Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 15
1.1 Эколого-биологическая характеристика лотоса орехоносного 15
1.2 Фитохимические показатели лотоса орехоносного 16
1.3 Физиологические эффекты БАВ растительного происхождения 19
1.3.1 Эффекты биологически активных веществ растительного происхождения на поведенческие и психофизиологические показатели
1.3.2 Иммунотропные эффекты растительных экстрактов 30
1.3.3 Эндокринные и метаболические эффекты растительных экстрактов и их биологически активных веществ
1.3.4 Механизм действия растительных биологически активных веществ на сердечно-сосудистую систему
1.3.5 Влияние растительных флавоноидов и алкалоидов различных химических групп на свободнорадикальный гомеостаз млекопитающих
Глава 2. Материалы и методы исследования 75
2.1 Характеристика объектов и условий экспериментов 75
2.2 Получение экстрактов из разных частей лотоса орехоносного 80
2.3 Химические методы 81
2.4 Физиологические методы 85
2.5 Биохимические методы 90
2.6 Статистические методы 94
Глава 3. Химический состав экстрактов лотоса орехоносного 95
3.1 Результаты анализа экстрактов на флавоноиды 95
Глава 4. Эффекты биологически активных веществ лотоса орехоносного на поведение и вегетативную регуляцию
4.1 Поведенческие реакции в Суок-тесте в зависимости от длительности введения
4.2 Дозозависимые поведенческие и психофизиологические эффекты экстрактов из листьев, лепестков, семян и коробочек лотоса орехоносного
4.3 Эффекты биологически активных веществ экстрактов лотоса орехоносного при экспериментальной дислипидемии на поведенческие и психофизиологические показатели
4.4 Волновые характеристики вариабельности сердечного ритма при введении растительного экстракта семян лотоса
4.5 Обсуждение результатов исследования 131
Глава 5. Иммуностимулирующие эффекты биологически активных веществ лотоса орехоносного
5.1 Определение периода наиболее выраженного эффекта экстракта семян лотоса орехоносного на лейкоцитарную формулу крови и фагоцитарную активность нейтрофилов
5.2 Эффекты экстрактов лотоса орехоносного на лейкоцитарную формулу, фагоцитарную активность нейтрофилов в зависимости от дозы
5.3 Показатели крови при введении экстрактов из разных частей лотоса орехоносного в условиях экспериментальной дислипидемии
5.4 Изменение уровня интерлейкина-1 под действием биологически активных веществ лотоса орехоносного
5.5 Уровень гормонов щитовидной железы при введении экстрактов лотоса в условиях экспериментальной дислипидемии
5.6 Обсуждение результатов исследования 162
Глава 6. Антиоксидантные эффекты экстрактов лотоса 168
орехоносного
6.1 Свободнорадикальный гомеостаз при разной продолжительности введения экстракта семян лотоса орехоносного
6.2 Дозозависимые эффекты экстрактов лотоса орехоносного на свободнорадикальный гомеостаз
6.2.1 Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная активность в ткани печени
6.2.2 Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная активность в семенниках
6.3 Эффекты экстрактов из разных частей лотоса орехоносного при экспериментальной дислипидемии на свободнорадикальный гомеостаз
6.4Обсуждение результатов исследования 209
Заключение 216
Выводы 222
Библиографический список
- Эффекты биологически активных веществ растительного происхождения на поведенческие и психофизиологические показатели
- Химические методы
- Результаты анализа экстрактов на флавоноиды
- Эффекты биологически активных веществ экстрактов лотоса орехоносного при экспериментальной дислипидемии на поведенческие и психофизиологические показатели
Введение к работе
Актуальность исследования. Многочисленными исследованиями
показаны антиоксидантные (Jung H.A. et al., 2003; Choe J.H. et al., 2010;
Huang B. et al., 2010; Ahn Y.J. et al., 2014), гиполипидемические (Du H. et al.,
2010; Lin M.C. et al., 2009; Guo F. et al., 2013; Sharma B.R. et al., 2016),
гипогликемические (Sharma B.R. et al., 2016), гипохолестеринемические
(Ohkoshi E. et al., 2007; Lin M.C. et al., 2009), антипролиферативные (Nishkruti
R.M. et al., 2013), антиишемические (Kim J.M. et al., 2006),
антикоагуляционные (Zhou Y.J. et al., 2013), противоопухолевые (Arjun P. еt al., 2012; Yoon J.S. et al., 2013; Poornima P. et al., 2013), противовоспалительные (Liao C.H et al., 2011; Lin J.Y. et al., 2006), антидепрессантные (Kang M. et al., 2005b), гепатопротекторные (Кондратенко Е.И. и др., 2015), гипотензивные (Venkatesh B., Dorai A., 2011), антиаритмические (Li G.R., et al., 1989a; 1989b; 1990; Guo F. et al., 2013; Durairaj B., Dorai A., 2014), антиамнезические (Jung H.A. et al., 2010) и другие эффекты биологически активных веществ (БАВ) лотоса орехоносного, однако отсутствуют целостные концептуальные представления о действии биологически активных веществ, выделенных из разных частей лотоса орехоносного, на функциональные системы организма.
Содержание в лотосе орехоносном комплекса биологически активных веществ с различной химической структурой (алкалоиды, фенольные соединения и др.) определяет широту физиологических эффектов.
Ведущую роль в физиологических эффектах БАВ растительного
происхождения отводят нейрофизиологическим и иммуномодулирующим
эффектам (Willams R.J. et al., 2012; Spencer J.P. 2008; 2009; Цыдендамбаева
П.Б. с соавт., 2006). Однако экспериментальные данные, показывающие
дозозависимые эффекты биологически активных веществ, очень
немногочисленны (Krishnamoorthy G. et al., 2009; Zhou T. et al., 2009;
Trongtorsak P. et al., 2007). В литературе приводятся разрозненные сведения
об используемых для экстракции частей растения, способах экстракции,
растворителе. Не изучена продолжительность введения экстрактов, что также
имеет значение для выявляемых физиологических эффектов. Приводятся
неоднозначные, а порой и противоречивые, данные об основных
действующих веществах растительных экстрактов, определяющих
физиологические эффекты.
