Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Патофизиология и перспективные терапевтические направления при спинальном ишемическом инсульте (обзор литературы) 14
1.1 Спинальный ишемический инсульт: терминология, эпидемиология, этиология 14
1.2 Патогенез спинального ишемического инсульта 16
1.3 Используемые и перспективные методы терапии спинального ишемического инсульта 24
1.4 Эритропоэтин: общая характеристика, механизм действия и обоснование применения в неврологической практике 30
1.5 Лазерное излучение ближнего инфракрасного диапазона: механизмы взаимодействия с биологическими тканями и перспективы применения 34
Глава 2 Материалы и методы исследования 41
2.1 Материалы исследования 41
2.2 Методы исследования 45
2.2.1 Оценка неврологического статуса у животных 45
2.2.2 Оценка микроциркуляции в тканях поясничного отдела спинного мозга методом лазерной доплеровской флоуметрии 50
2.2.3 Гематологические методы исследования 51
2.2.4 Определение концентрации эритропоэтина 51
2.2.5 Морфологические методы исследования 52
2.2.6 Иммуногистохимические методы исследования 53
2.2.7 Методы статистической обработки результатов 54
Глава 3 Результаты собственных исследований и их обсуждение 55
3.1 Морфофункциональные изменения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 55
3.1.1 Морфологическая верификация и экспрессия VEGF в очаге повреждения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 55
3.1.2 Неврологический статус крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 63
3.1.3 Оценка микроциркуляции поясничного отдела спинного мозга при экспериментальной ишемии 67
3.1.4 Гематологические показатели и концентрация эритропоэтина в крови при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 68
3.2 Морфофункциональные изменения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга в условиях применения эритропоэтина 73
3.2.1 Влияние эритропоэтина на неврологический статус крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 73
3.2.2 Влияние эритропоэтина на микроциркуляцию в поясничном отделе спинного мозга при экспериментальной ишемии 75
3.2.3 Морфологическая оценка поясничного отдела спинного мозга при экспериментальной ишемии в условиях применения эритропоэтина 79
3.2.4 Влияние эритропоэтина на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 88
3.3 Морфофункциональные изменения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга в условиях применения лазерного излучения 93
3.3.1 Влияние лазерного излучения на неврологический статус животных при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 93
3.3.2 Влияние лазерного излучения на микроциркуляцию в поясничном отделе спинного мозга при экспериментальной ишемии 94
3.3.3 Морфологическая оценка поясничного отдела спинного мозга при экспериментальной ишемии в условиях применения лазерного излучения 98
3.3.4 Влияние лазерного излучения на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 106
3.4 Морфофункциональные изменения при экспериментальной ишемии спинного мозга в условиях комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения 109
3.4.1 Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения на неврологический статус при экспериментальной ишемии спинного мозга 109
3.4.2 Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения на микроциркуляцию при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 111
3.4.3 Морфологическая оценка поясничного отдела спинного мозга при экспериментальной ишемии в условиях комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения 113
3.4.4 Влияние лазерного излучения на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга 121
Заключение 125
Выводы 147
Список сокращений 148
Список литературы 150
- Патогенез спинального ишемического инсульта
- Морфологическая верификация и экспрессия VEGF в очаге повреждения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
- Влияние эритропоэтина на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
- Влияние лазерного излучения на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
Патогенез спинального ишемического инсульта
Выделяют несколько критических уровней снижения мозгового кровотока, который в норме составляет 50-55 мл в минуту на 100 г вещества мозга [189, 288, 296]. При первом уровне снижения (кровоток менее 50 мл/100 г ткани мозга/мин), происходит снижение синтеза белков и экспрессии генов в клетках нервной ткани. При втором уровне (снижение кровотока до 30 мл/100 г ткани мозга/мин) активируется анаэробный гликолиз, возникает лактатацидоз, возможно формирование токсического отека мозга. Третий уровень (кровоток до 20 мл/100 г ткани мозга/мин) – критический, когда отмечается дестабилизация клеточных мембран, дисфункция каналов активного ионного транспорта, высвобождение возбуждающих нейротрансмиттеров. Следует отметить, что толерантность к ишемии СМ менее изучена по сравнению с головным мозгом и базируется в основном на информации, полученной во время операций на аорте [321, 351].
