Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Регенерация поврежденных периферических нервов и способы ее стимуляции (обзор литературы) 19
1.1 Патогенез дегенеративных изменений, возникающих при повреждении периферического нерва 19
1.2 Регенерация поврежденного нерва и механизмы ее регуляции 25
1.3 Способы стимуляции регенерации периферических нервов 30
1.4 Современные представления о возможностях биостимуляции собственными тканями организма 38
2 Глава 2 Материалы и методы исследований 43
2.1 Организация экспериментов с лабораторными животными 43
2.1.1 Методика нейрорафии седалищного нерва у животных 44
2.1.2 Методика аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута в межлопаточную область 45
2.1.3 Методика прямой электростимуляции седалищного нерва 46
2.2 Объекты исследования 47
2.2.1 Объекты исследования микроциркуляции кожи 47
2.2.2 Объекты электронейромиографического исследования 48
2.2.3 Объекты морфологического исследования 48
2.2.4 Объекты биохимического исследования 49
2.3 Методы исследования 50
2.3.1 Методы исследования микроциркуляции 50
2.3.2 Методы исследования электрофизиологических показателей 54
2.3.3 Методы исследования биохимических показателей сыворотки крови 55
2.3.4 Методы исследования гистологических препаратов седалищного нерва и зоны аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 55
2.4 Статистическая обработка данных 56
Глава 3 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута на динамику микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей у крыс при нейрорафии седалищного нерва 57
3.1 Изменение микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей у крыс при нейрорафии седалищного нерва 57
3.1.1 Изменения микроциркуляторных показателей при нейрорафии седалищного нерва 58
3.1.2 Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва крыс при нейрорафии седалищного нерва 60
3.1.3 Анализ морфологических изменений седалищного нерва после нейрорафии 61
3.2 Изменение микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей у крыс после нейрорафии седалищного нерва при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута в межлопаточной области 65
3.2.1 Изменения микроциркуляторных показателей на фоне нейрорафии седалищного нерва при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута в межлопаточной области 65
3.2.2 Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва у животных на фоне нейрорафии при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 68
3.2.3 Анализ морфологических изменений седалищного нерва на 21-е сутки у животных на фоне нейрорафии при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 69
Глава 4 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута и прямой электростимуляции на состояние микроциркуляции в оперированной конечности и регенеративные процессы в оперированном нерве у крыс 73
4.1 Изменение микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей у крыс после нейрорафии седалищного нерва при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута в межлопаточной области и ПЭС 73
4.1.1 Изменения микроциркуляторных показателей у животных на фоне нейрорафии седалищного нерва при комплексной стимуляции 73
4.1.2 Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва у животных на фоне нейрорафии при комплексной стимуляции 76
4 4.1.3 Анализ морфологических изменений седалищного нерва на 21-е сутки у животных на фоне нейрорафии при комплексной стимуляции 77
4.2 Сравнительный анализ микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей при изолированном применении аутотрансплантации и ее использования в комплексе с прямой электростимуляцией после перерезки и нейрорафии седалищного нерва у крыс
4.2.1 Изменения микроциркуляторных показателей седалищного нерва у
животных на фоне нейрорафии при комплексной стимуляции в сравнении с изолированным применением аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 81
4.2.2 Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва на фоне нейрорафии у животных при комплексной стимуляции в сравнении с изолированным применением аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 84
4.2.3 Анализ морфологических изменений седалищного нерва на 21-е сутки у животных на фоне нейрорафии при комплексной стимуляции в сравнении с изолированным применением аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута 86
Глава 5 Механизмы реализации регенеративных эффектов аутотрансплантированного кожного лоскута в качестве компонента комплексной стимуляции репаративных процессов при повреждении периферического нерва 89
5.1 Дистантные эффекты аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута на микроциркуляцию у животных без повреждения нервного ствола 89
5.2 Морфологические изменения полнослойного кожного лоскута при его подкожной трансплантации 94
5.3 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута на систему регуляции ангиогенеза в условиях сохраненной и нарушенной иннервации 97
5 5.4 Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута на концентрации нейроспецифических белков при повреждении седалищного нерва 100
Обсуждение полученных результатов 105
Заключение 118
Выводы 119
- Способы стимуляции регенерации периферических нервов
- Объекты электронейромиографического исследования
- Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва крыс при нейрорафии седалищного нерва
- Морфологические изменения полнослойного кожного лоскута при его подкожной трансплантации
Способы стимуляции регенерации периферических нервов
Эндогенным триггером развития ВД многие исследователи считают белок Nmnat (nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase), аксональный транспорт которого нарушается при пересечении аксона [L. Conforti et al., 2006; M. Avery et al., 2009; Y. Sasaki et al., 2009; J. Gilley et al., 2010]. В исследовании на мутантных мышах с замедленной ВД было установлено, что сверхэкспрессия Nmnat приводит к защите аксонов и замедлению их фрагментации. Ингибирование убиквитин-протеасомной системы приводит к истощению запасов Nmnat даже в неповрежденных аксонах, и способствует развитию ВД. [T. Mack et al., 2001; M. Avery et al., 2009; E. Babetto et al., 2010; B. Kitay et al., 2013].