В зарубежной литературе приводятся экспериментальные исследования по влиянию биологически активных веществ лотоса орехоносного как выделенных и действующих изолированно, так и в виде экстрактов, полученных из разных частей растения на функциональные системы организма и процессы метаболизма (Mukherjee P.K. et al., 1996a; 1996b; 2009; Velusami C.C. et al., 2013; Sohn D.H. et al., 2003.). В России проводились единичные исследования по изучению физиологических эффектов лотоса орехоносного (Тюренков И.Н. и др., 1995). Однако среди многочисленных весьма разрозненных результатов экспериментов отсутствуют комплексные исследования по влиянию биологически активных веществ лотоса
орехоносного на организм млекопитающих, раскрывающие механизмы действия алкалоидов, флавоноидов, гликозидов и других классов веществ исследуемого растения на нейро-иммуно-метаболические функциональные взаимосвязи целостного организма.
В настоящее время накоплено значительное число экспериментальных
доказательств функциональной зависимости иммунологических показателей
от нейропсихологического статуса организма (Самотруева М.А. с соавт.,
2009; Абрамов В.В., 1991; Ветлугина Т.П., Иванова С.А., 2000). Нейро-
иммунно-метаболические функциональные взаимосвязи в настоящее время
могут рассматриваться на уровне многокомпонентной
морфофункциональной регуляторной системы млекопитающих (Акмаев И.Н., 1998). При этом большое внимание исследователи обращают на тот факт, что именно активность антиоксидантной и иммунной систем определяет устойчивость клеток к повреждающим экзо- и эндогенным факторам и осуществляют общий иммунологический надзор за состоянием организма (Цыденбаев П.Б. и др., 2006; Duan Y. et al., 2010).
Цель исследования – изучить нейрофизиологические, иммунно-
метаболические, антиоксидантные эффекты биологически активных веществ
лотоса орехоносного и разработать концептуальную модель
физиологических механизмов действия.
Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:
-
Изучить химический состав экстрактов лотоса орехоносного, полученных из лепестков, семян, коробочек и листьев растения. Выявить ведущие классы биологически активных веществ в каждом типе экстрактов.
-
Изучить влияние экстракта семян лотоса орехоносного на структуру ориентировочно-исследовательского поведения и уровень тревожности при разной продолжительности введения экстракта.
-
Проанализировать дозозависимое влияние экстрактов лепестков, семян, листьев и коробочек лотоса орехоносного на поведение животных в тесте Порсолт и Суок-тесте и изучить изменение поведенческих реакций крыс в условиях хронического введения экстрактов на фоне экспериментальной дислипидемии.
-
Исследовать влияние биологически активных веществ семян лотоса орехоносного на волновые характеристики вариабельности сердечного ритма.
-
Выявить влияние экстракта семян лотоса орехоносного на показатели лейкоцитарной формулы и фагоцитарной активности нейтрофилов и их зависимость от длительности введения экстракта.
-
Изучить дозозависимые эффекты экстрактов лепестков, семян, коробочек и листьев лотоса орехоносного на показатели лейкоцитарной формулы, фагоцитарную активность нейтрофилов и уровень интерлейкина-1 и изучить действие различных экстрактов
лотоса орехоносного в условиях их хронического введения на фоне экспериментальной дислипидемии.
-
Оценить влияние экстракта семян лотоса орехоносного на свободнорадикальный гомеостаз и выявить периоды наиболее эффективного антиоксидантного действия биологически активных веществ экстракта.
-
Оценить влияние экстрактов лотоса орехоносного на про- и антиоксидантный баланс у крыс, его зависимость от дозы и вида экстракта, определить наиболее эффективные из них в условиях экспериментальной дислипидемии.
-
Выявить функциональную взаимосвязь между нейрофизиологическими, иммунно-метаболическими и антиоксидантными эффектами БАВ лотоса орехоносного и разработать концептуальную модель их физиологического механизма действия. Научная новизна. Впервые на основе исследованных
физиологических эффектов биологически активных веществ лотоса орехоносного выявлены закономерности их влияния на регуляторные системы организма (нервную соматическую и вегетативную, эндокринную и иммунную) и некоторые метаболические процессы. Установлено, что модальность и степень выраженности физиологических эффектов влияния биологически активных веществ лотоса орехоносного зависят от продолжительности введения экстракта. Впервые установлено, что физиологические эффекты действия биологически активных веществ обусловлены типом и дозой экстракта. Впервые показано, что максимальной физиологической эффективностью по влиянию на высшую нервную деятельность, висцеральную и эндокринную регуляцию, иммунологический контроль и свободнорадикальные процессы обладают экстракты лепестков лотоса орехоносного.
Установлено, что экстракты лотоса орехоносного усиливают
ориентировочно-исследовательские паттерны поведения, снижают
эмоциональность и уровень тревожности. Установлено, что влияние экстракта семян лотоса орехоносного на вариабельность сердечного ритма обусловлено типологическими особенностями, связанными с исходной волновой структурой спектра и гендерными признаками.
Показано, что биологически активные вещества лотоса орехоносного
проявляют иммуностимулирующие свойства, впервые установлена
дозозависимость в проявлении этих свойств и выявлено усиление фагоцитарной активности нейтрофилов, изменение лейкоцитарной формулы и повышения уровня интерлейкина-1 под действием экстрактов лотоса орехоносного и при экспериментальной дислипидемии.
Установлено, что проявление антиоксидантных эффектов
биологически активных веществ лотоса обусловлено видом ткани и продолжительностью воздействия биологически активных веществ лотоса орехоносного. Выявлено, что проявление и выраженность антиоксидантных
свойств экстракта семян лотоса определяется продолжительностью его введения крысам.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана
теоретическая основа для концептуальных представлений о закономерностях
влияния и механизмах действия биологически активных веществ лотоса
орехоносного, раскрывающих механизмы действия алкалоидов,
флавоноидов, гликозидов и других классов веществ исследуемого растения на нейро-иммуно-метаболические функциональные взаимосвязи целостного организма. Результаты исследования существенно дополняют теоретическую основу для развития направления в физиологии по изучению механизмов модулирующего, регулирующего, корригирующего действия веществ растительного происхождения на физиологические процессы в организме человека и животных. Разработанные концептуальные представления изучения физиологических эффектов экстрактов лотоса может стать основой для оценки эффективности биологически активных веществ других растительных экстрактов.