В патогенезе ишемического поражения ЦНС имеют значение реакции глутамат-кальциевого каскада – быстрый ответ ткани мозга на снижение мозгового кровотока и развитие фокальной ишемии. В глутамат-кальциевом каскаде выделяют три основных этапа: индукции (запуск), амплификации (усиление повреждающего потенциала) и экспрессии (конечные реакции каскада, непосредственно приводящие к гибели клетки).
На первом этапе в результате выброса большого количества глутамата в синаптическую щель в ответ на ишемию и связывание глутамата с инотропными рецепторами N-метил-D-аспартата, метаболотропными и АМРА рецепторами открываются Са2+- каналы, массивное вхождение внутрь нейронов Са2+ обусловливает Са2+-индуцированную эксайтотоксичность [170]. Нервные клетки теряют калий, накапливают ионы натрия, что сопровождается накоплением воды, возникает цитотоксический отек ткани мозга, нарушаются механизмы синаптической передачи. В результате увеличения концентрации положительных ионов внутри клетки изменяются электрические свойства нейронов, развивается аноксическая деполяризация мембран – главный критерий необратимого поражения клеток [71, 108, 137, 227, 345].
Этап амплификации (усиление повреждающего потенциала) связан с нарастающим увеличением концентрации внутриклеточного Са2+ и рассматривается как критический в отношении потери клеточного ионного гомеостаза [82, 105, 142, 275, 353]. Нарушается функция митохондрий, снижается продукция АТФ, повышается образование свободных радикалов, что обусловливает развитие цитотоксичности.
На этапе экспрессии глутамат-кальциевого каскада происходят необратимые изменения, приводящие к гибели клеток. Избыточное накопление в клетках ионов кальция, активация окислительных процессов, синтеза NO, нарушение баланса между продукцией свободных радикалов и способностью системы антиоксидантной защиты их элиминировать приводит к развитию оксидативного стресса нейронов – одного из универсальных механизмов поражения ткани мозга [49, 163,186, 301, 303].
С оксидативным стрессом связана активация внутриклеточных ферментов (фосфолипаз, протеинкиназ), гидролиз фосфолипидов клеточных мембран до свободных жирных кислот, арахидоновой кислоты. Метаболизм арахидоновой кислоты сопряжен с образованием простагландинов, тромбоксанов, гидроксижирных кислот и гидропероксижирных кислот, лейкотриенов, липоперекисей, реактивных свободных радикалов, что потенцирует процессы СРО и ПОЛ. Запуск каскадных ферментативных реакций приводит к множественным повреждениям биомакромолекул и гибели клеток [201, 64]. Активированная ишемией микроглия, астроциты, нейроны усиливают секрецию нейротоксических медиаторов воспаления, провоспалительных цитокинов, возникает вторичная реакция локального воспаления, которая опосредована также экспрессией генов, кодирующих факторы местного воспаления [72, 80, 268, 283]. Адгезия полиморфноядерных лейкоцитов к эндотелию сосудов приводит к нарушениям микроциркуляции, тромбообразованию и расширению зоны инфаркта. Воспалительный каскад увеличивает проницаемость ГЭБ, миграцию активированных лейкоцитов из сосудистого русла в зону очага ишемии, что усиливает реакции воспаления.
В последние годы большое внимание уделяют феномену ишемического прекондиционирования в развитии толерантности к ишемии ЦНС, в том числе СМ [223, 351]. Кратковременные периоды ишемии индуцируют защитные механизмы, включая белки теплового шока, которые повышают толерантность СМ к последующей длительной ишемии [66]. В эксперименте на кроликах показано, что прекондиционирование СМ (3 цикла ишемии-реперфузии по 5 мин) повышает устойчивость СМ к последующей 30 минут ишемии-реперфузии за счет снижения проницаемости ГЭБ, снижения отека СМ, снижения количества ММР-9 и ТНФ-альфа, в т.ч. их мРНК в ткани СМ [112]. Описаны три ключевых механизма нейропротекторного действия прекондиционирования при ишемии СМ: приобретение ишемической толерантности с участием аденозин- и АТФ-чувствительных калиевых каналов в цитоплазматической мембране, калиевых АТФ-чувствительных каналов в мембране митохнодрий, наконец, за счет увеличения кровотока СМ в связи с уменьшением концентрации норэпинефрина [287, 314, 348, 351].