Деградация миелиновой оболочки происходит под действием фосфолипазы А2 (phospholipase-A2, PLA2), экспрессия которой в свою очередь регулируется цитокинами и хемокинами шванновских клеток, такими как MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1), TNF- (tumor necrosis factor), Интерлейкин-1 [S. De et al., 2003; A. George et al., 2004a; V. Shubayev et al., 2006; K. Temporin et al., 2008a]. Цитозольные и секретируемые формы PLA2 гидролизируют фосфолипиды мембраны с образованием арахидоновой кислоты и лизофосфотидилхолина, который вызывает распад миелина [P. Larsen et al., 2003; R. Martini et al., 2008]. Так же было установлено, что при блокировании экспрессии и активности PLA2 время очищения от остатков миелина значительно увеличивается [S. De et al., 2003]. В деградирующем миелине содержатся молекулы способные ингибировать рост аксонов, такие как MAG (myelin associated glycoprotein) и OMgp (oligodendrocyte-myelin glycoprotein) [V. Kottis et al., 2002; H. Meyer zu et al., 2008; L. McKerracher et al., 2015]. Уменьшение скорости очищения очага поражения нервной ткани от продуктов распада негативно влияет на развитие 20 восстановительных процессов [E. Babetto et al., 2010; M. Coleman et al., 2010; A. Gaudet et al., 2011]. Своевременная утилизация распадающегося миелина предотвращает развитие вторичного повреждения интактных аксонов и миелина мембраноатакующими комплексами комплемента [R. Mead et al., 2002; V. Ramaglia et al., 2007]. Фагоцитоз фрагментов дегенерирующих аксонов и миелиновой оболочки осуществляется шванновскими клетками и макрофагами, и занимает период времени от двух до трех недель. [W. Campana et al., 2007; K. Jessen et al., 2008; P. Arthur-Farraj et al., 2012; M. Richner et al., 2014].
Первыми на повреждение нерва реагируют шванновские клетки, активация которых происходит при взаимодействии некоторых эндогенных лигандов, в норме не присутствующих во внеклеточной среде, таких как белков теплового шока, компонентов внеклеточного матрикса и tool-рецепторов (toll-like receptor, TLRs) шванновских клеток. [K. Kariko et al., 2004; G. Brunn et al., 2005; D. Willis et al., 2007; A. Asea, 2008; S. Goethals et al., 2010]. В экспериментальных исследованиях было показано, что при добавлении некротизированных нейронов, содержащих предположительно лиганды TLRs, в культуру шванновских клеток происходит увеличение выработки TNF-, индуцибельной синтазы оксида азота, MCP-1 [S. Karanth et al., 2006; A. Boivin et al., 2007; I. Pineau et al., 2009]. Некоторые авторы считают, что основным регулятором активации шванновских клеток является транскрипционный фактор c-Jun, селективная инактивация которого приводит к замедлению регенеративных процессов в поврежденном нерве [P. Arthur-Farraj et al., 2012]. Так же, помимо c-Jun N-концевой киназы, определенную роль в активации шванновских клеток играют внеклеточная регулирующая киназа (extracellular signal-regulated kinase, ERK), р38 митоген-активирующая протеинкиназа [M. Feltri et al., 2002; M. Jaegle et al., 2003; S. Atanasoski et al., 2004].