Получено экспериментальное обоснование для расширения спектра практического применения экстрактов лотоса орехоносного в медицине и фармации. Изучение физиологических эффектов биологически активных веществ лотоса орехоносного является перспективным для создания на их основе новых оригинальных фитопрепаратов комплексного действия.
Результаты работы могут быть использованы в учебном процессе в
рамках дисциплин «Физиология», «Биологически активные вещества
растительного происхождения» и «Биохимия». Запатентованы:
анксиолитические, антидепрессивные иммунотропные, антиоксидантные и гиполипидемические эффекты БАВ лотоса орехоносного (патент на изобретение № 2497538 «Средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, на основе экстракта семян лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)»; патент на изобретение № 2496508 «Средство, обладающее иммунотропной и антиоксидантной активностью, на основе экстракта семян лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)»; патент на изобретение № 2480230 «Средство, обладающее гиполипидемическим действием, на основе экстракта семян лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)»).
Методология и методы исследования
Исследования проведены на 442 белых беспородных крысах обоего пола, средней массой 220 г. Животные содержались в стандартных лабораторных условиях вивария, при свободном доступе к воде и пище. Все работы с лабораторными животными проводили с соблюдением принципов биоэтики (Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных, 1993) и правил лабораторной практики (Правила лабораторной практики в РФ, 2003). Декапитацию животных осуществляли под эфирным наркозом. Были проведены 5 серий экспериментов.
В первой серии проводили химический анализ полученных экстрактов
лотоса орехоносного и изучали их токсичность при внтурижелудочном
введении экспериментальным животным. При этом проводили
стандартизацию экстрактов по группе флавоноидов (рутину, кверцетину), изучали влажность и общую золу в экстрактах.
Во второй серии изучали влияние экстракта семян лотоса орехоносного на сердечный ритм крыс. Экспериментальным животным вводили экстракт семян лотоса орехоносного в дозе 50 мг/кг массы тела внутрижелудочно с помощью зонда ежедневно в течение 14 дней. Контрольным животным вводили физиологический раствор по той же схеме.
В третьей серии изучали физиологические эффекты экстракта семян лотоса орехоносного и их зависимость от длительности введения на показатели ориентировочно-исследовательского поведения и уровень тревожности крыс в Суок-тесте, показатели лейкоцитарной формулы, фагоцитарной активности нейтрофилов, уровень ТБК-активных веществ и каталазную активность в ткани печени, плазме и миокарде. При этом экстракт семян лотоса орехоносного в дозе 50 мг/кг массы тела вводили в течение 7, 14, 21, 28 и 42 дней.
В четвертой экспериментальной серии изучали дозозависимое влияние
экстрактов листьев, лепестков, семян и коробочек лотоса орехоносного в
дозах 50, 100, 200 и 400 мг/кг на поведенческие и психофизиологические
показатели (структуру ориентировочно-исследовательского поведения,
эмоциональность, двигательную активность, уровень тревожности в Суок-
тесте и поведение отчаяния в тесте Порсолт), показатели крови и иммунные
реакции (лейкоцитарную формулу, фагоцитарную активность нейтрофилов и
уровень ИЛ-1), свободнорадикальный гомеостаз (скорость спонтанного и
аскорбатзависимого ПОЛ, исходный уровень МДА и каталазная активность в
ткани печени и семенниках). Экстракты вводили животным
внутрижелудочно в течение 14 дней.
В пятой серии экспериментов изучали влияние хронического введения
(9 недель) экстрактов семян, листьев, лепестков и коробочек лотоса
орехоносного в дозе 50 мг/кг массы тела в условиях экспериментальной
дислипидемии: обогащения рациона крыс триглицеридами животного
происхождения и внутрижелудочном введении масляного раствора
холестерина – на поведенческие и психофизиологические показатели
(структуру ориентировочно-исследовательского поведения,
эмоциональность, двигательную активность, уровень тревожности в Суок-тесте и поведение отчаяния в тесте Порсолт), показатели крови (лейкоцитарную формулу, фагоцитарную активность нейтрофилов и общее количество лейкоцитов), интенсивность свободнорадикального окисления (уровень ТБК-активных продуктов и каталазную активность в ткани печени, семенниках, миокарде, эритроцитах, селезенке, гипоталамусе коре), активность ферментативного звена антиоксидантной системы (уровень церулоплазмина в эритроцитах и плазме крови, активность СОД в плазме). Дислипидемию моделировали введением крысам масляного раствора
холестерина в дозе 100 мг/кг массы тела (Коренская И.М. и др., 2004). Холестерин растворяли в растительном масле и вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в течение 9 недель. В корм животным добавляли 30% животных жиров.
Изотонический раствор NaCl и экстракт семян лотоса орехоносного вводили внутрижелудочно с помощью зонда. Внутрижелудочное введение изотонического раствора NaCl производилось для анализа влияния стресса, получаемого животными во время процедуры введения экстракта.
Для исключения влияния гормонального фона самок на исследуемые показатели, материал на анализ брали только в стадию диэструса. Для этого определяли стадии эстрального цикла с помощью влагалищных мазков по стандартной методике (Кабак Я.М., 1968).
Водно-спиртовой экстракт семян лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) был приготовлен согласно протоколу WHO CG-04. Для этого 500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния и подвергали спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе. В итоге получали около 5% вязкого смолообразного вещества. Семена, коробочки, лепестки и листья лотоса орехоносного отдельно измельчали до порошкообразного состояния. 20 г каждого порошка помещали в 500 мл 60%-ного этанола на 3 часа при 60oС в термостате. Спиртовые экстракты фильтровали, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе при 60С. Растворы экстрактов вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда.
Перед экспериментом и по окончании введения экстрактов анализировали изменения массы тела экспериментальных животных.
В работе использовали химические, физиологические, биохимические методы и методы статистического анализа данных.
В полученных водно-спиртовых экстрактах лотоса орехоносного
определяли общее содержание флавоноидов методом ТСХ с
хроматоденситометрией.
