Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
Глава 2. Материал и методы исследований 33
Глава 3. Оценка эффективности биологического метода защиты томата от фузариозного увядания 36
3.1. Усовершенствование методики инокуляции томата возбудителем фузариозного увядания 36
3.2. Изучение антагонистической активности различных изолятов Trichoderma spp по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата 42
3.3. Изучение антагонистической активности различных изолятов бактерий Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis и Serratia marcescens 49
3.4. Изучение антагонистической активности непатогенных штаммов Fusarium по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата 55
3.5. Повышение устойчивости томата к фузариозному увяданию 66
3.6. Изучение возможности совместного применения антагонистов и индукторов устойчивости 68
3.7. Обработка семян томата против фузариозного увядания томата 72
Глава 4. Химическая защита томата от фузариозного увядания 76
4.1. Химическая защита вегетирующих растений 76
4.2. Обеззараживание почвы от возбудителя фузариозного увядания 83
Глава 5. Оценка устойчивости селекционных линий томата к фузариозному увяданию 87
Заключение 99
Выводы 101
Список литературы 103
- Изучение антагонистической активности различных изолятов Trichoderma spp по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата
- Изучение антагонистической активности различных изолятов бактерий Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis и Serratia marcescens
- Обеззараживание почвы от возбудителя фузариозного увядания
- Оценка устойчивости селекционных линий томата к фузариозному увяданию
Введение к работе
Производство овощей в защищенном грунте, являясь интенсивной отраслью сельского хозяйства, требует от растения реализации максимальной продуктивности. Вместе с тем, концентрация и интенсификация производства создают благоприятные условия для развития болезней. Многочисленные болезни, среди которых нужно выделить фузариозное увядание томата (возбудитель - Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici), часто делают проблематичным получение удовлетворительного урожая. Это заболевание имеет также серьезное экономическое значение в Иране. Так, в среднем за 1983-89 гг. в иранском округе Varamin пораженность томата составляла 27.3%. При этом на некоторых полях растения томата полностью погибли до уборки урожая (Etebarian, 1992).
Выход видится в разработке и использовании системы интегрированной защиты растений, одним из элементов которой является повышение эффективности природных механизмов регуляции численности патогенов при помощи биологического метода и индукторов устойчивости.
Биологический метод защиты растений, предусматривает применение биопрепаратов на основе живых культур микроорганизмов-антагонистов. Успешность этого метода во многом определяется выбором микроорганизмов - антагонистов, способных обеспечивать эффективную защиту в течение вегетационного периода. Поэтому поиск таких штаммов продолжает оставаться актуальной задачей. Заслуживает также изучения возможность повышения устойчивости с помощью химических индукторов.
Вместе с тем химический метод продолжает оставаться важнейшим средством оперативного сдерживания патогенов. В последние годы как альтернатива пропариванию грунта и фумигации бромистым метилом рекомендуется использование препарата базамид-гранулят. Эффективность
этого препарата в подавлении источников инфекции F. oxysporum f.sp.lycopersici нуждается в изучении.
Наиболее эффективным методом защиты является выращивание устойчивых сортов и гибридов. Требуют совершенствования методы отбора устойчивых растений.
Цель исследований заключалась в усовершенствовании приемов защиты томата от фузариозного увядания.
В связи с этим решались следующие задачи:
Выявить изоляты грибов и бактерий обладающих высокой антагонистической активностью по отношению к F. oxysporum f.sp. lycopersici.
Найти индукторы устойчивости томата к фузариозному увяданию
Изучить эффективность фунгицидов для обеззараживания почвы и защиты вегетирующих растений
Изучить расовый состав коллекции изолятов F. oxysporum f.sp. lycopersici.
- Провести оценку устойчивости коллекции селекционного материала
с использованием искусственного инфекционного фона и сравнить
её с результатами молекулярного маркирования.
Научная новизна. Проведен скрининг микроорганизмов на антагонистическую активность по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата. Показано, что авирулентные изоляты Fusarium снижают развитие заболевания посредством повышения устойчивости растения-хозяина. Впервые показано, что добавление к суспензии спор авирулентных изолятов Fusarium 0,3% силиката натрия значительно повышает биологическую эффективность предпосевной обработки семян томата. Впервые оценена биологическая эффективность ряда современных фунгицидов.
