Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 16
1.1. Ботанико-фармакогностическая характеристика двух видов галантуса (подснежника) 16
1.1.1. Характеристика семейства Амариллисовых (Amaryllidaceae) 16
1.1.2. Характеристика рода Галантус, или Подснежник (Galanthus L.) 18
1.1.3. Характеристика подснежника Воронова и подснежника белоснежного 20
1.2. Химический состав метаболома подснежников Воронова и белоснежного 22
1.2.1. Состав и содержание амариллисовых алкалоидов двух видов подснежников 23
1.3. Фармакологическая активность, применение в медицине двух видов подснежников 27
1.4. Биологическая активность, физико-химические свойства, биосинтез амариллисовых алкалоидов двух видов подснежников 33
1.5. Физико-химические методы анализа амариллисовых алкалоидов 39
1.5.1. Тонкослойная хроматография в анализе амариллисовых алкалоидов 39
1.5.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография и газовая хроматография в анализе амариллисовых алкалоидов 42
1.5.3. Спектрофотометрия в анализе амариллисовых алкалоидов 44
1.6. Стандартизация сырья и препаратов подснежников 44
Выводы к главе 1 48
Глава 2. Объекты и методы исследования 49
2.1. Характеристика объектов исследования 49
2.2. Методы анализа, оборудование 49
2.2.1.Определение амариллисовых алкалоидов 51
2.2.2.Определение флавоноидов 53
2.2.3. Определение гидроксикоричных кислот 53
2.2.4. Определение органических кислот 55
2.2.5. Определение аминокислот 56
2.2.6. Определение углеводов 57
2.2.7. Определение элементного состава 58
2.2.8. Определение биологической активности 60
2.3. Реактивы и стандартные образцы 61
2.4. Валидация методов, обработка полученных результатов 62
Глава 3. Макроскопический и микроскопический анализ гомеопатического лекарственного растительного сырья подснежников Воронова и белоснежного 63
3.1. Изучение внешних признаков сырья подснежников 63
3.2. Изучение микроскопических признаков сырья подснежников 66
3.2.1. Микроскопия листьев 66
3.2.2. Микроскопия цветков 67
3.2.3. Микроскопия луковиц 69
3.2.4. Микроскопия корней 72
Выводы к главе 3 74
Глава 4. Фитохимическое исследование гомеопатического лекарственного растительного сырья подснежников 75
4.1. Изучение амариллисовых алкалоидов ГомЛРС подснежников 77
4.1.1. Анализ амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС подснежников качественными реакциями 78
4.1.2. Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ТСХ 79
4.1.3. Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ГХ-МС 81
4.1.4. Количественное определение суммы амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС подснежников методом СФМ 85
4.2. Изучение флавоноидов ГомЛРС подснежников 88
4.3. Изучение гидроксикоричных кислот ГомЛРС подснежников 99
4.4. Изучение органических кислот ГомЛРС подснежников 101
4.5. Изучение аминокислот ГомЛРС подснежников 103
4.6. Изучение углеводов ГомЛРС подснежников 107
4.7. Изучение элементного состава ГомЛРС подснежников 109
Выводы к главе 4 113
Глава 5. Фитохимическое исследование настоек гомеопатических матричных подснежников Воронова и белоснежного 115
5.1. Определение компонентного состава НГМ методом ГХ-МС 115
5.2. Изучение амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников 124
5.2.1. Подтверждение присутствия амариллисовых алкалоидов в НГМ подснежников качественными реакциями 124
5.2.2. Изучение состава амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников методом ТСХ. 125
5.2.3. Изучение состава амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников методом ГХ-МС 126
5.2.4. Количественное определение суммы амариллисовых алкалоидов в НГМ подснежников методом СФМ 128
5.3. Изучение флавоноидов НГМ подснежников 130
5.4. Изучение гидроксикоричных кислот НГМ подснежников 135
5.5. Изучение органических кислот НГМ подснежников 137
5.6. Изучение аминокислот НГМ подснежников 138
5.7. Изучение углеводов НГМ подснежников 142
5.8. Изучение элементного состава НГМ подснежников 144
Выводы к главе 5 146
Глава 6. Разработка и валидация ВЭЖХ-УФ метода количественного определения амариллисовых алкалоидов 148