При перерезке седалищного нерва у мышей в дистальном отрезке в течение первых пяти часов увеличивается продукция шванновскими клетками провоспалительных цитокинов – TNF-, Интерлейкин-1, Интерлейкин-1, LIF (leukemia inhibitory factor), производство MCP-1 и MIP-1 (macrophage 21 inflammatory protein) достигает максимума к первым суткам после повреждения [S. Shamash et al., 2002; H. Lee et al., 2009; E. Ydens et al., 2012; A. Brosius Lutz et al., 2014; K. Kegler et al., 2015]. Впоследствии эти цитокины стимулируют дополнительную экспрессию шванновскими клетками и фибробластами иммунных медиаторов, таких как Интерлейкин-6, гранулоцитарно-макрофагальный колоний-стимулирующий фактор, интерлейкин-10 [H. Taskinen et al., 2000; M. Subang et al., 2001; S. Shamash et al., 2002; F. Perrin et al., 2005]. Также было обнаружено что TNF- способен вызывать пролиферацию фибробластов, и индуцировать таким образом образование невриномы, что может приводить к ухудшению функционального восстановления нервов, а при связывании с TNF-R1 рецептором оказывать и нейротоксическое действие [W. Chadwick et al., 2008; K. Frankola et al., 2011]. Кроме этого, в течение 48 часов после травмы, окружающие травмированный нерв шванновские клетки прекращают выработку белков миелина [A. Guertin et al., 2005; B. Murinson et al., 2005].
Секреция шванновскими клетками провоспалительных цитокинов вызывает активацию резидентных макрофагов, привлечение циркулирующих макрофагов в очаг повреждения. Резидентные макрофаги пролиферируют и подвергаются морфологическим изменениям. Формирующийся при этом фенотип М1 макрофагов способствует развитию и поддержанию воспалительного процесса, так как клетки данной популяции являются продуцентами провоспалительных цитокинов, окислительных метаболитов – оксида азота и супероксид- аниона [H. Lee et al., 2009; E. Ydens et al., 2012; A. Brosius Lutz et al., 2014; K. Kegler et al., 2015]. MCP-1 и MIP-1 способствуют привлечению циркулирующих макрофагов. Также, одним из факторов, привлекающим в зону повреждения циркулирующие макрофаги, является Галектин-1, продуцируемый шванновскими клетками, резидентными макрофагами в течение трех суток после повреждения [J. McGraw et al., 2004; A. Gaudet et al., 2005].
Объекты электронейромиографического исследования
Методы исследования микроциркуляции Исследование микроциркуляции проводилось методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) с помощью компьютеризированного лазерного анализатора микроциркуляции крови «ЛАКК-ОП» (производство НПП «Лазма», Россия) с использованием программы LDF 3.0.2.395 и и разработанного программного обеспечения (№ 2015616501, опубл. 20.07.2015. – Бюл. №7.)
Перед регистрацией ЛДФ-граммы проводилась проверка «нулевого» показания анализатора. Для этого рабочий торец зонда с насадкой устанавливался перпендикулярно внутренней поверхности белого диска из фторопласта, вращением ручки «уст. нуля» на передней панели добивались нулевого показания на индикаторном табло. Проверка «нулевого» показания анализатора «ЛАКК-ОП» проводилась с целью повышения достоверности получаемых результатов. Металлическая насадка со световодным зондом фиксировалась на области холки животного, непосредственно над зоной АТПКЛ и над кожей тыльной поверхности стопы оперированной конечности помощи атравматического пластыря (рис. 2). Изменения потока крови в микроциркуляторном русле кожи животного регистрировались в виде кривой (ЛДФ-граммы), отображаемой на экране монитора компьютера, сопряженного с анализатором «ЛАКК-ОП». Длительность стандартной записи составляла 8 минут.
Регистрацию ЛДФ-грамм выполняли у животных 1, 2, 3 и 4-й групп, описанных в разделе 2.2.1. У животных 1-й группы проводили оценку микроциркуляции кожи тыльной поверхности стопы оперированной конечности на 7-е, 14-е и 21 сутки эксперимента. У животных 2-й и 3-й группы проводили оценку микроциркуляции кожи тыльной поверхности стопы оперированной конечности и области АТПКЛ на 14-е и 21-е сутки после оперативного вмешательства. У животных 4-й группы регистрацию ЛДФ-грамм с кожи области АТПКЛ выполняли на 7-е, 14-е и 21-е сутки эксперимента. В качестве контроля использовали ЛДФ-граммы с кожи межлопаточной области и тыльной поверхности стопы соответственно, зарегистрированные у ложнооперированных животных до проведения манипуляций. Типичный вид кривых, отражающих изменение потока крови в микроциркуляторном русле у интактных белых крыс, представлен на рисунке 3.