Установлено, что внесение базамид гранулята в норме 50 г/м приводит к полной гибели мицелия и хламидоспор возбудителя в тепличном грунте и растительных остатках.
Практическая значимость. Выявленные эффективные изоляты микроорганизмов- антагонистов могут быть использованы в производстве биопрепаратов, применяемых в защищенном грунте. Содержащиеся в работе данные о сравнительной эффективности фунгицидов могут быть основой для совершенствования системы химической защиты. Показана высокая эффективность использования метода молекулярного маркирования для отбора устойчивых к фузариозу растений томата, что значительно ускоряет и облегчает селекцию на устойчивость. Выделены устойчивые генотипы, гомозиготные по гену 12.
Апробация работы. Результаты исследований были доложены на 3-ей международной Российско-Иранской конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы» (Москва, 2002), научных конференциях МСХА им. К.А. Тимирязева (июнь, декабрь 2003г).
Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 работы.
Основные положения, выносимые на защиту:
Использование в биологической защите томата в теплице изолятов микроорганизмов с высокой антагонистической и индуцирующей устойчивость активностью.
Применение элиситоров для повышения устойчивости к заболеванию, в т.ч. совместно с приемами биологической защиты.
Использование эффективных фунгицидов для обеззараживания тепличного грунта и защиты вегетирующих растений.
Ускорение процесса селекции на устойчивость посредством использования специфических молекулярных маркеров, позволяющих проводить отбор по генотипу.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, списка литературы из 198 наименований, в том числе 141 иностранных работ. Работа изложена на 123 страницах, содержит 11 рисунков и 43 таблиц.
Автор выражает глубокую благодарность ведущему научному сотруднику Монахосу Г.Ф., профессору Дорожкиной Л.А. и доценту Карлову Г.И. за помощь в проведении исследований, профессору В.А. Шкаликову, доценту Корсак И.В., ведущему научному сотруднику А.Н. Перебитюку, Борисову Б.А. - за любезно предоставленные культуры микроорганизмов.
Изучение антагонистической активности различных изолятов Trichoderma spp по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата
Приоритетное положение в защите растений от фитопатогенов занимают грибы рода Trichoderma, на основе которых нарабатывается препарат триходермин. Грибы этого рода подавляют развитие других микроорганизмов, в том числе фитопатогенов, путем прямого паразитирования, конкуренции за субстрат и выделением ферментов и антибиотиков. Они продуцируют целый ряд антибиотиков (виридин, глиотоксин и др.) и подавляют развитие преимущественно почвенных фитопатогенов - грибов из родов Fusarium, Pythium, Phoma, Phytophtora, Alternaia, Botrytis и других возбудителей заболеваний растений (Штерншис и др., 2000). Многие производственные штаммы Trichoderma были выведены 30-40 лет назад и либо потеряли свою эффективность, либо мало пригодны для современной технологии глубинного культивирования.
Поэтому поиск эффективных штаммов триходермы продолжает оставаться актуальной задачей.
Коллекцию изолятов Trichoderma sp. тестировали на антагонизм in vitro на КГА по отношению к возбудителю фузариозного увядания томата. Оценку эффективности защитного действия изолятов проводили с использованием двух методов создания искусственного инфекционного фона: инокуляция травмированных корней томата и внесение инокулюма в почвенную смесь.
Метод обработки травмированных корней. Для оценки антагонистической активности in vivo корневую систему растений в фазе 2-3 настоящих листьев погружали в суспензию спор изолятов Trichoderma sp. плотностью 106 спор в 1 мл на 30 мин. По истечении экспозиции растения высаживали в вазоны. Через 7 дней растения извлекали из почвы, слегка травмировали корни ножницами и помещали на 30 мин в суспензию спор F.o. f.sp.lycopersici плотностью 106 спор в 1 мл на 30 мин. Затем растения высаживали в те же вазоны.
