Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обмен кальция в организме и его влияние на токсические эффекты молибдена (обзор литературы) 10
1.1. Кальциевый гомеостазис и его регуляция 10
1.2. Поступление, распределение и выведение молибдена из организма. Механизмы токсического действия 20
1.3. Механизмы токсического влияния молибдена на организм 23
1.4. Эффекты молибдена на кальциевый обмен 25
Глава 2. Материал и методики исследований 27
2.1.Методы создания экспериментальных моделей 27
2.1.1 Создание моделей экспериментальной молибденовой интоксикации 27
2.1.2 Создание моделей экспериментальной гипокальциемии 28
2.1.3 Создание моделей экспериментальной гиперкальциемии 29
2.1.4 Сочетанные модели 30
2.2 Основные варианты опытов 30
2.3 Общие методики исследований 36
2.4 Методы определения концентрации исследуемых веществ и функциональных показателей 38
2.5. Статистическая обработка данных 39
Глава 3. Влияние экспериментальной гипокальциемии на эффекты молибдата аммония . 40
3.1. Изменения водо- электролитовыделительной функции почек крыс после экспериментальной паратиреоидэктомии 40
3.2. Изменения водо- электролитовыделительной функции почек крыс после интрагастрального введении молибдата аммония на фоне паратиреоидэктомии 45
3.3. Изменения выделительной функции почек крыс при подкожном введении молибдата аммония на фоне паратиреоидэктомии 52
3.4.Изменения водо-электролитовыделительной функции почек у крыс после инъекций кальцитонина 58
3.5. Изменения водо-электролитовыделительной функции почек крыс при интрагастральном введении молибдата аммония на фоне инъекций кальцитонина 62
3.6. Сдвиги выделительной функции почек при подкожном введении молибдата аммония на фоне инъекций кальцитонина 68
3.7. Морфологическое исследование почек 74
3.8. Влияния гипокальциемии на содержание кальция и молибдена в трубчатых костях крыс при молибденовой интоксикации 78
4. Влияние экспериментальной гиперкальциемии на эффекты молибдата аммония . 82
4.1. Изменение функции почек крыс при экспериментальном гипервитаминозе D 82
4.2. Изменения выделительной функции почек крыс при интрагастральном введении молибдата аммония на фоне гипервитаминоза D 86
4.3. Особенности выделительной функции почек крыс при подкожном введении молибдата аммония на фоне гипервитаминоза D 91
4.4. Изменения выделительной функции почек крыс после внутрижелудочного введения хлорида кальция 96
4.5. Изменения водо-электролитовыделительной функции почек крыс при интрагастральном введении молибдата аммония на фоне инфузии хлорида кальция 100
4.6. Морфологическое исследование почек. 105
4.7. Влияние молибденовой интоксикации в условиях гиперкальциемии на содержание кальция и молибдена в трубчатых костях крыс 108
Глава 5. Обсуждение результатов. Заключение 111
Общие выводы 127
Литература 129
Приложения 155
- Кальциевый гомеостазис и его регуляция
- Изменения выделительной функции почек крыс при подкожном введении молибдата аммония на фоне паратиреоидэктомии
- Изменение функции почек крыс при экспериментальном гипервитаминозе D
- Влияние молибденовой интоксикации в условиях гиперкальциемии на содержание кальция и молибдена в трубчатых костях крыс
Введение к работе
Актуальность исследования. Одной из важнейших проблем современности является проблема загрязнения экосистемы тяжелыми металлами. Соединения этих элементов в силу высокой токсичности, подвижности и способности к биоаккумуляции представляет опасность для человека (Мешков Н.А., 2010; Иванченко М.Н. и соавт., 2010; Семенова И.Н. и соавт.,2011; Синицкая Т.А., 2011; Бондин В. И.и соавт.,2011; Брыляков Е.Б., Сивкова Г.