Кривая изменения перфузии микроциркуляторного русла кожи (ЛДФ-грамма) интактного крысы-самца.
Расчет параметров базального кровотока проводился в два этапа. На первом этапе рассчитывали показатель перфузии (М) – величина среднего потока крови в интервалах времени регистрации или среднее арифметическое значение перфузии в перфузионных единицах (пф.ед.).
На втором этапе проводился амплитудно-частотный анализ ЛДФ-граммы. Амплитудно-частотные характеристики осцилляций кровотока в микроциркуляторном русле кожи экспериментальных животных определяли на основе вейвлет-анализа, реализованного в программном обеспечении LDF 3.0.2.395.
При изучении активных механизмов модуляции микроциркуляции с помощью спектрального вейвлет-анализа оценивали величины пиковых частот нормированных амплитуд осцилляций в эндотелиальных (0,01-0,076 Гц), нейрогенных (0,076-0,2 Гц) и миогенных (0,2-0,74 Гц) диапазонах [А.И. Крупаткин, 2013; В.В. Александрин, 2014; А.Н. Иванов и др., 2014b; A. Humeau et al., 2004]. Расчет нормированных амплитуд колебаний по формуле А/3 100 (где А – амплитуда колебаний, – среднеквадратическое отклонение колебаний перфузии, средняя модуляция кровотока) с помощью программы LDF 3.0.2.395. Интерпретация результатов проводилась в соответствии с трактовками, изложенными в литературе [А.И. Крупаткин и др., 2005].
Методы исследования электрофизиологических показателей Электронейромиографические исследования проведены на электромиографе «Keypoint» фирмы Alpain Biomed с набором стандартных стимулирующих и регистрирующих электродов. Для выделения у животных вызванных потенциалов нерва (ВП) регистрирующий электрод располагали на седалищном нерве выше и ниже места повреждения (Рис. 5А). Для регистрации вызванного мышечного ответа (М-ответа) игольчатый электрод находился в икроножной мышце (Рис. 5Б). Нерв раздражали прямоугольными импульсами, длительностью 0,1 мс, частотой 1 Гц. Величина тока увеличивалась до появления устойчивого, с максимальной амплитудой неврального и мышечного ответов. При ЭНМГ-исследовании изучались основные параметры вызванных потенциалов: латентный период (ЛП) и амплитуда.
Изменения электронейромиографических показателей седалищного нерва крыс при нейрорафии седалищного нерва
Следовательно, при анализе морфологических препаратов группы животных с нейрорафией и АТПКЛ было установлено, что к 21-м суткам эксперимента в оперированном нерве среднее количество нервных волокон в обоих отделах увеличивается в два раза относительно группы сравнения. Число неизмененных волокон проксимального отдела в четыре раза превышает аналогичные показатели группы сравнения. Так же обнаруживается в два раза больше регенерирующих волокон, и в два раза меньше дистрофически измененных нервных волокон. Для дистального отдела характерно увеличение в шесть раз числа регенерирующих волокон и уменьшение в двое числа дистрофированных относительно аналогичных показателей группы сравнения. Имеющиеся морфологические изменения характерны для развивающихся дегенеративно-регенеративных процессов, при этом в отличии от группы 71 сравнения, в данной группе преобладают процессы регенерации, что в свою очередь свидетельствует о регенеративном эффекте АТПКЛ.
Таким образом, у животных при выполнении АТПКЛ одновременно с нейрорафией седалищного нерва отмечаются менее выраженные трофические нарушения по сравнению с крысами, которым на фоне нейрорафии АТПКЛ не проводилась. При исследовании состояния микроциркуляторного русла было установлено, что перфузионный показатель от контрольных значений на 14-е и 21-е сутки не отличается. Поддержание адекватной перфузии при повреждении и нейрорафии седалищного нерва осуществляется за счет перестройки активных механизмов контроля под влиянием АТПКЛ – увеличения эндотелиальной вазодилятации и уменьшения нейрогенного тонуса сосудов.
АТПКЛ оказывает влияние на развитие двигательных нарушений при повреждении седалищного нерва. По ЭНМГ-данным у животных с нейрорафией и АТПКЛ в оперированном нерве к 21-м суткам большее количество нервных волокон проводит возбуждение через зону нейрорафии, происходит активация процессов реиннервации мышц, что свидетельствует о начале импульсной стадии регенерации.