Метод внесения антагонистов в почвенную смесь. Семена томата сорта Белый налив 241 (высоковосприимчивый к фузариозному увяданию) сеяли в кассету (3.5 х 3.5 х 4.5 см) в смесь верхового и низинного торфа (1:2), куда были предварительно внесены различные изоляты Trichoderma spp. в концентрации 106 спор в 1 г почвы. Раз в неделю проводили подкормку удобрениями "Кемира гидро" и кальциевой селитрой. Затем через три недели растения в фазе 2-3 настоящих листьев высаживали в грунт, куда был предварительно внесен возбудитель фузариозного увядания в концентрации 104 спор в 1 г почвы (Larkin, Fravel, 1998). При учете обычно через 25-30 дней после инокуляции измеряли высоту растений и оценивали увядание по Grattidge и O Brien (1982). Полученные результаты показали, что в условиях in vitro из тестированных 23 изолятов Trichoderma sp. через 4 суток 7 изолятов (МС10, Sp, Л-17, ОПК-1, ОПК-2, ЛМ-1, Ml 111-7) вызывали торможение роста изолята F37 F.o. f.sp.lycopersici более чем на 40%, 14 изолятов на 20...40% (табл. 6). По отношению к изоляту патогена FOL 8 изолятов Trichoderma sp. (МС10, Л 17, Лм-1, ОПК-1, ОПК-2, МПП-1, МПП-2, МПП-4) подавляли рост более 40%, 12 изолятов на 25...40% (табл. 7). В опытах по биологической защите в теплице выявлено, что в наибольшей степени снижала развитие штамма F37 возбудителя фузариозного увядания предварительная обработка корневой системы изолятами Trichoderma sp. (Sp, МПП-4, МПП-7, С-16, МГШ-2, МС-10, ГАС-98, МПП-1, Ml 111-6, ОПК-1). При этом средний балл поражения снижался в 4...9.7 раз, и значительно увеличивалась высота растений по сравнению с инфицированным контролем (табл. 8). В вариантах с искусственным заражением изолятом FOL наибольший защитный эффект обеспечила предварительная обработка корней изолятами Trichoderma sp. МПП-4, МПП-6, Sp, ОПК-1, МПП-2, С-16, ЛМ-2, ГОЯ-87, МПП-7 и МС-10 (табл. 8). На основании полученных данных можно выделить следующие изоляты Trichoderma, эффективные против обоих тестированных изолятов возбудителя: МПП-4, Sp, МПП-2, С-16, ОПК-1, МПП-6, МС-10 и МПП-7. При использовании метода внесения Trichoderma в рассадную смесь в кассетах выявлено, что в наибольшей степени снижало развитие штамма F37 возбудителя фузариозного увядания предварительное внесение в почву изолятов Trichoderma spp. (МС-10, С-16, Sp, Ц-289, ОПК-1, ОПК-2, МПП-1, МПП-2, МПП-6, МПП-7, ГОЯ-87). При этом средний балл поражения снижался в 2.7...6.6 раз, и значительно увеличивалась высота растений по сравнению с инфицированным контролем в 2.. .3.2 раза (табл. 9). В вариантах с искусственным заражением изолятом FOL наибольший защитный эффект обеспечило предварительное внесение в почву изолятов МС-10, С-16, А-300, Sp, Л-17, Ц-289, ЛМ-1, ЛМ-2, ОПК-1, ОПК-2, МПП-2, МПП-5, МПП-6, МПП-7, ГОЯ-87, П-2150 (табл. 9).
Изучение антагонистической активности различных изолятов бактерий Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis и Serratia marcescens
Проведенное на искусственной питательной среде тестирование антагонистической активности 9 изолятов Pseudomonas fluorescens по отношению к изоляту F37 возбудителя фузариозного увядания показало, что наибольшей способностью к торможению роста обладали изоляты G54, WB1 и АРЗЗ (продуцент биопрепарата планриз). Так, через 5 суток совместного культивирования изолят G54 тормозил рост патогена на 69,4%, а изоляты WB1 и АРЗЗ - на 68,5 и 58,6% соответственно (табл. 10). При тестировании антагонистической активности этих же изолятов бактерий по отношению к другому изоляту патогена FOL (табл. 11), к наиболее активным были отнесены изоляты WB1 (67% торможения роста), CW2 (60,6% торможения) и АРЗЗ (60%). Сравнивая данные таблиц 10 и 11 можно заключить, что из испытанной коллекции антагонистических изолятов наибольшей активностью в условиях in vitro по отношению к обоим изолятам патогена обладали WB1 и АРЗЗ. Изолят Bacillus subtilis в условиях in vitro также показал неплохую активность по отношению к двум изолятам патогена, обеспечив торможение роста на 57,4...59,2% (табл. 12). При этом наблюдалось сильное лизирование мицелия изолята FOL.