Продемонстрирована роль TLR4/MyD88/NF-кВ пути в повреждении СМ после ишемии-реперфузии, а микроРНК miR-27a рассматривается, как потенциальный терапевтический агент, снижающий выраженность воспалительного процесса после ишемии СМ за счет ингибирования NF-кВ-зависимых путей синтеза провоспалительных цитокинов, например, ИЛ-1; мишенью для MiR-27a выступает белок TICAM-2 [194]. Воспалительный процесс и апоптоз в ткани СМ инициируется клетками микроглии, которые активируются через TLR4 [141, 193, 363]. Ингибиторами TLR4/MyD88/NF-кВ пути также выступают миноциклин, ТАК-242 (антагонист TLR4), пиролидина дитиокарбомат, Dl-3-n-бутилфталид, которые могут применяться в терапии ишемического повреждения СМ. Интересно, что применение стромальных клеток костного мозга при экспериментальной травме СМ у крыс также оказывает протекторное действие через снижение экспрессии TLR4 и NF-кВ, а также каспазы-12 [73]. Нейропротекторный эффект дексмедетомидина опосредован противовоспалительным (ингибиция TLR4 и NF-кВ) и антиапоптогенными (ингибиция каспазы-3) механизмами [294].
С активацией TLR4 повышение экспрессии рецепторов и лигандов хемокинов CXC4, CXC12, а именно CXCL12 и CXCR4, а также не только упомянутый выше ИЛ-1, но и ТНФ-альфа на клетках микроглии и астроцитов в дорсальном роге СМ, уровень экспрессии цитокинов коррелирует с клиническими проявлениями постишемического периода [195, 356]. Транскрипционные методы анализа позволили установить опосредованный TLR4 путь синтеза IFN-s и IFN- и ИФН-опосредованную активацию генов хемокинов в культурах клеток микроглии в условиях последовательного воздействия нормоксии/гипоксии [223].
В настоящее время активно изучается роль микроРНК в патогенезе ишемического повреждения СМ. Известно более 1500 микроРНК, каждая из которых содержит около 20 нуклеотидов, они являются регуляторами клеточных функций (пролиферации, дифференцировки, апоптоза), прежде всего, за счет изменения экспрессии генов и важными потенциальными биотерапевтическими агентами [96, 195, 293, 311]. Так, miR-130a выступает транскрипционным репрессором изоформы М1 белка аквапорина AQP4, связанного с отеком СМ после ишемии, а применение miR-130a при ишемии СМ снижает размер инфаркта и уменьшает сроки восстановительного периода [125, 162, 277]. В экспериментальных условиях in vitro и in vivo miR-320a модулирует экспрессию аквапорина AQP1, что имеет значение в поддержании целостности ГЭБ и блокаде постишемического отека СМ [196].
Морфологическая верификация и экспрессия VEGF в очаге повреждения при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
Первоначально провели верификацию на морфологическом уровне модели ишемии СМ, индуцированной тотальной интравазальной окклюзией брюшного отдела аорты и ее ветвей у животных группы 2. Группой сравнения служили животные группы 1 – ложнооперированные.
На 3 сутки ИСМ при гистологическом исследовании препаратов поясничного утолщения СМ наиболее выраженные изменения отмечались в передних рогах – хроматолиз цитоплазмы, пикноз ядер, растворение глыбок базофильного вещества Ниссля в нейронах с превращением их в клетки-тени, встречались также гиперхромные нейроны (рисунок 1). Отмечалась нейронофагия, перицеллюлярный и периваскулярный отек в белом веществе, на этом фоне встречались неповрежденные нейроны (рисунок 2).
На 7 сутки ИСМ в центральной зоне ишемического очага определялись деструктивные изменения в нейронах, в перифокальной зоне наблюдались неповрежденные нейроны (рисунок 3). Кроме этого, отмечено, увеличение количества астроцитов с признаками их гипертрофии, наблюдалась активация микроглии, появлялись макрофаги (рисунок 4), формировался отек на фоне разрежения белого вещества СМ (рисунок 5). К 14 и 30 суткам морфологические изменения в СМ во многом были сходными с описанными на 7 сутки, в зоне ишемии формировалась рубцовая ткань (рисунки 6, 7).