Морфологические изменения, имеющиеся на 21-е сутки в препаратах седалищного нерва животных с нейрорафией и АТПКЛ, подтверждают результаты функциональных исследований и свидетельствуют о преобладании регенеративных процессов в нерве над дегенеративными.
Полученные данные позволяют заключить, что аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута, выполненная на фоне перерезки седалищного нерва с его последующей нейрорафией, препятствует ухудшению кровообращения в оперированной конечности, развитию признаков денервационной гиперчувствительности сосудов микроциркуляторного русла за счет стимуляции эндотелиальной вазодилятации и снижения нейрогенного тонуса сосудов. АТКПЛ оказывает регенеративное действие, которое выражается в увеличении количества неизмененных волокон в проксимальном отделе, увеличении числа регенерирующих нервных волокон преимущественно в 72 дистальном сегменте, а также уменьшении числа дистрофированных как в проксимальном, так и в дистальном сегментах. Кроме того, АТПКЛ улучшает проведение нервных импульсов через зону нейрорафии, а также интенсифицирует реиннервацию мышечных волокон и ускоряет наступление импульсной стадии регенеративного процесса.
Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута и прямой электростимуляции на состояние микроциркуляции в оперированной конечности и регенеративные процессы в оперированном нерве у крыс [И.Е. Шутров и соавт. 2016]
Изменение микроциркуляторных, электронейромиографических и морфологических показателей у крыс после нейрорафии седалищного нерва при аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута в межлопаточной области и ПЭС
По данным литературы положительное влияние электрического тока при стимуляции нервных проводников распространяются и на периневрально расположенные ткани, способствуя улучшению в них кровообращения. В этой связи для оценки влияния комплексной стимуляции, включающей АТПКЛ и прямую электростимуляцию (ПЭС) на состояние кровообращения в оперированной конечности и регенеративных процессов в оперированном нерве были исследованы микроциркуляторные показатели методом ЛДФ, электронейромиграфические параметры и морфологические изменения
Изменения микроциркуляторных показателей у животных на фоне нейрорафии седалищного нерва при комплексной стимуляции [А.Н. Иванов и др., 2015c] У животных, которым проводилась комплексная стимуляция на фоне нейрорафии, на 21-е сутки эксперимента после выполнения оперативного вмешательства отмечались аналогичные группе сравнения нарушения трофики, в виде отеков стоп, выпадения волос в нижней трети голени. Однако, выраженные трофические нарушения, такие как изъязвления на коже наблюдались только в 15% случаев.
При анализе микроциркуляторных показателей данной группы было установлено, что на 14-е сутки перфузионный показатель значимо выше аналогичного показателя группы сравнения, но ниже контроля (табл. 7).
Морфологические изменения полнослойного кожного лоскута при его подкожной трансплантации
Выявленные изменения микроциркуляторных показателей свидетельствуют о дистантном стимулирующем эффекте АТПКЛ, выполненной на фоне нейрорафии седалищного нерва. При этом нормализация перфузии кожи оперированной конечности сопряжена с увеличением нормированных амплитуд колебаний в эндотелиальном и нейрогенном диапазонах. Повышение амплитуд эндотелиальных колебаний отражает вазодилатирующую активность эндотелия сосудов, обусловленную продукцией оксида азота [А.И. Крупаткин и др., 2005; А.Н. Иванов и др., 2014d]. Природа нейрогенных колебаний связана с активностью -адренорецепторов мембран гладкомышечных клеток. Снижение амплитуды нейрогенных колебаний наблюдается, как при возрастании активности симпатических нервов-вазоконстрикторов, так и на фоне денервационной гиперчувствительности сосудистой стенки [А.И. Крупаткин и др., 2005]. Следовательно, выявленное повышение амплитуд нейрогенных колебаний под влиянием АТПКЛ может быть связано как с уменьшением симпатической активности, обусловленной реиннервацией денервированных тканей, так и с уменьшением реактивности адренорецепторов сосудистой стенки [А.М. Горбачева и др., 2016].
Исследование ЭНМГ-параметров сшитого седалищного нерва при аутотрансплантации свидетельствует о улучшении проводимости через зону нейрорафии при сравнении с изолированной нейрорафией, и начале реиннервации мышечных волокон. Полученные данные соответствуют результатам гистологического исследования препаратов седалищного нерва у животных с аутотрансплантацией. Так, для дистальных отделов характерно увеличение числа регенерирующих волокон до 84% относительно общего количества волокон в поле зрения. Кроме того, согласно результатам исследования проксимальных отделов нерва, АТПКЛ оказывает регенеративный эффект, который выражается в уменьшении числа дистрофированных нервных волокон и увеличении количества неизмененных.