А 2014; Дускаева Г. К., Мирошников С. А.,2014). Тяжелые металлы, в отличие от ксенобиотиков органической природы, подвергающихся деструкции, однажды включившись в биогеохимические циклы, могут сохранять свою биологическую активность на протяжении десятков лет. Поэтому оценка загрязнения окружающей среды тяжелыми металлами является одной из важнейших проблем человечества (Скальный А. В., 2004; Карамова Л.М.,2010; Синицкая Т.А.,2011; Чикнева И.В., Абузяров Ю.В.,2013; Голиченков А.К.,2014). На территории Северного Кавказа особенно актуальна проблема загрязнения атмосферы и объектов окружающей среды, поскольку здесь находятся крупные промышленные источники эмиссии цветных металлов, в частности, молибдена. Высокие концентрации солей тяжелых металлов в воздухе, почве и воде приводят к загрязнению ими пищевых продуктов (Безуглов В.Г.и соавт.,2011; Половецкая О.С.и соавт.,2012; Цугкиев и соавт.,2013; Чикнева и соавт., 2013; Околелова А.А.,2013). В этой связи понятна необходимость поиска эффективных способов профилактики и лечения молибденовых отравлений. Известно, что уровень ионизированного кальция может оказывать влияния на метаболизм тяжелых металлов в организме, а почки как главный экскреторный орган являются основной мишенью ксенобиотиков (Фесенко Е.А. 2007; Jarosiska D., et al.,2008; Bonny O. et al.,2008; Мухин Н.А.,2010; Демидко Н.Н. и соавт.,2011; Ковригин А.О., Лубенников В.А., 2011; Здорнова О.В. и соавт.,2011; Синицкая Т.А., 2011; Lameris A.L. et al., 2015), что придает актуальность проблеме изучения влияния молибдена на функцию почек в условиях измененного кальциевого гомеостазиса.
В нашей лаборатории выяснены многие механизмы токсического действия тяжелых металлов на функцию почек: (Албегова Ж.К. и соавт.,2010). Некоторые металлы, являясь конкурентным биометаллом по отношению к кальцию, например, свинец и кадмий способны вытеснять кальций из специфических мест связывания с лигандами, а также нарушать его пассивный транспорт (Geibel J.P., Hebert S.C., 2009; Ахполова В.О. и соавт., 2010; Митциев А.К.и соавт.2011; Хадарцева М.П., Брин В.Б., 2012; Бузоева М.Р., Брин В.Б.,2012; Цаллаева Р.Т., Брин В.Б., 2013). Показано, что при истощении запасов кальция отмечается активация трансмембранного переноса металлов (Старадумов В.Л., 2003; Lee C.T. et al.,2012; Митциев К.Г. и соавт., 2013). Повышенное же содержание кальция в потребляемой пище в условиях
свинцовой и кадмиевой интоксикации оказывает некоторое протекторное действие (Hayashi
K.,et.al.,2007; Бузоева М.Р. и соавт.,2010).
Однако, исследований зависимости проявлений молибденовой интоксикации от
особенностей обмена кальция в организме в доступной литературе мы не обнаружили.
В связи с этим, целью данного исследования было изучение влияния экспериментальной гипо- и гиперкальциемии на нефротоксичность молибдата аммония и накопление его в костной ткани.
Задачи исследования. Для достижения указанной цели были поставлены следующие
задачи:
1. Исследовать влияние экспериментальной гипо- и гиперкальциемии на
водовыделительную функцию почек, содержание электролитов в плазме крови и процессы
выделения их в мочу, осмолярность мочи и величину экскреции белка в условиях спонтанного
диуреза у крыс линии Вистар.
-
Установить изменения процессов мочеобразования, экскреции электролитов, их концентрации в плазме крови, осмотического давления и содержания белка в моче в условиях спонтанного диуреза на фоне экспериментальной гипокальциемии у крыс линии Вистар с моделью молибденовой интоксикации.
-
Изучить основные процессы мочеобразования, экскрецию катионов и их концентрацию в крови, осмотическое давление мочи и содержание в ней белка в условиях спонтанного диуреза на фоне экспериментальной гиперкальциемии у крыс линии Вистар с молибденовой интоксикацией.
-
Исследовать влияние экспериментальной гипо- и гиперкальциемии, молибденовой интоксикации, а также их сочетания на содержание молибдена и кальция в костной ткани крыс линии Вистар.
