Содержание к диссертации
Введение
1. Анализ состояния вопроса, задачи исследования и перспективы его решения 12
1.1. Оксид азота (II) - газообразный мессенджер 12
1.2. Образование оксида азота в почках 14
1.3. Роль оксида азота в регуляции клубочковой фильтрации
1.4 Роль оксида азота в регуляции канальцевой реабсорбции 23
1.5 Роль оксида азота в регуляции канальцевой секреции 27
1.6 Роль NO в реализации инкреторной функции почек
2. Материал и методы исследований 35
3. Собственные исследования
3.1. Половые особенности системы оксида азота у разных видов животных 41
3.2. Тендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на гидроуретическую функцию почек
3.2.1 Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином 44
3.2.2 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином 50
3.2.3 Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке хлофузаном 55
3.2.4 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс разного пола при нагрузке хлофузаном 57 Стр.
3.2.5 Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-NAME 60
3.2.6 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс разного пола при нагрузке L-NAME 62
3 Тендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на ионоуретическую функцию почек 64
3.3.1 Натрийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз 67
3.3.2 Калийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз 69
3.3.3 Хлоруретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз 71
3.3.4 Кальцийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз 73
3.3.5 Фосфоруретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз 76
Тендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на почечные процессы: клубочковую фильтрацию, канальцевую реабсорбцию, канальцевую секрецию 86
Экспериментальная острая почечная недостаточность 86
3.5.1 Активность системы оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности 86.
3.5.2 Гидроуретическая и ионоуретическая функция почек после введения доноров оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности 88
3.5.3 Динамика изменения почечных процессов: фильтрации, реабсорбции и секреции после введения доноров оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности 92
Заключение 95
Список сокращений 107
Список литературы
- Роль оксида азота в регуляции клубочковой фильтрации
- Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином
- Калийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз
- Активность системы оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности
Роль оксида азота в регуляции клубочковой фильтрации
Как биологический мессенджер, оксид азота играет важную роль в регуляции клубочковой гемодинамики в роли сосудорасширяющего фактора [197] и, как следствие, влияет на процесс фильтрации [231]. В экспериментах обнаружено относительно большое количество ферментативно активного nNOS и eNOS в сосудистых структурах коркового слоя почек [41, 138, 174]. Тем не менее, существуют противоречивые данные относительно того, что афферентные или эфферентные артериолы являются основным источником синтезированного в эндотелии NO [41, 74]. Результаты исследований методом микроперфузии показывают, что афферентные артериолы особенно чувствительны к оксиду азота, по сравнению с эфферентными артериолами клубочков, что приводит к повышению активности клубочковой фильтрации [74].
Скорость клубочковой фильтрации (СКФ)определяется соотношением тонуса афферентной и эфферентной артериол. Вазодилатация афферентных артериол приводит к увеличению СКФ, тогда как тонус эфферентных артериол остается почти неизменным. NO является мощным сосудорасширяющим веществом, поэтому чем больше NO действует на афферентные артериолы, тем больше СКФ [62]. Снижение СКФ в ответ на торможение NO-синтаз, является косвенным предположением более высокой чувствительности к NO афферентных артериол относительно эфферентных [186]. Функциональные исследования показывают, что острое ингибирование NOS приводит к уменьшению коэффициента клубочковой фильтрации [54, 66, 67, 253]. Однако не все исследователи обнаруживают снижение СКФ в ответ на торможение NO-синтаз [80, 81, 114, 173,]. В большинстве случаев натрийуретическое и гидроуретическое действие оксида азота не сопровождается изменениями в скорости клубочковой фильтрации и почечного кровотока [122, 194].