Ряд авторов отмечает стимулирующее влияние трансплантатов на регенерацию нервной ткани и улучшение микроциркуляции в зоне трансплантации. Например, при оценке отдаленных клинических результатов лечения (до 6 лет) биоматериалами Аллоплант при атрофии зрительного нерва было установлено улучшение в 68% случаев [О.И. Карушин, 2009; В.Н. Канюков и др., 2015]. В случае применения материалов Аллоплант, обнаруживаемые положительные эффекты имели локальный характер, соответствующий области трансплантации биоматериалов. При этом реализация эффектов происходит за счет биологически активных веществ межклеточного матрикса, оставшихся после мембранолиза донорских тканей и удаления из них наиболее иммуногенных компонентов [О.И. Карушин, 2009; В.Н. Канюков и др., 2015]. Отличительной особенностью обнаруженных стимулирующих эффектов на микроциркуляцию и регенерацию нерва в нашей работе является дистантный характер их влияния.
Выявленные стимулирующие эффекты подобны феномену прекондиционирования тканей, когда в результате стрессового воздействия улучшается способность ткани переносить более тяжелое повреждение [С.Г. Журавский и др., 2012]. В случае с аутотрансплантацией кожного лоскута на фоне нейрорафии периферического нерва представляет интерес эффект дистантного прекондиционирования тканей. Суть данного метода заключается в создании коротких эпизодов ишемии-реперфузии в удаленных от органа-мишени тканях, в результате которых в тканях, подвергшихся ишемии накапливаются биологически активные вещества. Данные биологически активные вещества при попадании в кровоток оказывают дистантные цитопротекторные эффекты, а также могут стимулировать регенерацию [Е.Б. Манухина и др., 2007; Е.В. Шляхто и др., 2012; Н.П. Лямина и др., 2015; S. Dong et al., 2009; H. Lujan et al., 2009; S. Li et. al., 2009; C. Yin et al., 2009].
Таким образом, АТПКЛ, выполненная одновременно с нейрорафией оказывает регенеративный эффект, который выражается в улучшении проведения нервных импульсов через зону нейрорафии, ускорении наступления импульсной стадии процесса регенерации, снижении дегенерации аксонов проксимального сегмента седалищного нерва увеличении количества нервных волокон в дистальном участке, а также дистантном стимулирующем действии на систему микроциркуляции, которое характеризуется поддержанием адекватной перфузии тканей пораженной конечности.
За последние десятилетия было накоплено большое количество данных о положительном влиянии электростимуляции. Электростимуляционное воздействие используется для поддержания тонуса и предотвращения развития атрофии денервированных мышц, для стимуляции регенеративных процессов в поврежденном нерве [M. Viv et al., 2008; R. Teodori et al., 2011; K. Haastertalini et al., 2011, 2013]. Так же электростимуляция способствует улучшению местного кровотока, что в свою очередь влияет на регенеративные процессы в поврежденных периферических нервах [Н.В. Татарханов и др., 2014]. В этой связи нами было проведено исследование влияния комбинации прямой электростимуляции и кожного трансплантата на течение дегенеративно-регенеративных процессов на экспериментальной модели повреждения периферического нерва. Было установлено, что комплексная стимуляция при аналогичном дистантном стимулирующем действии на микроциркуляцию, увеличивает продолжительность эндотелиальной вазодилатации. При сравнении амплитуд вызванных невральных потенциалов при АТПКЛ и комплексной стимуляции статистически значимых отличий выявлено не было, что может свидетельствовать об одинаковом влиянии обоих способов стимуляции на прорастание нервных волокон через зону нейрорафии. В тоже время, выявленное увеличение амплитуд М-ответа при комплексной стимуляции по сравнению с АТПКЛ свидетельствует о более выраженном влиянии на интенсификацию процессов реиннервации мышц, так как амплитуда М-ответа характеризует суммарный потенциал мышечных волокон стимулируемой мышцы. Вероятно, данные изменения обусловлены стимуляцией спраутинга терминальных отделов регенерирующих аксонов [А.В. Кочетков и др., 2012; K. Haastertalini et al., 2011].