-
Провести морфологическое изучение почек крыс с молибденовой интоксикацией при экспериментальной гипо- и гиперкальциемии.
Научная новизна. Впервые показано, что экспериментальная гипокальциемия в целом усугубляет нефротоксическое действие ксенобиотика. Это характеризуется большим токсическим эффектом на почки и повышенным накоплением молибдена в костях. Такие изменения отмечаются в группе с внутрижелудочным и подкожным введением металла на фоне инъекций кальцитонина и у паратиреоидэктомированных крыс с подкожным введением ксенобиотика. В группе же крыс с внутрижелудочным введением молибдата аммония на фоне экспериментального гипопаратиреоза имеет место определенное снижение нефротоксичности молибдена и кумуляции его в костной ткани. Это, вероятно, вызвано снижением всасывания молибдена в желудочно-кишечном тракте паратиреоидэктомированных животных, в
результате чего снижается активность кальциевых транспортных систем. Показано впервые, что парентеральное поступление молибдата аммония в условиях экспериментальной гиперкальциемии снижает уровень протеинурии и уменьшает накопление металла в костной ткани. При внутрижелудочном введении ксенобиотика в условиях гипервитаминоза D, вероятно, происходит усиленное всасывание металла в пищеварительном тракте. В результате – нарастают функциональные и гистологические изменения в почках, увеличивается кумуляция молибдена в костях. Новизна работы подтверждена двумя патентами на изобретение: «Способ профилактики экспериментальной молибденовой нефропатии и протеинурии у крыс» №2584235 от 19.04.2016 и «Способ снижения нефротоксичности молибдата аммония». №2588319 от 18.05.2016.
Научно-практическая значимость работы. Исследование носит экспериментальный характер и полученные данные экспериментальных исследований, демонстрируют почечные проявления длительной молибденовой интоксикации, а также ее влияние на концентрацию кальция и молибдена в костном матриксе. Работа относится к области фундаментальных знаний, так как расширяет представления о механизмах избыточного действия молибдена на организм. Раскрыты эффекты гипо - и гиперкальциемии, показаны особенности регуляторных влияний на обмен кальция, водо- электролитовыделительную функцию почек и токсическое действие больших доз молибдена. Диссертационные материалы, возможно, будут использованы при разработке способа профилактики и терапии систематической интоксикации ксенобиотиком.
Полученные данные могут использоваться при преподавании физиологических основ детоксикации, при исследовании механизмов действия молибдена на другие органы и системы организма, при разработке способов профилактики и лечения токсических эффектов избыточного поступления в организм других металлов.
Материалы диссертации внедрены в учебный процесс и научные исследования на кафедрах нормальной физиологии, патологической физиологии и курсе профпатологии ФГБОУ ВПО СОГМА Минздрава Российской Федерации.
Основные положения, выносимые на защиту:
1 Экспериментальная гипокальциемия увеличивает степень выраженности влияния молибдата аммония на почки при интрагастральном и парентеральном его введении на фоне кальцитониновой гипокальциемии и при парентеральных иньекциях металла животным с удаленными околощитовидными железами.
2. Экспериментальный гипопаратиреоз снижает нефротоксичность молибдена, вероятно, за счет ослабления всасывания молибдата аммония из пищеварительного тракта при интрагастральном введении металла.
3. Экспериментальная гиперкальциемия, вызванная гипервитаминозом D, оказывает
смягчающее действие при развитии почечных проявлений молибденовой интоксикации,
полученной подкожными инъекциями молибдена.
4. Экспериментальный гипервитаминоз D усиливает степень выраженности
молибденовой нефропатии, при интрагастральном поступлении металла, видимо, повышая его
всасывание из пищеварительного тракта.
Личный вклад автора: Автором самостоятельно выполнены экспериментальные исследования по изучению основных процессов мочеобразования, математическая и статистическая обработка данных, проведен анализ и обобщение полученных результатов.
Публикации и апробация диссертационной работы. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 7 – в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования России.
Основные положения работы доложены и представлены на I-й и 2-й региональных междисциплинарных конференциях «Молодые ученые - медицине» (Владикавказ, 2014,2015 г.), 11-й Юбилейной научной сессии, посвященной 75-летию СОГМА (Владикавказ, 2014), ХХII Съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (Волгоград, 2013).