В процессе фильтрации задерживаются белки, которые практически не должны присутствовать в моче в норме у здорового человека и животных. Естественной преградой на пути проникновения белков в просвет нефрона служит гломерулярный фильтр, а часть профильтровавшихся белков подвергаются реабсорбции в проксимальных отделах нефрона. Некоторые исследования показывают, что у здоровых крыс при различных вариантах увеличения мочеотделения проявляется кратковременная протеинурия [12]. Гемодинамика клубочка контролируется NO-зависимыми процессами, а проницаемость для белков гломерулярного фильтра во многом определяется отрицательным зарядом образующих его молекул. Блокада продукции NO при введении метилового эфира L-нитроаргинина приводила к небольшому усилению мочеотделения, к увеличению выделения белка, и к увеличению экскреции альбумина. Однократное введение неселективных ингибиторов NO, вызывает изменение клубочковой фильтрации для белков, по видимому, воздействуя на его заряд. Это приводит к развитию острой селективной протеинурии и снижению коэффициента клубочковой фильтрации [67, 96, 123, 124]. Длительная блокада продукции NO вызывала у крыс протеинурию и альбуминурию [48]. Этот эффект объясняется развитием гипертензии и последующим поражением почечных клубочков при хронической блокаде NO-синтазы [218]. Протеинурия при действии производных аргинина, обладающих высоким положительным зарядом, свидетельствует не только об их влиянии на заряд фильтрационной мембраны, но и об участии NO-зависимых процессов в регуляции фильтрации в почечных клубочках [13].
В экспериментах К. Prasun et al. [84] показано изменение клубочковой проницаемости для белков и участие оксида азота в качестве важного механизма в сохранении проницаемости барьера капилляров клубочков при их повреждении. В инкубированных клубочках с ингибитором NO-синтаз протеинурия увеличивается, что связано со снижением NO. Авторы доказывают, что не только оксид азота является регулятором клубочковой проницаемости для белка, но и повышение биодоступности CV[84].
В почках существует тесная взаимосвязь между процессами клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции в канальцах [232]. Во многом это достигается деятельностью комплекса тубулогломерулярной обратной связи (ТОС). При этом концентрация глюкозы и NaCl в канальцах имеет четко определенную концентрацию. Если эта концентрация понижена - это сигнал для повышения СКФ, если повышена - сигнал для снижения [243]. Недостаток поступления натрия хлорида в плотное пятно (macula densa) увеличивает скорость клубочковой фильтрации [32]. Таким образом, функции клубочков регулируются за счет механизма тубулярно-гломерулярной обратной связи. Сигналы из дистальных канальцев поступают в специальный "почечный центр", координирующий фильтрацию и реабсорбцию. Этот центр «macula densa» группа призматических эпителиальных клеток дистального отдела нефрона, которые входят в состав юкстагломерулярного комплекса почки. Повышенное поступление ионов Na+ и воды в дистальные отделы нефрона служит стимулом для освобождения юкстагломерулярным аппаратом вазоактивных веществ (ренина). Ренин вызывает и поддерживает спазм афферентных артериол с перераспределением почечного кровотока, запустеванием артериол и уменьшением СКФ. Всё это приводит к уменьшению экскреции солей и воды. Оксид азота играет важную роль в регуляции системы ТОС [174, 234, 242].
Из всего изученного, можно сделать заключение о том, что оксид азота играет важную роль в процессе клубочковой фильтрации, поддерживает тонус гломерулярного фильтра и участвует в регуляции его за счет общего снижения артериального давления и за счет влияния на внутрипочечные механизмы ауторегуляции. Однако недостаточно изучен вопрос о тендерной зависимости активности NO-синтаз в артериолах клубочков и их роль в процессе регуляции клубочковой фильтрации.
Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином
Для этого к 1 мл плазмы добавили 1 мл 6 % раствора цинка сульфата (ООО «Спектр-Хим», Россия) и оставляли на 1 ч при температуре ниже 15 С. Центрифугировали при 6000 об./мин (3000 g). В супернатант добавляли эквивалентное количество гидроксида натрия (300 мкл 1 N раствора), центрифугировали и 1 мл надосадочной жидкости переносили в соответствующую по нумерации пластиковую пробирку с предварительно добавленными туда 0,11 г цинковой пыли, 0,5 мл аммиачного буфера, 20 мкл аммиачного комплекса сульфата меди. Пробирки укупорили и встряхивали в течение 30 мин. Цинковую пыль осаждали центрифугированием при 3000 об./мин в течение 10 мин. Затем в каждую пробирку вносили по 1 мл раствора ацетата натрия и 1 мл раствора 1-нафтиламина солянокислого (реактив Грисса ((«Вектон», Россия)). Измеряли оптическую плотность спустя 30 мин на "Фотометре фотоэлектрическом КФК - 3 - 01 - ЗОМЗ" (Россия) при длине волны 520 нм [3].