ЭКГ регистрировали у бодрствующих нефиксированных животных на аппаратно-программном комплексе «Варикард» («Рамена», Россия) по методике (Курьянова Е.В., 2009; 2011). Данные обрабатывали в компьютерной программе «ИСКИМ6» («Рамена», Россия) на отрезках ЭКГ из 300 интервалов R-R. Рассчитывали частоту сердечных сокращений (ЧСС), индекс напряжения на основе формулы Баевского (Баевский Р.М. и др., 2001) при ширине класса гистограммы 7,8 мс:
ИН=(50/7,8)*(АМо/(2*Мо*Х))*1000, где SD (мс) – среднее квадратическое отклонение кардиоинтервалов, RMSSD (мс) – квадратный корень из суммы квадратов разности величин последовательных пар RR-интервалов, абсолютную мощность волн в диапазонах: HF (0,9-3,5 Гц), LF (0,32-0,9 Гц), VLF (0,17-0,32 Гц), индекс централизации IC (IC=(LF+VLF)/HF). ВСР анализировали до начала введения и через 1 ч после последнего введения препаратов.
Для функциональной оценки поведенческих и психофизиологических показателей у животных применялись тесты стандартной модификации: «Суок-тест» (СТ) (Калуев А.В., Туохимаа П., 2005), тест «Вынужденное плавание» («Порсолт») (Эпштейн О.И., Молодавкин Г.М., Воронина Т.А., 2003; Porsolt R.D., 1978).
Функциональную активность иммунной системы животных оценивали на основании стандартных тестов: реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) с определением индекса реакции, латексного теста по изучению фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, изучения лейкоцитарной формулы и уровню интерлейкина-1 (Хаитов Р.М., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебров А.И., 2005). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови применяли латексный тест. Рассчитывали следующие показатели, отражающие фагоцитарную активность нейтрофилов (Шигина Ю.В., 2006): фагоцитарный индекс (ФИ) – процент фагоцитирующих нейтрофилов от общего их числа (100 клеток): фагоцитарное число (ФЧ) – среднее число латекса и, поглощенное одной клеткой. Уровень сывороточных ИЛ-1 тестировали твердофазным иммуноферментным методом «сэндвича». Процедура выполнения ИФА проводилась с использованием наборов фирмы «Bender Medsystems».
Интенсивность окислительно-восстановительных процессов в
гомогенатах органов и крови оценивали посредством определения интенсивности ПОЛ, уровня ТБК-активных продуктов и каталазной активности. Об активности ПОЛ судили по исходному содержанию МДА, а также по скорости спонтанного и аскорбатзависимого ПОЛ (Стальная И.Д., Горишвили Г.Т., 1977). В эритроцитах и плазме крови изучали уровень церулоплазмина и активность СОД. Для определения активности СОД в биологических материалах использовался метод, предложенный С. Чевари и соавт. (1984). Метод основан на способности СОД конкурировать с нитросиним теетразолием за супероксидные анионы. Определение активности церулоплазмина проводили по методике, предложенной Э.В. Тен (2007). В основе определения активности каталазы в гомогенате органов лежит способность перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс (Королюк М.А. с соавт., 1988).
Все полученные в ходе исследования данные статистически обработаны с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферонни, различия считали достоверными при p<0,05.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Комплексный методологический подход к изучению физиологических эффектов растительных экстрактов лотоса орехоносного позволяет выявить широкий спектр изменений в деятельности нервной системы, поведенческих характеристиках, иммунном и свободнорадикальном статусе организма.
-
Биологически активные вещества лотоса орехоносного оказывают выраженное влияние на двигательную и эмоциональную активность,
исследовательское поведение, уровень тревожности и поведение отчаяния
у крыс, то есть оказывают выраженное анксиолитическое,
антидепрессивное, усиливающее ориентировочно-исследовательское
поведение эффекты, степень и направленность которых зависят от срока введения, типа экстракта и проявляются дозозависимо.
-
Биологически активные вещества лотоса орехоносного обладают выраженным иммунотропным действием. При этом экстракты усиливают фагоцитарную активность нейтрофилов в зависимости от длительности введения, типа и дозы экстракта и повышают уровень интерлейкина-1.
-
Биологически активные вещества лотоса орехононосного обладают антиоксидантными свойствами, проявления которых имеют тканеспецифические особенности и определяются продолжительностью введения, типом и дозой экстракта. В ткани печени антиоксидантные свойства проявляются при всех исследуемых дозах, сроках введения и типах экстракта.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность
результатов выполненного исследования определяется статистически
значимыми объемами исследованных материалов (442 белых беспородных
крысах обоего пола, 5 экспериментальных серий), использованием
унифицированных химических, физиологических и биохимических методов
исследований; статистической обработкой результатов, выявление
достоверности различий по критерию Стьюдента с поправкой Бонферрони.
Апробация работы. Материалы диссертации апробированы на 7-й
международной научно-практической конференции «Достижения
фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины»
(Астрахань, 5-8 мая 2010); World Congress on Biotechnology (2011); второй
Международной научн. конф., посвященной 80-летию академика РАЕН,
заслуженного работника высшей школы РФ, доктора биологических наук,
профессора Д.Л. Теплого «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение»
(Астрахань, 2011); XXX Международной научно-практической конференции
«Современная медицина и фармацевтика: актуальные проблемы и
перспективы развития» (Украина, 2012); Четвертой международной научно-
практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и
прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург,
2012); Международной научно-практической конференции «Актуальные
проблемы естественных и математических наук» (Новосибирск, 2013); IX
Международной научно-практической конференции «Достижение
фундаментальных наук и возможности трансляционной медицины в решении актуальных проблем практического здравоохранения» (Астрахань, 2013); Всероссийской научной конференции с международным участием «Биотехнологии: наука и практика, инновации и бизнес» (Астрахань 2013); Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетические и фармакологические аспекты изучения ценных биологически активных компонентов» (Астрахань, 24-25 апреля 2014 г.); II Международной научно-практической конференции «Современная биология: актуальные вопросы»
(17-18 октября 2014 г., Санкт-Петербург); IV Съезде физиологов СНГ (Сочи-
Дагомыс, 8-12 октября 2014 г.); Международной научно-технической
конференции «Продовольственная безопасность: научное, кадровое и
информационное обеспечение» (Воронеж, 13-14 ноября 2014 г.); 12th
International Conference on Chemistry and its Role in Development (ICCRD'12) –
(Mansoura & Sharm El-Sheikh, Egypt, 16-20 March 2015); VIII Московском
Международном Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы
развития» (2015); Международной научной конференции, посвященной 75-
летию Адыгейского государственного университета «» (Адыгея, 2015); Keystone Symposia on Molecular and Cellular
Biology «New Therapeutics for Diabetes and Obesity» (17 April, 2016, California
USA).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 45 работ, общим объемом 10,4 п.л. (авторский вклад 7,14 п.л.), в том числе статьи в научных изданиях, рекомендованных ВАК для докторских диссертаций – 16, патентов на изобретение – 3, статьи в прочих рецензируемых журналах – 3, статьи в материалах международных и всесоюзных конференций – 21.