При испытании антагонистической активности этой же коллекции изолятов бактерий на искусственном инфекционном фоне было установлено, что по отношению к изоляту возбудителя фузариозного увядания F37 наибольшим защитным эффектом обладали изоляты P. fluorescens 14, W34, CHAO, WB52, G54, WBl. Они вызвали снижение балла поражения растений в 1,2...5,5 раз (табл. 13). Проведенное по этой же схеме испытание защитного действия после инокуляции штаммом FOL показало, что по отношению к этому штамму наибольшим эффектом обладали изоляты W34, CW2, 14, WB1. Они снижали балл поражения в 1,9...8 раз, по сравнению с контролем (табл. 14). Обобщая данные таблиц 13 и 14 можно заключить, что изоляты Pseudomonas fluorescens W34, 14, WBl могут быть использованы в качестве биоагентов для производства биопрепаратов против фузариозов томата. Обработка корневой системы томата изолятом Bacillus subtilis не имела существенного защитного действия, хотя этот изолят обладал неплохой активностью in vitro. Этот факт указывает на то, что данные полученные при селекции антагонистических изолятов в условиях in vitro не всегда достоверны и нуждаются в проверке на искусственных инфекционных фонах. На искусственном инфекционном фоне при внесении инокулюма в почвенную смесь наибольшим защитным эффектом против изолята FOL патогена обладали изоляты бактерий W34, CW2, 14, WB1, АРЗЗ, СНАО и G54. Они снижали балл поражения в 1.9...3 раза и увеличивали высоту растений в 1.7...2.5 раза, по сравнению с контролем (табл. 15).
При внесении в почву другого изолята патогена F37 наибольшим защитным эффектом обладали изоляты WB1, 14, W34 (табл. 15). Изоляты бактерий WB1, 14, W34 были эффективны против обоих испытанных изолятов патогена и представляют интерес в качестве биоагентов для производства биопрепаратов против фузариозов томата. Изолят Bacillus subtilis при испытании против F37 и FOL при инокуляции почвы также обеспечивал эффективную защиту, снижая балл поражения фузариозным увяданием в 1.8 раза, и увеличивая высоту растений в 2 раза, по сравнению с контролем (табл. 15). Некоторые исследователи получили неплохие результаты при использовании хитинолитической бактерии Serratia marcescens для защиты пшеницы, огурца и цикламена от почвенных инфекций (Поздняков, Джавахия, 2000; Соколова и др., 1995; Someya et al., 2000). В нашей работе изолят Serratia marcescens (предоставлен Борисовым Б.А.) при испытании в условиях in vitro по методу Fakhouri W. и Buchenauer Н. (1998) не показал активности по отношению к двум изолятам патогена, обеспечив торможение роста лишь на 17...20%. При этом не наблюдалось лизирование мицелия патогена (табл. 16).
Обеззараживание почвы от возбудителя фузариозного увядания
Хламидоспоры возбудителя фузариозного увядания сохраняются в тепличном грунте и служат источником инфекции в следующем обороте. В этой связи необходимым приемом защиты томата является обеззараживание грунта. Для этой цели в России применялись пропаривание и фумигация бромистым метилом. Пропаривание в сложившихся экономических условиях весьма дорого и к тому же его эффективность в производственных условиях часто невелика. Фумигация бромистым метилом требует специальной аппаратуры и проводится силами специализированных организаций.
Фирмой BASF для борьбы с почвенными инфекциями предложен препарат базамид-гранулят (д.в. дазомет). Микрогранулы этого препарата после заделки в почву при контакте с водой и воздухом активизируются, что приводит к выделению газа - метилизотиоционата.
Нами проводились испытания эффективности этого препарата против возбудителя фузариозного увядания томата. Патогена выращивали поверхностным способом на зерне и глубинным способом на жидкой картофельно-глюкозной среде на качалке. Мицелий с глубинной культуры отделяли фильтрованием через 3 слоя марли. Навеску мицелия (2 г) помещали в мешочки из укрывного материала (лутрасил) и закапывали в грунт в вазонах, куда предварительно был внесен базамид- гранулят в дозе 30, 40, 50 г/кв.м. Затем почву поливали, накрывали полиэтиленовой пленкой на 10 дней. После периода инкубации мешочки с мицелием извлекали и проводили посев на КГА. Через 4 и 7 дней после посева измеряли диаметр мицелия.
