацией технологии и снижением затрат семени в труда на плодотворное осеменение.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены:
на научной конференции молодых ученых и аспирантов Шла <1980 г.);
на Второй Всесоюзной симпозиуме по иммунологии воспроизведения. Москва (1980 г.);
на научной конференции отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных,ВИІа (1981 г.).
Объем работы. Диссертация сост.оит из следующих частей: введе-' ниє, обзор литературы, материал и методики исследований* результаты экспериментов, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список литературы, который включает 253 наименования, из них 158 на иностранном языке. Материал изложен на 133 страницах машинописного текста, содержит 31 таблицу и 3 рисунка,
— 3 —
эюштм&ишшАЯ ЧАСТЬ Материал и методы исследований
Опыты по изучении стимулирования овуляции у крольчих Сыли проведены в виварии отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных: животных всесоюзного научно-исследовательского института животноводства. Разработка и внедренческая работа по стимулированию овуляции у крольчих: были проведены в ОПХ "Родники" Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства. Там же были проведены опыты по.регулирование соотношения полов потомства у крольчих.
Возможность стимуляции воспроизводительной функции овец изучали на овцах романовской породы в ОПХ "Тутаево" Ярославского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. Опыты по стимулированию овуляции у свиней проведены на репродукторной ферме свиноводческого комплекса колхоза иыеаи М.в. Фрунзе Белгородской области.
дяя вызывания овуляции использовали медный хомплексонат натриевой соли этилевдиамин тетрауксуоной кислоты (СюН-^ИдД^Л^г^'
Непосредственно перед применением готовили 20# р-р коыплек-соната меди. С помощью лимонной кислоты доводили рН раствора до 7«5. Б одном миллилитре такого раствора содержится 25 мг элементарной меди.
Доя выяснения аффективной дозы, вызывающей овуляцию у крольчих и вместе с тем не токсичной для организма, были проведены опыты с разными дозировками меди. Посредством лапаротоіши и вскрытия самок виясняли их действие, учитывая наличие либо отсутствие эвуляции.
— 4 —.
Санов осеменяли свежевзятым семенем, разбавленным в 10 раз гликокол-цитратно-желгочной средой (по Ц.И.Соколовской, 1Э№).
Семя ос самцов брали при помощи искусственного влагалища для кроликов, конструкции и.К.Кердымович и ВЛС.ниловзнова (1933).
Для вызывания овуляции у крольчих, им эа 5 часов до осеменения внутримышечно вводили кошлексонат меди в виде 20% р-ра. ГлЪ-конат меди готовили по методу, описанному Л.Ф.Бондаревсхон (1978).
Семя в половив пути самки вводили специально изготовленным шприцем. Выбор самок для осеменения проводили по внешним признакам.
Для изучения возможности вызывания овуляции у крольчих путем применения неднокомплексоновой среды, были разработаны две среды на основе хомплехсояата меди.
Для создания сред были взяты изотонические концентрация следующих компонентов: глюкоза - 6J6, цитрат натрия - 3%, ЭДТА меди -
Изучение наилучших сочетаний данных веществ проводили по методу треугольных систем (Б.К.ияяованов, 1962).
Содержание меди в образцах крови определяли атомно-абсорбционным методом на приборе АД - ІУ в лаборатории химического анализа кормов ВИХа.
Кимографию матки инфантильных крыс проводили с помощью при-бора'КСК-4. .
Для уточнения оптимальной дозы меди для овец были отобраны 3 опытные и контрольная группы. Содержание а кормление овец всех групп было одинаковым. Наличие охоты определяли бараном-пробником. Осеменяли маток свежеразбавленным семенем дважды в охоту. Sal час до первого осеменения овцам опытных групп вводили однократно
— і —
внутримышечно кошшексонат меди, растворённый в дистиллированной
воде, в виде Ъ% раствора. С помощью лимонной кислоты доводили
рН раствора до 7,5. Было испытано Ъ дозы t., учитывая,
что I ыг меди содержится в 8 мг комплексоната. Овцам контрольной группы за I час до осеменения вводили внутримышечно. Т$> р-р M$zt,
Чвозможность практического использования, стимулирующего овуляцию действия коиплексоната меди, изучалась в опытах на свиньях. опытной группе, после выявления рефлекса неподвижности,-свиньям ваутриыаточко вводили 40 мл 5^'р-ра. ЭДГА меди, нейтрализованного до рН в 7,5. Спустя 12 часов, свиноматок однократно осеменяли, вводя обычную дозу свежеразбавленного семени. Результаты осеменения экспериментальных животных сопоставляли с результативностью в контрольной группе, где осеменение проводили в соответствии с "Инструкцией" двукратно, через 12 а а часа после выявления рефлекса неподвижности, не применяя обработок медью.
Физиологически нетоксичные концентрации акрихина определяли методом встречных арифметических, рядов (В.К.Шшованов, 1962).
После добавления нетоксичной дозы акрихина в состав разбав-лекаого семени, семя выдергивали при комнатной температуре в течение 30 минут и, затем, проводили осеменение крольчих.
' Нішуиную сыворотку к живчикам петуха вырабатывали у крольчих, вводя антиген в конъштиву глазного веха, для приготовления антигена, эякулят петухов отминали от плазмы. Осадок, состоящий из живчиков, заливали 4-мя объемами Ці раствора хлористого натрия и экстрагировали в течение 48 часов при +4. После центрифугирования, надосадочную жидкость удаляли и использовали в качестве антигена. Через 7-8 дней после окончания иммунизации у животных брали кровь и готовили сыворотку. Наличие иммунных тел в антисыворотке проверяли реакцией преципитации в агаровом геле по Оухтврлони.
_ б —
Путем титрования устанавливали, дозу сыворотки, вызывающ}» агглютинации приблизив льна &05& «ивчиков. Посів инкубации кивчиков ан-тисывороткой при +37 С в течение часа, проводили осеменение крольчих. Определение шла проводили у оуючвых крольчат и, затеи* проверяли на 20-й дань, У мертворожденных крольчат пол определяли путем их вскрытия и изучения гениталий.
Антиоыворотку к твйням саіщов вырабатывали путем 8-кратной, подкожной иммунизации самок морских свинок экстрактом селезенок самцов-кроликов. Иммунную сыворотку абсорбировала измельченными тканями самок-кроликов.
Мышиную антисыворотку к Н-У антигену получали путем 8-кратно і иммунизации санок-ныкей экстрактом селезенок самцов. Использовали мышей линии С-57 BL/6,
Для иммунизации крольчих савдовым^ Н-У антигеном, использовали антиген, приготовленный из селезенок самцов-кроликов. На 7-Ю-й ден» после окончания 8-крзтной иммунизации, самок случали с-самцом. На протяжении всей сукрольностн самкам .еженедельно вводили антиген.