Благодарности. Автор выражает благодарность Курьяновой Е.В. и Жуковой Ю.Д. за помощь в изучении влияния БАВ лотоса орехоносного на вариабельность сердечного ритма.
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка. Диссертация изложена на 265 страницах, содержит 38 таблиц и 50 рисунков. Список литературы включает 324 источника, в том числе 169 иностранных.
Эффекты биологически активных веществ растительного происхождения на поведенческие и психофизиологические показатели
Фитохимический анализ семян лотоса показал, что они богаты аспарагином, жирами, белками, аминокислотами, ненасыщенными жирными кислотами, танином и минералами (Wu J.Z. et al., 2007). Также Mukherjee P.K. и соавт. было установлено (2009), что в семенах лотоса содержатся минеральные вещества, такие как хром (0,0042%), натрий (1,00%), калий (28,5%), кальций (22,10%), магний (9,20%), медь (0,0463%), цинк (0,0840%), марганец (0,356%) и железо (0,1990%). Данными авторами установлена, что содержание общей золы в семенах составляет – 4,5%, влаги – 10,5%, сырых углеводов – 1,93%, сырой клетчатки – 10,6%, жиров – 72,17%, белков – 2,7%; их энергетическая ценность – 348,45 кал на 100 г. Кроме того, семена содержат пальмитиновую кислоту и стероиды: ситостерин, эфир ситостерина. В зародышах содержатся алкалоиды 1-1,25%: лиензинин, нуциферин, пронуциферин, лотузин, неферин, 0-метилниферин, изолиензинин; флавоноиды: цинарозид, гиперин, рутин (Nishkruti R.M. et al., 2013). Согласно Sandip G.B. и Sheetal S.B. (2014) в сырых семенах содержатся: жиры, белки, углеводы, витамины: В1 тиамин, В2 рибофлавин, В3 пантотеновая кислота, В6 пиридоксин, В9 фолиевая кислота, РР ниациновый эквивалент.
Основными вторичными метаболитами, содержащимися в семенах лотоса орехоносного, являются алкалоиды: даурцин, лотузин, нуциферин, пронуциферин, лиензинин, изолиензинин, роемерин, неферин, армепавин. Семена также содержат галловую кислоту, сапонины, углеводы, полисахариды. Из коробочек был выделен процианидин (Ling Z.Q. et al., 2005). Кроме того, в семенах содержится D-3-бром-О-метил-армепавин, D 1,2,3,4-тетрагидро-6-метокси-1-2-метил-7-изоквинолинол. Кислотный гидролиз и метилирования показали, что полисахариды в семенах, в основном, состоят из четырех типов моносахаридов: D-галактозы, L арабинозы, D-манозы и D-глюкозы (Das S. et al., 1992). Газо-жидкостный и масс-спектральный анализы показали, что листья богаты алкалоидами. Анализ нефенольной фракции экстракта листьев выявил наличие нуциферина, роемерина, анонаина, пронуциферина, N норнуциферина (Xubiao L. et al., 2005). Два бензодиазепиновых алкалоида коклаурин, норкоклаурин также были обнаружены в экстракте листьев. В листьях содержатся флавоноиды: армепавин и N-метилизококлаурин. Дигидроремерин, дигидронуциферин, дигидроанонаин, N метилизококлаурин, анонаин, пронуциферин, N-норнуциферин, О норнуциферин, нуциферин, ремерин, роемерин, армепавин, лиензинин, изолиензинин, неферин, азимилобин, лиринидин были изолированы из листьев и черешков лотоса орехоносного (Luo X. et al., 2005). Листья также содержат гликозид нелумбозид и флавоноиды, такие как кверцетин, лейко-антоцианидин (лейкоцианидин и лейкодельфинидин).
Кроме того, в листьях содержатся и другие флавоноиды: кверцетин-3-О- арабинопиранозил--галактопиранозид, кверцетин-3-О--D-глюкуронид, рутин, катехин, гиперозид, изокверцетин, астрагалин (Guan Z.X. et al., 2003; Ono Y. et al., 2006).
Цветки лотоса орехоносного также богаты биологически активными веществами. Несколько флавоноидов были идентифицированы в тычинках лотоса орехоносного. Это кемпферол и 7 его гликозидов: кемпферол-3-O- D-галактопиранозид, кемпферол-3-О--D-глюкопиранозид, кемпферол-7-О -D-глюкопиранозид, кемпферол-3-O-a-L-рамнопиранозил-(1-6)--D глюкопиранозид, кемпферол-3-O-a-L-рамнопиранозил-(1-2)--D глюкопиранозид, кемпферол-3-O-a-L-рамнопиранозил-(1-6)--D глюкуронопиранозид, кемпферол-3-О--D- глюкуронопиранозид, кемпферол-3-О--D-глюкуронопиранозил метиловый, мирицетин 3 ,5 диметиловый 3-О--D-глюкопиранозид, кверцетин-3-О--D-глюкопиранозид, нелумборозид А и нелумборозид В. Экстракт также содержал два изорамнетиновых гликозида: изорамнетин 3-О--D-глюкопиранозид, изорамнетин 3-O-a-L-рамнопиранозил-(1-6)--D-глюкопиранозид. Несколько нефлавоноидных компонента, включающие аденин, миоинозитол, арбутин, ситостерол, глюкопиранозид также были идентифицированы в тычинках лотоса (Mukherjee P.K et al., 2009). Цветки содержат флавоноиды: лютеолин, кверцетин, глюколютеолин, изокверцитрин, робинин (Chen S. et al., 2012). Растение лотоса орехоносного содержит, по мнению Bhardwaj A., Modi K.P. (2015), биологически активные вещества: флавонол – квелианин (кверцетин 3-О-глюкоронид), алкалоиды: коклаурин, норккоклаурин – найдены в листьях. Растение лотоса также содержит 3 бензодиазепиновых алкалоида: нелумбоферин, нелумборина А и В (Patel K.K. et al., 2012; Mehta N.R. et al., 2013).