Для оценки влияния обработки инфицированной почвы базамидом на поражение томата заболеванием, в почвенную смесь вносили патоген в концентрации 104 спор в 1 г почвы. Затем в инокулированную почву вносили базамид в дозе 50 г/кв.м по методике описанной выше. После снятия пленки почву рыхлили и проветривали в течение 3 суток и высаживали в них предварительно выращенную здоровую рассаду томата. Через 25 дней учитывали высоту и поражение растений. Как следует из полученных данных внесение базамида в дозах 30 и 40 г/кв.м. не могло полностью инактивировать мицелий и хламидоспоры патогена (табл. 37). Доза 50 г/кв.м. привела к полной гибели патогена в почве. Сравнение сохраняемости двух субстратов резервации патогена: мицелий в почве и мицелий в растительных остатках показал, что при дозе базамида 50 г/кв.м. наблюдается полная гибель патогена в этих двух вариантах (табл. 38).
Эти результаты нашли подтверждение в опыте с обработкой базамидом инокулированнои патогеном почвы с последующей высадкой здоровой рассады томата. Как следует из полученных данных (табл. 39), после обработки базамидом в норме 50 г/ м2 не было отмечено развития фузариозного увядания, а высота растений в этих вариантах не отличалась от контроля (без внесения патогена).
Таким образом, полученные данные указывают на высокую эффективность базамид гранулята в норме расхода 50 г/м при обеззараживании тепличного грунта даже при его высокой инфицированности возбудителем фузариозного увядания. Выращивание устойчивых сортов и гибридов позволяет резко сократить затраты на пропаривание грунта и дорогостоящие химические средства защиты, кроме того это важнейший фактор производства и поставки потребителю экологически безопасной продукции из защищенного грунта.
Практическая селекционная работа по созданию F гибридов тепличного томата устойчивого к фузариозному увяданию предусматривает идентификацию генов устойчивости в коллекционном материале для чего необходимо знание расового состава используемых изолятов возбудителя. Для выяснения расовой принадлежности патогенных изолятов из коллекции лаборатории защиты растений МСХА им. К.А. Тимирязева в 2001 году была проведена инокуляция генотипов-хозяев с известными генами устойчивости. Восприимчивый стандарт - Белый налив 241 не обладает генами устойчивости. Гибриды Fi Пинк леди и Fi Благовест имеют ген I и устойчивы к расе 1. Гибриды F і Султан, РіУлтимо, РіБенито и FiDRW 6241 - с геном 12, устойчивы к обеим расам.
Для идентификации рас патогена выращивали сеянцы сортов и гибридов - дифференциаторов, в фазе 2-3-х настоящих листьев проводили пинцировку, затем их погружали в суспензию спор в концентрации 106 спор в 1мл на 30 минут и высаживали в вазоны, которые размещали в зимней остеклённой теплице. В теплице поддерживали температуру воздуха: ночью +18... 20С, днём +22...24С. Через 25 дней после инокуляции проводили учёты. Степень увядания оценивали в баллах (Grattidge, O Brien, 1982), высоту растений измеряли линейкой. Результаты исследования, представленные в таблице 40, показывают, что только сорт Белый налив 241 оказался восприимчивым ко всем трём патогенным изолятам.
Оценка устойчивости селекционных линий томата к фузариозному увяданию
Выращивание устойчивых сортов и гибридов позволяет резко сократить затраты на пропаривание грунта и дорогостоящие химические средства защиты, кроме того это важнейший фактор производства и поставки потребителю экологически безопасной продукции из защищенного грунта.
Практическая селекционная работа по созданию F гибридов тепличного томата устойчивого к фузариозному увяданию предусматривает идентификацию генов устойчивости в коллекционном материале для чего необходимо знание расового состава используемых изолятов возбудителя.
Для выяснения расовой принадлежности патогенных изолятов из коллекции лаборатории защиты растений МСХА им. К.А. Тимирязева в 2001 году была проведена инокуляция генотипов-хозяев с известными генами устойчивости. Восприимчивый стандарт - Белый налив 241 не обладает генами устойчивости. Гибриды Fi Пинк леди и Fi Благовест имеют ген I и устойчивы к расе 1. Гибриды F і Султан, РіУлтимо, РіБенито и FiDRW 6241 - с геном 12, устойчивы к обеим расам.