Структура диссертации. Диссертация изложена на 195 страницах, иллюстрирована – 81 рисунком состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав, содержащих результаты собственных исследований, главы обсуждения полученных результатов и заключения, общих выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 231 источника, из них 108 зарубежных авторов.
Кальциевый гомеостазис и его регуляция
Кальций – бивалентный макроэлемент, играет важную роль в нашем организме человека, его содержание превышает все остальные электролиты организма. Это эссенциальный макроэлемент, так как трудно представить физиологический процесс, в котором бы кальций не принимал участия: от макроскопической структуры элемента в кости до молекулярного триггера для внутриклеточной передачи регуляторного сигнала. Именно поэтому его концентрация в плазме крови имеет большое значение.
В организме распределение кальция таково, что максимальное его количество (99%) содержится в костной ткани, в аорте, в мышечных органах (матке, сердце, мышцах), и лишь 1% его содержится в плазме крови. 22,5 ммоль содержится во внеклеточном пространстве, из них 9 ммоль – приходится на плазму, остальная часть (25 ммоль) содержится в тканях организма (MoeS.M. et аl., 2008). Ранее полагали, что кальций плазмы существует в двух формах: связанный с белками и свободный, способный к диффузии. В настоящее время известно, что существует три различные химические фракции кальция крови. Связанный кальций с белками плазмы составляет 40 %, из в них 90% случаев он связан с альбуминами. Остальная часть связана с альфа 1, альфа 2, бета - и гамма-глобулином. Десять процентов кальция представлено в комплексе с различными поливалентными компонентами крови: с фосфатами, бикарбонатами, сульфатом, цитратом (Dimke H. еt al., 2011). Ионизированная фракция кальция составляет около 50%. Ионизированный кальций и связанный в комплексах могут диффундировать через клеточные мембраны и фильтроваться почками. Эти фракции находятся в обратной зависимости от таких факторов, как pH крови, концентрации белков и комплексных анионов крови (Alpern R.J. еt al.,- 2007). Выделяют активно обменивающийся пул кальция, около 500 ммоль, и медленно обменивающийся -7-7,5 ммоль (Чумакова О.В. и соавт.,– 2002).
В плазме крови концентрация кальция поддерживается гомеостатическими механизмами, действующими в миллимолярном диапозоне. Постоянство кальция во внутренней среде организма регулируется непрерывным перемещением между плазмой крови, костной тканью, почками и кишечником. Значительная роль в поддержании кальциевого гомеостазиса принадлежит кальций чувствительному рецептору (КЧР). Он регулирует высвобождение кальция из костей, благодаря эффектам паратиреоидного гормона и изменения кальцийуреза. Мутации в гене (КЧР) вызывают различные гипо- и гиперкальциемические заболения (Berggar T., еt al., 2002; Dimke H.,еt al., 2011).
Кальциевый метаболизм в организме складывается в основном из трех звеньев:
1) абсорбция из питательных веществ и его поступление в кровоток;
2) поступление в ткани из крови (и обратно);
3) экскреция с мочой и калом (Булатова Е.М. и соавт., 2007; Brown E.M.,2013).