Химические методы
До и после эксперимента оценивали вес тела, показатели крови, интенсивность свободнорадикального окисления, активность антиоксидантной системы, физиологические и психофизиологические показатели. Показатели крови оценивали по общему количеству лейкоцитов, лейкоцитарной формуле и фагоцитарной активности нейтрофилов. Интенсивность свободнорадикального окисления оценивали по уровню ТБК-активных продуктов в эритроцитах, печени, селезенке, сердце, семенниках, гипоталамусе, коре. Антиоксидантную активность оценивали по каталазной активности в эритроцитах, печени, селезенке, сердце, семенниках, гипоталамусе, коре, уровню церулоплазмина в эритроцитах и плазме крови и уровню СОД в плазме крови. Поведенческие и психофизиологические показатели оценивали по показателям в Суок-тесте и тесте Порсолт. Изотонический раствор NaCl, экстракт эхинацеи и экстракты лотоса орехоносного вводили внутрижелудочно с помощью зонда. Внутрижелудочное введение изотонического раствора NaCl производилось для анализа влияния стресса, получаемого животными во время процедуры введения экстракта. Экстракт эхинацеи использовали в качестве препарата сравнения.
Для исключения влияния гормонального фона самок на исследуемые показатели брали только в стадии диэструса. Для этого определяли стадии эстрального цикла с помощью влагалищных мазков по стандартной методике (Кабак Я.М., 1968).
Водно-спиртовой экстракт семян лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) был приготовлен согласно протоколу WHO CG-04. Для этого 500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния и подвергали спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе. В итоге получали около 5% вязкого смолообразного вещества. Раствор экстракта семян лотоса орехоносного (0,5%-ный) был приготовлен на физиологическом растворе. Семена, коробочки, лепестки и листья лотоса орехоносного отдельно измельчали до порошкообразного состояния. 20 г каждого порошка помещали в 500 мл 60%-ного этанола на 3 часа при 60oС в термостате. Спиртовые экстракты фильтровали, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе при 60С. Растворы экстрактов вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда. Экстракт эхинацеи водно-спиртовой готовили согласно (Huntley A.L. et al., 2005).
Приготовление растворов стандартных образцов: 1 мг стандартного образца кверцетина растворяли в 5 мл метанола в пикнометре вместимостью 10 мл. Объем пикнометра доводили до метки метанолом и тщательно перемешивали. Полученный раствор содержит 100мг/л (Level 1) кверцетина. Из этого раствора готовили стандартные растворы в метаноле с концентрациями 25мг/л (Level 4); 50мг/л (Level 3) и 75мг/л (Level 2). Растворы устойчивы в течение суток. Подготовка проб. Полученные растворы экстрактов лотоса орехоносного с осадком были разделены на две фракции: 1 – жидкая (G); 2 – осадок: из осадка провели экстракцию флавоноидов метанолом в течение 30 минут, центрифугируем 2 мин при 16000 об/мин и полученные метанольные экстракты использовали для анализа (MeOH)
Подготовка хроматографической камеры и приготовление элюента: хроматографическую камеру обкладывали по внутренним стенкам фильтровальной бумагой таким образом, чтобы нижняя часть бумаги касалась дна камеры.
10 мл муравьиной кислоты и 10 мл воды помещали в мерный цилиндр на 250 мл с притертой пробкой, тщательно перемешивали и затем добавляли 50 мл этилацетата и 30 мл бутанола, вновь тщательно перемешивали. Элюент вносили в хроматографическую камеру, смачивая при этом фильтровальную бумагу. Уровень подвижной фазы на дне камеры должен быть не менее 1,0 мм и не более 5,0 мм. Насыщение камеры 1 час при 20оС.
Подготовка хроматографических пластинок: пластинки перед работой промывали метанолом (восходящий метод) до верхнего края, высушивали и активировали при 120С в течение 20 мин в сушильном шкафу.
Нанесение стандартных образцов и проб на хроматографическую пластинку. Для нанесения образцов используют автосамплер CAMAG ATS4. Промытую и активированную пластинку помещали на столик автосамплера. Виалки со стандартными растворами и образцами помещали в штатив автосамплера. Расстояние от линии нанесения до нижнего края пластинки - 15 мм. Расстояние от точки нанесения до краев пластинки - 15 мм. Общее количество образцов на одной пластинке размером 10х15 см (включая стандарты) до 24 штук. Наносимый объем стандартных образцов и исследуемых проб - 4 мкл. Нанесение осуществляется полосой шириной 4 мм.
Пластинку помещали в предварительно насыщенную хроматографическую камеру и элюировали, длина пробега составляла 4,5 см. Пластинку высушивали в течение 5-10 мин при комнатной температуре (вытяжной шкаф), а затем в сушильном шкафу при температуре 85+30С в течение 5 мин. Далее оставляли для созревания пластинки на 6-12 ч при комнатной температуре в темном месте.
Количественная обработка хроматограммы. Для количественной обработки хроматограммы использовали сканирующий денситометр CAMAG TLC Scanner 3 при длине волны 410 нм и размером щели 2.00 х 0.2 мм. Прием данных и количественную обработку полученных результатов проводили на компьютере с использованием программы WinCATS (построение калибровки по площадям и расчет количества кверцетина в пробах).
Концентрацию кверцетина в анализируемых образцах рассчитывали по формуле:
С мг/таб = Стсх (mg/l) х Р х V(ml) х mт (mg) х 0.001 / mн (mg) С% = Стсх (mg/l) х Р х V(ml) х 0.1 / mн (mg), где Смг/таб – концентрация кверцетина в образце, мг/ в таблетке; С% -концентрация кверцетина в образце, %; Стсх – концентрация кверцетина в образце, рассчитанная по калибровке ТСХ, mg/l; P – коэффициент разбавления (используется только в случае разбавления экстракта); V – объем метанола, в котором проводилась экстракция образца, ml; mт – масса таблетки, mg; mн – масса навески образца для экстракции, mg; 0.001 – коэффициент пересчета l в ml; 0.1 – коэффициент пересчета на %
Содержание влаги в растительном сырье является одним из числовых показателей, характеризующих его доброкачественность. Превышение этого показателя выше нормы приводит к снижению качества при хранении. Метод определения влажности основан на определении потери в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ при высушивании сырья до абсолютно сухого состояния.