Концентрацию натрия в сыворотке крови и моче определяли колориметрическим методов на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) с набором реактивов («Ольвекс», Россия) с использованием ионов уранилацетата, которые при взаимодействии с ионами натрия образуют нерастворимый уранилацетат натрия. Содержание оставшегося в растворе уранилацетата определяли на основе его реакции с тиогликолятом аммония, в результате которого образуется окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 405 нм [30].
Концентрацию хлоридов в крови и в моче определяли колориметрическим методом на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) с набором реактивов («Ольвекс», Россия) без депротеинизации в кислой среде с меркуриотиоцианатом, которые при взаимодействии с ионами трехвалентного железа и азотной кислотой формирует окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 540 нм. [30]. Концентрацию калия в сыворотке крови и моче определяли турбидиметрическим методом без депротеинизации с набором реактивов («Ольвекс», Россия). При взаимодействии ионов калия с ионами тетрафенилбората в щелочной среде образуется стабильная суспензия. Оптическую плотность суспензии измеряли при длине волны 578 нм на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия), которая пропорционально концентрации ионов калия в исследуемом образце [30].
Концентрацию кальция в сыворотке крови и моче определяли унифицированным колориметрическим методом с набором реактивов («Ольвекс», Россия). Кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс с о-крезолфталеин комплексоном. Интенсивность окраски по оптической плотности при 570 нм (на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия)) пропорциональна концентрации кальция в пробе [30].
Количество фосфора в сыворотке крови и моче определяли спектрофотометрическим методом на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) с набором реактивов («Ольвекс», Россия). Метод основан на способности фосфат ионов образовывать в кислой среде с молибдатом аммония в присутствии детергента фосфорномолибденовый комплекс, оптическая плотность которого при длине волны 340 нм пропорциональна концентрации неорганического фосфора в исследуемом образце [30].
Концентрацию общего белка в сыворотке крови и моче определяли при помощи биуретовой реакции с набором реактивов («Ольвекс», Россия), с последующим измерением оптической плотности на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) при длине волны 540 нм.
Концентрацию мочевины в сыворотке крови и в моче определяли ферментативным кинетическим методом с набором реактивов («Ольвекс», Россия). Мочевина гидролизуется в присутствии уреазы с образованием иона аммония и С02. Ионы аммония реагируют с а-кетоглутаратом и НАДН в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГЛДГ) с образованием глутамата и НАД. Оптическую плотность проб и стандарта измеряли через 30 секунд и через 60 с на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) при длине волны 340 нм.
Концентрацию креатинина в сыворотке крови и моче определяли кинетическим методом с набором реактивов («Ольвекс», Россия). В щелочной среде креатинин взаимодействует с пикриновой кислотой с образованием окрашенного в красный цвет продукта, оптическую плотность которого измеряли после 30 с и 90 с на "Анализаторе биохимическом фотометрическом кинетическом Би-Ан" (Россия) при длине волны 510 нм. По разности оптической плотности рассчитывали концентрацию креатинина в пробе и в стандарте.
Острое повреждение почек изучали на 25 крысах (п=5) инициированием инъекции 50 % водного раствора глицерина в мышцы задних конечностей (всего 10 мл/кг массы). За 24 часа до инъекции животных лишали доступа к воде. За 2 часа до введения глицерина крысам внутрижелудочно вводили 10 % раствор L-аргинина в дозе 200 мг/кг, хлофузан 0,1 % в дозе 2 мг/кг и L-NAME в дозе 20 мг/кг. Сразу после введения глицерина доступ к воде восстанавливали. Спустя 72 ч после инъекции регистрировали суточный объём мочи и забирали образец мочи для анализа (п=20). Затем животных декапитировали для забора крови и ткани почки.
Скорость клубочковой фильтрации определяли пробой Реберга-Тареева по формуле Кокрофта-Голта: Fl = (ul/p)vl, где Fi - клубочковая фильтрация; Ш - концентрация креатинина в моче; Vi -минутный диурез в первой порции мочи; р - концентрация креатинина в плазме крови. Клиренс креатинина - показатель, по которому оценивают очистительную способность почек - рассчитывали по формуле: Клиренс = UV/P где U — концентрация креатинина в моче; V — объем мочи; Р — концентрация креатинина в плазме. Наряду с оценкой скорости клубочковой фильтрации для оценки функции почек использовали показатель канальцевой реабсорбции воды по формуле: R= C-V/C х 100% где R - реабсорбция воды в канальцах (%), С— клиренс (клубочковая фильтрация (мл/мин), V — диурез (мл/мин).
Калийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз
Ранее установленная зависимость активности системы оксида азота от вида и пола животного вызвала необходимость изучения эффектов при нагрузке донорами NO и ингибитором синтаз оксида азота.
Изучение состояния системы оксида азота в организме у разных видов животных выявило зависимость полученных эффектов от пола животных, поэтому в дальнейших исследованиях экспериментальные группы животных состояли из половозрелых самцов и половозрелых самок.
Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином Для определения половых особенностей физиологических эффектов L-аргинина предварительно изучили активность системы оксида азота при введении индиферентного вещества.
Для этого крысам (п=5) вводили 3 мл воды внутрижелудочно и через 2 часа брали кровь для определения количества метаболитов оксида азота (нитратов и нитритов). У интактной группы крыс кровь брали без введения веществ в желудок.
Установлено, что суммарная концентрация нитрат- и нитрит-анионов в крови меняется при введении индифферентного вещества.
Концентрация нитрат- и нитрит анионов в плазме крови белых крыс-самок после введения дистиллированной воды составляет 39,92±6,819 мкмоль/л, что достоверно не отличается от соответствующего показателя у интактных крыс (35,57±2,577 мкмоль/л). У самцов этот показатель находится на уровне 46,68±2,577 мкмоль/л, что достоверно выше в 1,45 раза (р 0,02) относительно интактной группы (32,19±2,526 мкмоль/л; рисунок 3).
Для выявления зависимости активности системы оксида азота при нагрузке субстратом для NOS от пола, дозы и пути введения L-аргинина были созданы 10 групп крыс, состоявших из половозрелых самок (п=5) и 10 групп, состоявших из самцов. L-аргинин вводили в виде 10 % раствора в дозах 20 мг/кг, 100 мг/кг, 200 мг/кг, 500 мг/кг и 1000 мг/кг внутрижелудочно и внутрибрюшинно.
Известно, что пик повышения концентрации нитрат- и нитрит-анионов в крови отмечается через два часа внутрижелудочного введения [9, 10, 11]. Исходя из этого, активность системы NO определяли через 2 часа после введения их в желудок.
Выявлены половые особенности и дозазависимый характер изменения уровня содержании нитрат- и нитрит-анионов в крови и моче у крыс при введении субстрата NO-синтаз - L-аргинина. Максимальное повышение концентрации метаболитов NO отмечается при внутрижелудочном введении L-аргинина в дозе 200 мг/кг, при внутрибрюшинном - в дозе 20 мг/кг.
Установлено, что при нагрузке L-аргинином в дозе 20 мг/кг организм самцов белых крыс реагирует повышением уровня стабильных метаболитов оксида азота в плазме крови в 1,35 раза относительно интактнои группы (р 0,001), у самок отмечается только тенденция к увеличению исследуемого показателя (таблица 1). После введения L-аргинина (100 мг/кг) содержание NOx в плазме крови самок увеличивается в 1,49 раза (р 0,05), у самцов - в 1,64 раза (р 0,05) относительно интактнои группы; нагрузка в дозе 200 мг/кг сопровождается увеличением NOx в организме самок в 3,16 раза (р 0,01), в организме самцов - в 2,0 раз (р 0,001).
У самок при нагрузке L-аргинином в дозе 500 мг/кг отмечается тенденция к увеличению исследуемого показателя относительно интактнои группы, у самцов - к снижению (в 1,18 и 1,20 раза соответственно).
При введении L-аргинина в дозе 1000 мг/кг у самок выявлено снижение концентрации NOx в плазме крови в 1,41 раза (р 0,001), у самцов напротив увеличение - в 1,78 раза (р 0,001) относительно интактнои группы. Концентрация метаболитов NO в моче при нагрузке L-аргинином также изменяется дозазависимо.