Результаты морфометрического исследования СМ в динамике экспериментальной ИСМ представлены в таблице 4. По сравнению с группой ложнооперированных животных количество интактных нейронов, глиальных клеток и сосудистых элементов резко сократилось на всех сроках наблюдения. Так, на 3 сутки эксперимента представительство интактных нейронов уменьшилось в 3,5 раза по медиане, на 7 сутки – в 4,4 раза, на 14 сутки – в 3,8 раза, на 30 сутки – в 3,4 раза относительно группы ложнооперированных животных. При этом, в динамике наблюдения на 3, 7, 14, 30 сутки ИСМ количество интактных нейронов в зоне ишемии статистически значимо не изменялось. Аналогичные изменения зафиксированы и по количеству глиоцитов: снижение на 3 сутки составило в 2 раза по медиане, на 7 сутки – на 60%, на 14 сутки – на 54%, на 30 сутки – на 71% относительно группы ложнооперированных животных. Содержание глиоцитов на единицу площади в группе животных с ИСМ на 7, 14, 30 сутки было значимо выше, чем на 3 сутки.
Зафиксирован значительный прирост поврежденных нейронов (клетки-тени, нейроны с хроматолизом), отражающих деструктивные изменения в нейронах в центральной зоне ишемического очага. Количество нейронов с хроматолизом и клеток-теней в СМ значимо возрастало на 3, 7, 14, 30 сутки ИСМ. Отметим, что в динамике ИСМ количество клеток-теней на 7, 14, 30 сутки было выше, чем на 3 сутки. Количество мелких сосудов в СМ существенно снижалось по сравнению с группой ложнооперированных животных: на 3 сутки в 8,7 раза по медиане, на 7 сутки – в 6,2 раза, на 14 сутки – в 4,9 раза, на 30 сутки – в 3,9 раза. В динамике наблюдения при ИСМ количество мелких кровеносных сосудов в СМ прогрессивно увеличивалось от 7 суток по сравнению с 3 сутками, к 14 суткам по сравнению с 3 и 7 сутками и к 30 суткам по сравнению с 3 и 7 сутками.
При экспериментальной ИСМ в области ишемического повреждения фиксируется отек ткани СМ на 3 сутки, нарастающий к 7 суткам и уменьшающийся на 14 и 30 сутки по сравнению как с 3 сутками, так и 7 сутками эксперимента.
Необходимо отметить, что выявленные нами морфологические изменения в СМ при экспериментальной ишемии, согласуются с патоморфологическими данными других исследователей при ИСМ и отражают стереотипные реакции нервной ткани в ответ на ишемию и гипоксию [58]. При отсутствии терапии ишемического повреждения СМ происходит расширение зоны инфарктного ядра и уменьшение зоны ишемической полутени – пенумбры. Структурно неизмененные, но с признаками дисфункции нейроны в зоне пенумбры вдоль внутренней границы ишемического ядра подвергаются апоптозу и некрозу, что приводит к расширению зоны инфаркта [86, 171]. К 14 и 30 суткам эксперимента отмечается тенденция к уменьшению деструктивных явлений в очаге ишемии, происходит более чем двукратное увеличение капиллярной сети.
Эти морфологические изменения связаны с явлениями нейропластичности, способности нервной системы в ответ на эндогенные и экзогенные стимулы адаптироваться путем оптимальной структурно-функциональной перестройки [27].
Далее оценивали экспрессию сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в ткани СМ (таблица 5).
Установлено, что при экспериментальной ИСМ по сравнению с группой ложнооперированных животных на 3, 7, 14, 30 сутки наблюдения экспрессия VEGF значимо возрастает соответственно на 41%, 79%, 90%, 213%. При этом, увеличение экспрессии VEGF в зоне ИСМ носит прогрессирующий характер: в группе животных с ИСМ показатель на 7 и 14 сутки значимо отличается по сравнению с 3 сутками, на 30 сутки – по сравнению с 14 сутками. При проведении корреляционного анализа выявлена прямая связь между количеством мелких кровеносных сосудов и экспрессией VEGF в СМ: на 3 сутки – связь слабая без статистической значимости (R = 0,26; p 0,05), на 7, 14 и 30 сутки средней силы, статистически значимая (соответственно R = 0,37; R = 0,41; R = 0,44; p 0,05).