Результаты анализа экстрактов на флавоноиды
В ходе реакции готовили гомогенат ткани и плазму крови и разливали в пробирки по 0,25 мл. Затем в пробирки добавляли 3 мл раствора ортофосфорной кислоты и 1 мл раствора ТБК, накрывали конденсирующими колпачками и помещали в водяную баню на 45 мин при 100С. После кипячения пробирки охлаждали в холодной воде 3-5 мин. Далее пробирки интенсивно встряхивали до образования однородной белой суспензии, имеющей розовый оттенок, центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин (если после центрифугирования верхний слой бутанола в отдельных случаях непрозрачен, то необходимо повторить центрифугирование, предварительно перемешав стеклянной палочкой верхний слой бутанола). Сразу после центрифугирования отбирали 3 мл супернатанта в чистую пробирку и измеряли оптическую плотность опытной пробы против холостой пробы при двух длинах волн: 535 и 570 нм в кювете с толщиной слой 1 см. Измерение проводили не позднее 1,5 ч после центрифугирования.
Расчет содержания ТБК-активных продуктов производят по формуле: С = Dз5-D 7ох1б 0,156 где С - содержание ТБК-активных продуктов в опытной пробе, мкмоль/л; D535 - оптическая плотность опытной пробы при 535 нм, D570 - оптическая плотность опытной пробы при 570 нм, 0,156 - коэффициент молярной экстинции комплекса малоновый альдегид-ТБК с л/мкмоль/см, 16 -коэффициент разведения сыворотки. Результат измерения приводят в единицах оптической плотности.
В основе определения активности каталазы в гомогенате органов лежит способность перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майрова И.Г, Токарева В.Е., 1988). Реакция запускалась добавлением 0,1 мл гомогената тканей к 2 мл 0,03%-го раствора перекиси водорода. В холостую пробу вместо сыворотки вносили 0,1 мл дистиллированной воды. Реакцию останавливали через 10 минут добавлением 1 мл 4%-го раствора молибдата аммония. Интенсивность окраски измеряли на спектрофотометре при длине волны 410 нм против контрольной пробы, в которую вместо перекиси водорода вносили 2 мл воды. Активность каталазы рассчитывали по формуле: Е = (Аконтр - Аоп)/ Аконтр х100 %, где Е – активность каталазы (%); Аконтр и Аоп – экстинция контрольной и опытной проб.
Определение активности церулоплазмина проводили по методике, предложенной Э.В. Тен (2007). Метод основан на реакции окисления парафенилендиамина. В пробирку вносили 0,1 мл сыворотки крови, 1 мл 0,4 М ацетатного буфера (рН 5,6), 0,5 мл 1% водного раствора парафенилендиамина солянокислого, перемешивали и ставили на водяную баню при температуре 60оС на 10 мин. Реакцию останавливали добавлением 3,5 мл охлажденного 25% раствора едкого натра. Полученную жидкость оранжевого цвета измеряли при длине волны 440 нм. Окраска была стабильна не менее 30 мин. В контрольной пробирке компоненты смешивали в той же последовательности, но раствор едкого натра добавляли до нагрева фермент-субстратной смеси на водяной бане. Активность церулоплазмина измеряли в единицах оптической плотности.
Для определения активности СОД в биологических материалах использовался метод, предложенный С. Чевари и соавт. (1984). Метод основан на способности СОД конкурировать с нитросиним теетразолием (НСТ) за супероксидные анионы. Используемые реактивы: 1. Na-К-фосфатный буфер 0,15 М, рН 7,8. (буфер I); 2. Трис-ЭДТА буфер, 2мМ Трис, 1мМ ЭДТА, рН 8,0 (рН доводят HCl) (буфер II); 3. реагент I: буфер I, содержащий 0,17мМ ЭДТА, 0,5мМ НСТ и 0,3мМ ФМС; 4. реагент II: 1мМ НАДН приготовленный на буфере II. Для определения активности фермента к 2 мл реагента I прибавляли 0,05 мл плазмы крови, затем запускали реакцию прибавлением 0,1 мл реагента П. После перемешивания компонентов пробы устанавливали начальную экстинцию. Через 10 мин измеряли нарастание оптической плотности раствора. Нулевую пробу готовили по той же схеме, но без плазмы крови. Реакцию проводили при температуре 24-25оС. Измерения оптической плотности производили на спектрофотометре «Beckman Coulter DU-800» при длине волны 540 нм. Расчет проводили по формуле: ЦП = (ЕЪ ЕПР" х 100 = блокирования, Е0 где ЕО - экстинция реакционной смеси в отсутствии СОД (нулевой пробы); Е ПР - экстинция исследуемой пробы в состоянии равновесия.
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007 (Microsoft, США), STATISTICA 5.5 (StatSoft, Inc., США), BIOSTAT 2008 Professional 5.1.3.1, а также «БИОСТАТИКА». Достоверность отличий была определена с помощью t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони с учетом трех порогов: I порог - вероятность ошибки менее 0,05% (р 0,05), II порог менее 0,01% (р 0,01) и III порог - менее 0,001% (р 0,001) (Плохинский Н.А, 1970). Для анализа значимости изученных факторов в формировании признака был проведен однофакторный дисперсионный анализ. Полученные данные представлены в виде показателя силы влияния фактора на формируемый признак. Достоверность полученных данных определяли по критерию Фишера (Плохинский Н.А., 1980). В полученных образцах экстрактов лотоса орехоносного проводили химический анализ на определение концентрации основных биологически активных веществ влажности и общей золы.