Суточная потребность в кальции взрослого человека составляет около 20 - 37,5 ммоль (0,8 - 1,5 г). Она зависит от возраста и периода жизни человека, у подростков, беременных и кормящих женщин потребность в кальции увеличивается почти в два раза (Dick I.M.et al., 2008; Markadieu N. еt al., 2011). В желудочно-кишечный тракт ежедневно поступает 35 ммоль макроэлемента, но всасывается у взрослого человека только 25-30%, в то время как у ребенка -70%. Трансцеллюлярный транспорт кальция через энтероциты в плазму крови происходит в 50 раз медленнее, чем транспорт натрия, однако значительно интенсивнее, чем транспорт цинка, железа и марганца. Всасывание кальция у человека и других млекопитающих происходит на протяжении всего кишечника и управляется системой биологических регуляторов, интенсивность этого процесса на единицу длины максимальна в 12-перстной кишке, однако наибольшая часть кальция абсорбируйся в тощей и подвздошной кишке из-за их большей протяженности. Всасывается кальций также и в толстом кишечнике (Wasserman R.H. еt al.,1992)
Механизмы всасывания кальция схожи как в желудочно-кишечном тракте, так и в почках. Кальций и здесь может всасываться как трансцеллюлярно, так и парацеллюлярно. Последний вид транспорта осуществляется через межклеточные пространства, которые образуют плотные контакты, так как клетки тесно прилежат друг к другу. В межклеточные пространства обращены интегральные белки – клаудины, окклюдины и другие представители надсемейства иммуноглобулинов. Группой исследователей было выявлено, что плотные контакты обладают свойствами ионных каналов: проницаемость зависит от концентрации ионов, избирательности, взаимоконкурентных ионных отношений, чувствительности к рН и т.д. Ионные каналы, возможно, встроены в структуру межклеточных пространств и именно через них происходит парацеллюлярный транспорт (He L, Poblenz A., 2000; Hoenderop J. G. J., еt al., 2005; Bronner F, 2009; Christakos S. et al., 2011;Пигарова Е.А., 2014; Smutzer G., Devassy R.K., 2016).
Парацеллюлярная проницаемость регулируема и осуществляется факторами роста, некоторыми гормонами, цитокинами, бактериальными токсинами и др. Исследованиями (WittnerM, еt al., 2000) было выявлено, что гормон паращитовидных желез – паратирин повышает проницаемость межклеточного пространства и стимулирует пассивный транспорт кальция. Кальцитриол увеличивает проницаемость плотных контактов клеток, особенно энтероцитов, усиливая абсорбцию кальция (Chirayath M.V. еt al.,1998).
Трансцеллюлярный транспорт состоит из 3 этапов:
1) абсорбция через кальциевые каналы апикальной мембраны нефроцитов дистальных канальцев; 2) мембранный транспорт, сопряженный с белками; 3) выведение через базолатеральную мембрану с помощью кальциевой АТФ - азы и Na+/Ca2+ обменника.
Кальциевые каналы апикальной мембраны относятся к надсемейству transient receptor potential channels–vanilloid receptor(TRPV). Эти каналы участвуют в различных физиологических процессах: в пролиферации гладкомышечных клеток, сенсорных функциях, эндотелиальной проницаемости и эпителиальном транспорте двухвалентных ионов (Sun Z. еt al., 2014; Senning E.N, Gordon S.E., 2015) Выявлено, что TRP каналы пронизывают мембрану 6 раз и состоят из 730 аминокислот. В лаборатории Bindels и Hediger 1998г. были описаны 2 типа каналов, близких по химической структуре к TRP каналам, объединенных в TRPV подгруппу. TRPV5 – каналы ответственны за реабсорбцию Са в почках, преимущественно в дистальных извитых канальцах и собирательных трубочках.TRPV6 –более часто встречаются в кишечнике, предстательной и молочных железах. Диаметр пор этих каналов равен 5,4 А, что соответствует размерам пор потенциал–зависимых Са–каналов (Lambers T.T., et al., 2006; Hoenderop J.G.J., Bindels R.J.M., 2008; Vander Hagen E.A.et al., 2014).
При достижении пороговых концентраций кальция внутри клетки происходит инактивация TRPV5 и TRPV6 каналов на всей поверхности клетки. Изменение рН внеклеточной среды тоже влияет на проницаемость этих каналов. Предполагается, что глютамат – 522 (Е 522) является pH – сенсором, который при увеличении концентрации водородных ионов во внеклеточной среде снижает активность V5 каналов, вызывая конформационные изменения в структуре пор. Ацидоз уменьшает, а алкалоз увеличивает активность каналов (HoenderopJ.G.J еt al.,2008; MamenkoM. et al.,2015).