Влияние эритропоэтина на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
Для изучения системных эффектов ЭПО при экспериментальной ИСМ нами проведена оценка количественных показателей периферического отдела эритрона и лейкона, количества тромбоцитов в крови после введения ЭПО в суммарной дозе 15000 МЕ/кг. Кроме того, по результатам данного этапа исследования возможно проведение сопоставлений между гематологическими показателями и параметрами неврологического статуса, микроциркуляции и морфологии в очаге ишемического повреждения.
При оценке показателей периферического отдела лейкона установлено, что на 3 сутки эксперимента введение ЭПО не оказывало значимого влияния на общее количество лейкоцитов в крови, а также представительство лимфоцитов, нейтрофилов, моноцитов; не изменялось и количество тромбоцитов в крови (таблица 19). На 7 сутки экспериментальной ИСМ на фоне применения ЭПО зафиксировано достоверное снижение общего количества лейкоцитов, количества нейтрофилов, другие популяции лейкоцитов, а также количество тромбоцитов в крови значимо не изменялись. На 14 и 30 сутки эксперимента не обнаружено статистически значимых изменений общего количества лейкоцитов в крови, количества лимфоцитов, нейтрофилов, моноцитов тромбоцитов. Отметим, что на 7 сутки эксперимента в крови общее количество лейкоцитов, а также количество нейтрофилов, несмотря на снижение относительно группы животных с ИСМ без лечения, достоверно (р 0,05) отличалось от группы ложноооперированных животных. Кроме этого, в динамике экспериментальной ИСМ на фоне применения ЭПО общее количество лейкоцитов на 14 сутки отличалось от количества лейкоцитов на 3 и 7 сутки, а на 30 сутки – от количества лейкоцитов на 3 сутки эксперимента; количество нейтрофилов в крови на 7, 14, 30 сутки значимо отличалось по сравнению с количеством нейтрофилов на 3 сутки наблюдения.
При оценке показателей периферического отдела эритрона при экспериментальной ИСМ в условиях применения ЭПО выявлено, что на 3 сутки наблюдения все исследуемые показатели значимо не отличаются от группы сравнения, на 7 и 14 сутки эксперимента в крови достоверно повышается количество эритроцитов, концентрация гемоглобина и гематокрит (таблица 20). На 30 сутки в крови достоверно повышается количество эритроцитов, концентрация гемоглобина. Нами не обнаружено статистически значимого влияния ЭПО на показатели среднего эритроцитарного объема, среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в эритроците на 3, 7, 14, 30 сутки экспериментальной ИСМ. Показательно, что количество эритроцитов и концентрация гемоглобина в крови на 14 сутки значимо отличается от соответствующих показателей на 3 и 7 сутки, а на 30 сутки – от показателей на 3 сутки эксперимента. Необходимо отметить, что количество эритроцитов в крови, концентрация гемоглобина и гематокрит на 7 и 14 сутки, гематокрит на 30 сутки экспериментальной ИСМ в условиях применения ЭПО значимо отличались от соответствующих показателей в группе ложнооперированных животных.
Таким образом, при экспериментальной ИСМ применение ЭПО приводит к снижению количества лейкоцитов, нейтрофилов на 7 сутки, повышению количества эритроцитов, концентрации гемоглобина и гематокрита на 7 и 14 сутки, повышению концентрации гемоглобина на 30 сутки наблюдения.
Полагаем, что обнаруженные нами изменения количественного состава клеток крови при экспериментальной ИСМ в условиях применения ЭПО обусловлены, во-первых, известными свойствами ЭПО в отношении стимуляции пролиферации и дифференцировки клеток эритроидного ростка костного мозга, что закономерно на 7 сутки эксперимента, то есть на 5 сутки после последнего введения ЭПО проявилось увеличением количества эритроцитов, концентрации гемоглобина и гематокрита, во-вторых, зафиксированные нами ранее нейропротекторные свойства ЭПО по показателям неврологического статуса, микроциркуляции, морфологии очага повреждения ограничивают зону ишемического повреждения в СМ, ответную реакцию миелоидного ростка костного мозга на синтез и секрецию, концентрацию в кровотоке провоспалительных медиаторов, что проявилось уменьшением представительства лейкоцитов в крови за счет популяции нейтрофильных гранулоцитов.