Полученные растворы с осадком были разделены на две фракции: 1 – жидкая (G); 2 – осадок: из осадка провели экстракцию флавоноидов метанолом в течение 30 минут, центрифугируем 2 мин при 16000 об/мин и полученные метанольные экстракты использовали для анализа (MeOH)
Анализ флавоноидов показал, что экстракты, полученные из разных частей растений, отличались по концентрации рутина и кверцетина (табл.6). Концентрацию флавоноидов изучали в двух фракциях: в жидкой фазе и в осадке МеОН. В жидкой фазе небольшая концентрация рутина была характерна для экстракта из лепестков, далее экстракты расположились в следующем порядке: листья – коробочки. В жидкой фазе экстракта семян лотоса орехоносного рутина не было. Концентрация кверцетина в жидкой фазе была примерно одинаковой в экстрактах коробочек, листьев и лепестков лотоса орехоносного, тогда как в экстракте семян концентрация кверцетина была несколько ниже.
Эффекты биологически активных веществ экстрактов лотоса орехоносного при экспериментальной дислипидемии на поведенческие и психофизиологические показатели
Максимальная доза экстракта семян 400 мг/кг способствовала небольшому увеличению времени латентного периода до первого перемещения, горизонтальной активности, числа направленных движений головой, заглядываний животными вниз и переходов между отсеками, значительному возрастанию времени, проведенном животными в светлом отсеке в сравнении с аналогичными показателями у контрольных животных.
Экстракт из лепестков лотоса орехоносного имел общую сходную направленность влияния на поведенческие реакции в Суок-тесте, но сила влияния имела дозозависимый характер (табл. 10). Экстракт лотоса орехоносного в дозе 50 мг/кг приводил к небольшому увеличению числа заглядываний вниз и направленных движений головой, возрастанию количества остановок при неизменной их длительности, увеличению времени, проведенном в светлом отсеке и средней скорости движения и некоторому повышению числа переходов между отсеками в сравнении с аналогичными показателями у контрольных животных. Под действием экстракта лепестков лотоса орехоносного в дозе 100 мг/кг происходило значительное увеличение числа остановок и времени, проведенном животными в светлом отсеке теста, кроме того несколько увеличивалось количество заглядываний вниз, направленных движений головой и переходов между отсеками аллеи относительно показателей у контрольных животных. Внутрижелудочное введение экстракта лепестков лотоса орехоносного в дозах 200 и 400 мг/кг приводило к сходным изменениям поведения. Обе дозы экстракта способствовали увеличению числа заглядываний вниз и направленных движений головой, повышению проведенного в отсеке времени, числа остановок в сравнении с показателями в контроле. Кроме того, экстракт лепестков в дозе 200 мг/кг значительно увеличивал число пересеченных сегментов в светлом отсеке Суок-теста и среднюю скорость движения относительно контроля, тогда как экстракт лепестков в дозе 400 мг/кг повышал время латентного периода первого перемещения, длительность остановки в сравнении с контрольными показателями.
Влияние экстракта коробочек лотоса орехоносного на поведение животных в Суок-тесте было наиболее выражено в дозах 100 и 200 мг/кг. Экстракт коробочек лотоса орехоносного, вводимый животным в дозе 50 мг/кг, способствовал увеличению числа заглядываний вниз и направленных движений головой, повышению количества остановок при снижении их длительности относительно аналогичных показателей у контрольной группы. Введение экстракта коробочек лотоса орехоносного в дозе 100 мг/кг приводило к существенному увеличению числа заглядываний вниз и направленных движений головой, возрастанию количества остановок при этом небольшом снижении их длительности, увеличению времени, проведенном в светлом отсеке Суок-теста и числа переходов между отсеками, а таже возрастанию процента горизонтальной активности в сравнении с показателями в контроле. Под действием экстракта коробочек лотоса орехоносного в дозе 200 мг/кг наблюдались изменения, аналогичные предыдущей группе, но более выраженные. Введение экстракта дозой 400 мг/кг приводило к менее значимым изменениям поведенческих реакций, при этом происходило увеличение количества заглядываний вниз и числа остановок при снижении их длительности, небольшое возрастание времени, проведенном в отсеке относительно контрольных показателей.
Под действием экстракта из листьев лотоса орехоносного в дозе 50 мг/кг происходило увеличение времени латентного периода первого перемещения, возрастание числа остановок при снижении их длительности, небольшое повышение ориентировочной активности животных и времени, проведенном в светлом отсеке, увеличение числа переходов между отсеками относительно аналогичных показателей у контрольных животных. Внутрижелудочное введение экстракта из листьев лотоса орехоносного в дозе 100 мг/кг приводило к сходным, но более значимым изменениям. При этом происходило увеличение времени латентации, возрастание количества остановок при небольшом снижении их длительности, увеличение числа заглядываний вниз, небольшому возрастанию количества переходов между отсеками в сравнении с показателями в контроле. Под действием экстракта из листьев лотоса орехоносного концентрацией 200 мг/кг наблюдалось значимое увеличение числа коротких остановок, возрастание количества направленных движений головой, небольшое повышение времени латентного периода первого перемещения относительно показателей у контрольных животных. Экстракт из листьев лотоса орехоносного, вводимый животным в дозе 400 мг/кг, приводил к значительному повышению времени, проведенном животными в светлом отсеке теста, некоторому увеличение ориентировочной активности в виде количества заглядываний вниз и направленных движений головой, а также числу коротких остановок в сравнении с показателями в контроле.
В темном отсеке Суок-теста были свои особенности влияния экстрактов лотоса орехоносного на поведенческие реакции (табл.11). Так, экстракт эхинацеи приводил к небольшому повышению количества пересеченных животными сегментов, числа заглядываний вниз и направленных движений головой, количеству переходов между отсеками и среднему расстоянию между остановками относительно показателей у контрольных животных.
Экстракт семян лотоса орехоносного изменял поведение животных в Суок-тесте в зависимости от дозы. Так, экстракт семян в дозе 50 мг/кг способствовал небольшому повышению числа пересеченных животными сегментов, количества остановок, увеличению числа направленных движений головой и заглядываний вниз, а также времени, проведенном в темном отсеке в сравнении с контрольной группой. Под действием экстракта семян 100 мг/кг происходило значительное возрастание горизонтальной активности в виде пересеченных сегментов аллеи, небольшое увеличение количества остановок, числа заглядываний вниз аллеи и направленных движений головой, а также времени, проведенном в отсеке, кроме того значительно возрастало среднее расстояние между остановками относительно аналогичных показателей в контроле.