Основные гормоны, регулирующие обмен Са в организме это – паратиреоидный гормон, кальцитонин и витамин D3 -кальцитриол (1,25 (OH)2D3), стимулирующий абсорбцию Са в дистальном сегменте нефрона, в собирательных трубочках почек и тонком кишечнике. Кальцитриол активирует образование мРНК, кодирующейTRPV5, TRPV6, а также белков кальбайдинов, в результате чего отмечается увеличение реабсорбции кальция. В экспериментальных исследованиях было показано, что эстрогены увеличивают экспрессию TRPV5. У крыс с овариэктомией с гиповитаминозом D заместительная терапия 17B-эстрадиолом увеличивает экспрессию TRPV5 в нефроцитах канальцев, что приводит к нормализации концентрации кальция в плазме крови опытных животных (Sourial S., еt al., 2009; Han X., еt al., 2016; Smutzer G., Devassy R.K., 2016).
Изменения выделительной функции почек крыс при подкожном введении молибдата аммония на фоне паратиреоидэктомии
Как и в вышеописанном случае, для основной опытной серии– крыс, которые получали молибдат аммония подкожно на фоне экспериментального гипопаратиреоза (группа №3), было смоделировано 2 контрольных серии с парентеральным введением ксенобиотика: интактные и ложнооперированные животные (группы №1 и 2). Исследования выявили, что в группах №1 и №2 отмечалось увеличение объема спонтанного диуреза (р 0,001), что можно объяснить снижением относительной канальцевой реабсорбции воды (р 0,001) относительно интактной группы животных. При этом скорость клубочковой фильтрации падала (p 0,001).
У крыс, получавших инъекции молибдата аммония на фоне паратиреоидэктомии, также отмечалась полиурическая реакция, причем как по сравнению с показателями интактных животных (р 0,001), так и в сравнении с обеими контрольными экспериментальными группами (р 0,001). Скорость клубочковой фильтрации и относительная канальцевая реабсорбция снижались относительно значений интактных животных (р 0,001, р 0,001), а также групп №1 и 2 (р 0,01,р 0,01) (рис. 3.3.1).
Почечная обработка натрия изменялалась у всех крыс получавших инъекции молибдата аммония. Натрийурез достоверно (р 0,05;р 0,001) увеличивался в группах №1-3, что было обусловлено падением (р 0,001) его относительной канальцевой реабсорбции. Фильтрационный заряд электролита снижался относительно показателей значений интактных крыс в трех сравниваемых сериях (р 0,001). Более значимые изменения были у крыс с паратиреоидэктомией, которые получали молибдат аммония подкожно. У них цифры натрийуреза были самыми высокими (р 0,001), а относительная канальцевая реабсорбция катиона и его фильтрационный заряд достигали самых низких показателей (р 0,01) (рис. 3.3.2).
Выведение калия с мочой усиливалось у интактной и ложнооперированной группы крыс с подкожными инъекциями молибдена (p 0,01), но в более значимой степени у крыс, получавших молибдат аммония подкожно на фоне экспериментального гипопаратиреоза (p 0,001).
Фильтрационный заряд данного электролита не менялся, что, вероятно, имело место в условиях понижения скорости клубочковой фильтрации (рис. 3.3.3).
Процессы почечного транспорта кальция в описываемых сериях эксперимента изменялись однонаправлено: возрастала его экскреция (p 0,001), а относительная канальцевая реабсорбция (p 0,001; p 0,01) и фильтрационный заряд снижались (p 0,01; p 0,001). Группа с подкожными инъекциями молибдата аммония на фоне гипопаратиреоза характеризовалась наиболее выраженными сдвигами описанных показателей, достоверно отличающихся как от показателей интактных крыс, так и от показателей контрольных серий (рис. 3.3.4).
Способность к осмотическому концентрированию мочи, при введении молибдата аммония интактным, ложнооперированным и животным с удаленными околощитовидными железами, снижалась относительно исходных значений (р 0,001), при этом в экспериментальной группе с подкожными инъекциями молибдата аммония паратиреоидэктомированным крысам она была достоверно ниже (р 0,001), чем в других двух сравниваемых сериях. Во всех опытных группах с парентеральным введением молибдена отмечалась значительная протеинурия (р 0,001). Максимальные цифры протеинурии были в группе при сочетании экспериментального гипопаратиреоза с парентеральным введением молибдата аммония (р 0,01) (рис. 3.3.5).