Влияние лазерного излучения на гематологические показатели крыс при экспериментальной ишемии поясничного отдела спинного мозга
На заключительном этапе эксперимента оценивали системные эффекты после комбинированного применения ЭПО и ЛИ при экспериментальной ИСМ по показателям количественного состава клеток крови. Результаты исследования количественного состава популяций лейкоцитов и тромбоцитов в крови крыс представлены в таблице 34. На 3, 14 и 30 сутки эксперимента не обнаружено статистически значимых изменений количества в крови лейкоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, а также тромбоцитов по сравнению с группой крыс с ИСМ без терапевтического воздействия. На 7 сутки наблюдения выявлено достоверное снижение в крови общего количества лейкоцитов за счет уменьшения представительства нейтрофилов и лимфоцитов.
Следует отметить, что в динамике экспериментальной ИСМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ количество в крови лейкоцитов на 7, 14 и 30 сутки ниже, чем на 3 сутки, а на 14 и 30 сутки ниже, чем на 7 сутки наблюдения. Кроме того, количество в крови лимфоцитов на 7, 14 и 30 сутки ниже, чем на 3 сутки, а на 14 сутки ниже, чем на 7 сутки.
Заслуживает внимания факт, что количество в крови лейкоцитов на 3 сутки, количество нейтрофилов и моноцитов на 3 и 7 сутки эксперимента выше (р 0,01), чем в группе ложнооперированных животных, а количество лейкоцитов на 7, 14, 30 сутки, количество лимфоцитов на 3, 7, 14, 30 сутки, а также количество нейтрофилов и моноцитов на 14 и 7 сутки эксперимента статистически значимо не отличается (р 0,05) от группы ложнооперированных животных.
Таким образом, комбинированное применение ЭПО и ЛИ при экспериментальной ИСМ приводит к снижению и частичному восстановлению количества в крови лейкоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов на 7 сутки наблюдения.
Более выраженные изменения под влиянием комбинированного применения ЭПО и ЛИ при экспериментальной ИСМ зафиксированы в отношении показателей «красной» крови (таблица 35). Так, на 7 и 14 сутки эксперимента в крови статистически значимо увеличивается количество эритроцитов, концентрация гемоглобина, гематокрит. На 30 сутки наблюдения повышается в крови концентрация гемоглобина.
В динамике экспериментальной ИСМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ количество в крови эритроцитов на 7, 14, 30 сутки выше, чем на 3 сутки наблюдения, а на 14 сутки – выше, чем на 7 сутки. Кроме этого, концентрация гемоглобина в крови на 7, 14, 30 сутки выше, чем на 3 сутки наблюдения, а на 14 сутки – выше, чем на 7 сутки, гематокрит на 7 и 14 сутки выше, чем на 3 сутки эксперимента. Средний эритроцитарный объем на 14 сутки ниже, чем на 3 сутки, среднее содержание гемоглобина в эритроците на 14 сутки выше, чем на 7 сутки эксперимента, а количество тромбоцитов в крови на 14 сутки ниже, чем на 3 и 7 сутки наблюдения.
По сравнению с группой ложнооперированных животных в опытной группе в крови выше количество эритроцитов на 7 и 14 сутки, концентрация гемоглобина и гематокрит – на 7, 14 и 30 сутки, средний эритроцитарный объем и среднее содержание гемоглобина – на 7 и 30 сутки, а количество тромбоцитов меньше на 14 сутки.
Таким образом, при экспериментальной ИСМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ нами зафиксировано увеличение в крови количества эритроцитов, концентрации гемоглобина, гематокрита на 7 и 14 сутки, увеличение концентрации гемоглобина на 30 сутки наблюдения относительно группы животных с ИСМ без лечения, а также группы ложнооперированных животных.