Введение L-аргинина в дозе 20 мг/кг вызывает увеличение содержания стабильных метаболитов оксида азота в моче в 1,63 раза у самок (р 0,001), в 1,47 раза у самцов (р 0,001). Нагрузка L-аргинином в дозе 100 мг/кг вызывает увеличение величины исследуемого показателя в 2,42 раза у самок (р 0,001), в 1,63 раза (р 0,001) у самцов относительно интактной группы. Повышение вводимой дозы L-аргинина, вводимого в организм, до 200 мг/кг сопровождается также увеличением NOx в 1,66 и 2,0 раза соответственно (р 0,001); до 500 мг/кг - в 3,11 и 2,99 раза (р 0,001); до 1000 мг/кг - в 1,91 и 1,98 раза (р 0,001) относительно интактной группы (таблица 2).
Для определения ответной реакции системы NO при введении индифферентного вещества внутрибрюшинно вводили физиологический раствор. Суммарная концентрация нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови белых крыс после внутрибрюшинного введения физиологического раствора составляет у самок 35,09±6,257 мкмоль/л, у самцов - 33,64±4,646 мкмоль/л, что достоверно не отличается от соответствующего показателя у интактных крыс (35,57±2,577 мкмоль/л и 32,19±2,526 мкмоль/л соответственно).
При внутрибрюшинном введении высоких доз L-аргинина (1000 мг/кг) через 5-10 мин отмечается снижение двигательной активности крыс, углубленное, редкое дыхание, отказ от пищи и воды. Такое состояние продолжается 15-30 минут и постепенно возвращается к физиологической норме. Установлено, что повышение активности системы оксида азота при введении эндогенного донора NO имеет половую специфичность. При внутрижелудочном введении L-аргинина в дозе 200 и 500 мг/кг содержание нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови у крыс-самок выше в 1,75 раза (р 0,005) и 1,57 раза (р 0,01) соответственно относительно уровня метаболитов NO крыс-самцов. При внутрибрюшинном введении L-аргинина (20 мг/кг) отмечается похожая картина. Уровень метаболитов оксида азота в крови крыс-самок в 1,22 раза (р 0,05) выше, чем у самцов. Содержание метаболитов NO при нагрузке L-аргинином в моче изменяется в зависимости от пола животного. При внутрижелудочном введении L-аргинина в дозе 100 мг/кг уровень NOx в моче выше у крыс-самок в 1,47 раза (р 0,005) по сравнению с самцами. После введения - L-аргинина в дозе 200 мг/кг этот показатель у крыс-самцов 1,21 раза выше (р 0,05) по сравнению с самками. Следовательно, физиологический эффект L-аргинина у крыс-самок проявляется более интенсивно, чем у самцов.
Активность системы оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности
В сыворотке крови белых крыс содержание кальция имеет тенденцию к снижению после нагрузки L-аргинином по отношению к исходному значению. Соответственно происходит увеличение в моче ионов кальция у самок 2,75 раза, у самцов - в 23,33 раза (р 0,001). Между содержанием нитрат- и нитрит-анионов в моче и концентрацией кальция в моче наблюдается положительная корреляция: у самок (г=0,60; р 0,001) и отрицательная корреляция у самцов (г=-0,97; р 0,0001).
Введение хлофузана в организм белых крыс сопровождается увеличением кальция в сыворотке крови у самок в 1,36 раза (р 0,001), у самцов в 1,87 раза (р 0,001) по сравнению с исходным значением, которая имеет отрицательную корреляцию (рисунок 23). Экскреция кальция достоверно не меняется, имеется лишь тенденция к увеличению у крыс обоего пола (рисунок 24).
Концентрация кальция в моче у крыс после введения доноров оксида азота и ингибитора его синтаз (п=5) Примечание: - достоверно по сравнению с интактной группой (р 0,005) Снижение активности синтаз оксида азота привело к увеличению кальция в сыворотке крови в 1,49 раза (р 0,001) ив 1,93 раза (р 0,005) у самок и самцов соответственно. Между содержанием нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови и концентрацией кальция в сыворотке крови наблюдается отрицательная корреляция (г= -0,28; р 0,002 у самок, г= -0,47; р 0,005 у самцов). Экскреция кальция с мочой увеличивается у самок в 3,09 раза (р 0,005) у самцов - в 3,25 раза (р 0,001) по сравнению с исходными значениями.
Эффект субстрата NO-синтаз L-аргинина на экскрецию кальция имеет половую специфичность. Так, у крыс-самцов концентрация кальция в моче выше в 3,38 раза (р 0,001) по сравнению с самками. Ингибирование NO-синтаз влияет на экскрецию кальция сильнее у самок, чем у самцов (выше в 1,75 раза; р 0,05).