Изменение функции почек крыс при экспериментальном гипервитаминозе D
После двухнедельного и месячного энтерального введения препарата «Аквадетрим» проводились исследования. Экспериментальный гипервитаминоз D после двух недель исследования вызывал изменения основных процессов мочеобразования, что проявлялось увеличением объема 6-часового спонтанного диуреза (р 0,001). Это можно объяснить уменьшением канальцевой реабсорбции воды (р 0,05), несмотря на сниженную скорость клубочковой фильтрации (р 0,001).
Спустя месяц после введения витамина D отмечалась еще большая выраженность описанных изменений. Полиурическая реакция продолжала расти (р 0,001), несмотря на то, что скорость клубочковой фильтрации (р 0,05) значительно снижалась относительно значений интактной группы крыс. Повышение объема диуреза было следствием уменьшения канальцевой реабсорбции воды (р 0,001) (рис. 4.1.1).
Спустя 2 недели после введения витамина D (рис. 4.1.2) достоверных изменений экскреции натрия не происходило, хотя фильтрационный заряд его снижался относительно интактной группы животных (р 0,001). Реабсорбция катиона имела тенденцию к снижению. Спустя месяц выведение натрия с мочой усиливалось (р 0,001), что было обусловлено уменьшением канальцевой реабсорбции электролита (р 0,001), относительно показателей интактных животных. Фильтрационный заряд натрия снижался (р 0,05).
Спустя 14 дней от начала эксперимента почечная обработка калия достоверно не изменялась. 30- дневное введение витамина D вызвало прирост экскреции катиона относительно показателей фоновой группы крыс (р 0,05).
Почечная обработка кальция мало отличалась как на двухнедельном, так и в месячный сроки введения препарата «Аквадетрим». На обоих этапах экскреция катиона снижалась (р 0,01; р 0,05). Фильтрационный заряд был выше значений интактной группы крыс. На обоих этапах отмечалось увеличение реабсорбции катиона, но наиболее выражено в месячный срок введения металла (р 0,01) (рис. 4.1.4).
Осмолярность мочи крыс спустя 2 недели гипервитаминоза D была в пределах показателей группы интактных животных, через 30 дней - снижалась (р 0,001) (рис.4.1.5).
У крыс с экспериментальным гипервитаминозом D содержание в плазме крови натрия значимо уменьшалось (р 0,05) относительно фона, содержание калия (р 0,05) и кальция (р 0,001) – возростало (рис. 4.1.6).
Влияние молибденовой интоксикации в условиях гиперкальциемии на содержание кальция и молибдена в трубчатых костях крыс
Интрагастральное введение животным витамина D в течение 30 дней приводило к увеличению кальцификации костной ткани (р 0,01). Содержание молибдена в этой модели имело лишь тенденцию к снижению. Вводимый внутрижелудочно хлорид кальция также повышал концентрацию кальция в костном матриксе (р 0,05). Накопление молибдена в костной ткани оставалось на уровне фона (рис. 4.7.1).
Крысы интактной группы с интрагастральным введением молибдата аммония характеризовались выраженным уменьшением кальцификации костной ткани (p 0,001) и увеличением содержания молибдена (р 0,001) в трубчатых костях. Сочетание интрагастрального поступления ксенобиотика и гипервитаминоза D вызывало еще большую кумуляцию металла, (р 0,05) относительно группы с изолированным внутрижелудочным введением молибдена, и снижение концентрации кальция в костном матриксе. Систематическая интоксикация молибденом в сочетании с внутрижелудочным введением раствора хлорида кальция наоборот характеризовалась более высоким содержанием кальция в костной ткани (р 0,05) и меньшим содержанием молибдена относительно животных с введением одного молибдата аммония (р 0,05) (рис. 4.7.2).
Парентеральное введение молибдена интактным крысам сопровождалось выраженным снижением содержания кальция (р 0,001) в костной ткани. Концентрация же молибдена в этих пробах у животных значительно возрастала (р 0,001) (рис. 4.7.3).
Группы животных, получавшие инъекции молибдата аммония в условиях гипервитаминоза D, в отличие от контрольной группы характеризовались не столь значительным снижением кальция (р 0,05) и меньшим накоплением молибдена в костном матриксе (р 0,001).