Для идентификации рас патогена выращивали сеянцы сортов и гибридов - дифференциаторов, в фазе 2-3-х настоящих листьев проводили пинцировку, затем их погружали в суспензию спор в концентрации 106 спор в 1мл на 30 минут и высаживали в вазоны, которые размещали в зимней остеклённой теплице. В теплице поддерживали температуру воздуха: ночью +18... 20С, днём +22...24С. Через 25 дней после инокуляции проводили учёты. Степень увядания оценивали в баллах (Grattidge, O Brien, 1982), высоту растений измеряли линейкой.
Результаты исследования, представленные в таблице 40, показывают, что только сорт Белый налив 241 оказался восприимчивым ко всем трём патогенным изолятам. Ни один из изолятов не смог преодолеть устойчивость генотипов, обусловленную как геном I, так и І2. Таким образом, можно заключить, что все три изолята относятся к расе 1 F.o. f.sp.lycopersici.
В задачу нашей работы входила оценка устойчивости к фузариозному увяданию коллекции сортов, гибридов и инбредных линий томата, используемой в селекционной работе на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева. Автор выражает большую благодарность ее директору Монахосу Г.Ф. за большую помощь в проведении экспериментов. Оценку проводили при искусственной инокуляции патогенными изолятами F37 и FOL, относящимися к расе 1. Методика описана выше.
В результате оценки 69 образцов томата установлено, что большинство из них были устойчивы к обоим изолятам. Сорт Белый налив 241 и линии ДоЗстІ, ДоЗст(14), ДоЗстЮ, ДоЗст(21), ДоЗстОхДоЗ и Ма1-45 оказались восприимчивыми к обоим изолятам и выбракованы из дальнейшей селекционной работы. В поколении F2: Аврора, Маисса, Камерон, Каисса и 01/02-1 наблюдалось расщепление. Растения без симптомов поражения были отобраны и размножены. Следует отметить, что в категорию устойчивых растений попали как доминантные гомозиготы, так и гетерозиготы, так как они не различаются по фенотипическому проявлению устойчивости.
Особое положение занимают родительские линии Сф04 и Ялф (первого российского гибрида для открытого грунта Fi Юниор), которые показали умеренную устойчивость, т.е. были толерантными. На наличие генотипов с полигенной горизонтальной устойчивостью к фузариозному увяданию томата указывали также (Banerjee и др., 1990), в результате оценки 40 линий, сортов и диких разновидностей в условиях искусственного инфекционного фона в теплице (Индия) ими установлено, что 2 образца были имунными, 4 -высокоустойчивыми, 3 - устойчивыми, 3 - умеренно устойчивыми, 15 -восприимчивыми и 13 - высоковосприимчивыми.
Необходимо отметить, что нам в этом эксперименте не удалось установить генетическую природу устойчивости изученных генотипов из-за отсутствия изолятов расы 2. Как известно к расе 1, использованной нами, проявляют устойчивость генотипы как с геном I, так и Ь. По наличию или отсутствию восприимчивых растений в оцениваемых образцах можно судить о состоянии генов устойчивости у родительского растения. Исходя из результатов представленных в таблице 41, можно констатировать, что у 54 устойчивых линий ген устойчивости был в гомозиготном состоянии, у 5-ти потомств, где наблюдалось расщепление, родительские растения являлись гетерозиготами, а отобранные из этих потомств устойчивые растения могут быть доминантными гомозиготами или гетерозиготами. Для идентификации генотипа необходимо потомство каждого отобранного растения вновь инокулировать и оценить, при этом в потомстве гомозиготы расщепления не будет, а в потомстве гетерозиготы будут выщепляться восприимчивые растения (рецессивные гомозиготы) в количестве 25% от инокулированных растений.
Таким образом методы классической селекции - отбора по фенотипу, несмотря на их общепринятость и отработанность обладают, как видим, и существенными недостатками. Во-первых, они требуют наличия всех рас патогена, во-вторых не позволяют в одном поколении разделить доминантные гомозиготы от гетерозигот. Помимо этого при использовании инфекционного фона для успешного развития заболевания требуется соблюдение определенных условий окружающей среды (в случае фузариозного увядания томата - поддержание температуры на уровне 25...28С). Этих недостатков позволяет избежать метод молекулярно-генетических маркеров. С его помощью можно определить как наличие гена устойчивости в генотипе каждого растения, так и его состояние, то есть гомо- или гетерозиготность. При этом нет необходимости в оценке на инфекционном фоне.