3.3.5 Фосфоруретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз
Установлено, что количество неорганического фосфора в сыворотке крови уменьшается во всех группах при введении доноров и ингибитора оксида азота. Экскреция исследуемого вещества с мочой имеет тенденцию к увеличению при введении L-аргинина у самок и самцов. При введении хлофузана и L-NAME экскреция фосфора с мочой у самок имеет тенденцию к увеличению, у самцов достоверно уменьшается (рисунок 26).
Количество неорганического фосфора в крови у крыс контрольной группы составляет 1,47±0,121 ммоль/л и 1,41±0,085 ммоль/л у самок и самцов соответственно. Нагрузка физиологическим донором NO привело к уменьшению фосфора в крови у самок в 1,96 раза (р 0,005), у самцов -в1,28раза(р 0,05). і Содержание фосфора в плазме крови у самок I Содержание фосфора в плазме крови у самцов
Концентрация фосфора в плазме крови у крыс после введения доноров оксида азота и ингибитора его синтаз (п=5) Примечание: - достоверно по сравнению с интактной группой (р 0,05)
Экскреция неорганического фосфора с мочой имеет лишь тенденцию к увеличению, без достоверных отличий (рисунок 27).
Установлено снижение фосфора в сыворотке крови при введении хлофузана в 1,77 раза (р 0,01) ив 1,92 раза (р 0,005) у самок и самцов соответственно. Между содержанием нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови и концентрацией фосфора в сыворотке крови наблюдается положительная корреляция (г=0,98; р 0,001).
Выявлено достоверное снижение экскреции фосфора с мочой у самцов в 5,00 раз (р 0,05), а у самок отмечена тенденция к увеличению. Между содержанием нитрат- и нитрит-анионов в моче и концентрацией фосфора в моче наблюдается высокая положительная корреляция (г=0,85; р 0,001).
Снижение активности системы оксида азота привело к снижению фосфора в сыворотке крови у самок и самцов в 1,65 раза (р 0,005) ив 1,86 раза (р 0,01) соответственно. Отмечается снижение экскреции фосфора с мочой у самцов в 6,52 раза (р 0,05). У самок имеется лишь тенденция к увеличению этого показателя по сравнению с исходным значением (рисунок 27).
Установлено, что концентрация фосфора в сыворотке крови увеличивается при введении L-аргинина, у крыс-самцов более интенсивно, чем у самок (выше в 1,47 раза; р 0,05).
При нагрузке L-аргинином увеличение концентрации нитрат- и нитрит-анионов в крови сопровождается увеличением объема выделяемой мочи, а также повышением экскреции ионов натрия, кальция, хлора и калия с мочой. Выявлена половая специфичность физиологического эффекта NO на ионоуретическую функцию почек, который более выражен у самцов.
На введение ингибитора синтаз оксида азота - L-NAME наблюдается более высокая чувствительность организма самцов, по сравнению с самками. Снижение образования оксида азота влияет на транспорт многих ионов в почечных канальцах. Увеличение в организме NO без участия синтаз оксида азота сопровождается изменением ионоуретической функции почек, но отличается от действия эндогенного донора оксида азота - L-аргинина. Физиологический эффект NO на ионоуретическую функцию почек более выражен у самцов относительно самок.
Тендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на почечные процессы: клубочковую фильтрацию, канальцевую реабсорбцию, канальцевую секрецию
Ранее была установлена половая специфичность активности системы оксида азота, а также изменение гидроуретической и ионоуретической функции почек на введение доноров оксида азота и ингибитора NOS. Дальнейшие исследования направлены на выявление половой специфичности изменения почечных процессов при разных уровнях активности системы NO.
Для изучения процессов клубочковой фильтрации, канальцевой реабсорбции, канальцевой секреции были поставлены эксперименты на белых нелинейных крысах.
Установлено, что при введении L-аргинина происходит увеличение суточного диуреза у самок и самцов крыс в 1,75 раза и в 2,01 раза соответственно по сравнению с интактной группой (р 0,05; рисунок 28).
Снижение образования оксида азота путем введения блокатора синтаз оксида азота привело к уменьшению суточного диуреза у самцов в 1,71 раза (р 0,03), а у самок имело лишь тенденцию к уменьшению.