6.1. Пробоподготовка образцов для анализа 148
6.2. Детектирование амариллисовых алкалоидов в извлечениях из ГомЛРС и НГМ 149
6.3. Поиск оптимальных условий для эффективного хроматографического разделения амариллисовых алкалоидов 151
6.4. Валидационные характеристики методики 154
6.4.1. Химические реактивы и материалы 154
6.4.2. Оборудование и его параметры 155
6.4.3. Условия хроматографического анализа и детектирование 155
6.4.4. Расчет содержания суммы амариллисовых алкалоидов 156
6.4.5. Приготовление стандартных растворов галантамина и ликорина 157
6.4.6. Приготовление образцов контроля качества и калибровочных образцов 158
6.4.7. Параметры пригодности хроматографической системы и метрологические характеристики методики 158
6.4.8. Специфичность 161
6.4.9. Линейность 162
6.4.10. Относительный коэффициент чувствительности детектора 164
6.4.11. Предел обнаружения и количественного определения 164
6.4.12. Правильность 164
6.4.13. Повторяемость и точность 166
6.4.14. Аналитическая область методики 167
6.4.15. Стабильность 167
6.4.16. Устойчивость 168
Выводы к главе 6 169
Глава 7. Разработка показателей качества гомеопатического лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных подснежников Воронова и белоснежного 170
7.1. Определение влажности сырья, органической и минеральной примесей 170
7.2. Определение плотности, сухого остатка НГМ 171
7.3. Определение содержания амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС, НГМ 172
7.4. Определение срока годности НГМ двух видов подснежников 173
Выводы к главе 7 175
Глава 8. Изучение биологической активности настоек гомеопатических матричных подснежников Воронова и белоснежного 176
8.1. Исследование цитотоксических эффектов НГМ подснежников Воронова, белоснежного 176
Выводы к главе 8 181
Общие выводы 182
Практические рекомендации 183
Перспективы дальнейшей разработки темы 183
Список сокращений 184
Литература 186
Приложения 208
Приложение 1. Акт внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России результатов диссертационного исследования. 209
Приложение 2. Направление проектов ФС в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» 210
Приложение 3. Проект ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие – Galanthus woronowii planta tota recens» 211
Приложение 4. Проект ФС «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная» 226
Приложение 5. Проект ФС «Подснежник белоснежный растения целые свежие – Galanthus nivalis planta tota recens» 234
Приложение 6. Проект ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная» 248
- Фармакологическая активность, применение в медицине двух видов подснежников
- Изучение флавоноидов ГомЛРС подснежников
- Изучение флавоноидов НГМ подснежников
- Исследование цитотоксических эффектов НГМ подснежников Воронова, белоснежного
Фармакологическая активность, применение в медицине двух видов подснежников
АА, найденные в растениях семейства Amaryllidaceae и в частности, в подснежниках, постоянно выступали объектами изучения в связи с их чрезвычайно разнообразными фармакологическими свойствами и биологической активностью [158, 183]. В частности, в Европе, мало известно о применении в медицине растений рода Galanthus на раннем этапе. В 1983 г. Plaitakis и Duvoisin предложили одну из гипотез о происхождении таинственного "моли" (магического корня) Гомера, согласно их взглядам, это вполне мог быть подснежник. Гомер в своей эпической греческой поэме «Одиссея» повествует о «моли», как об исцеляющем средстве (дар Гермеса Одиссею). Воспользовавшись моли, Одиссей смог справиться с ядами напитков Цирцеи, обладавшими, по всей видимости, антихолинергическим эффектом, в связи с содержанием в них, по некоторым предположениям, алкалоидов тропана (рис. 1.3.1). Из этого следует, что применение «моли», выступающего противоядием в гомеровской «Одиссее» может являться самым ранним письменным упоминанием подснежника, но весомых доказательств, к сожалению, не имеется [148, 151]. Впрочем, внешний вид подснежника весьма схож с описанием чудодейственной травы в «Одиссее»:
«… Так сказавши, Гермес передал мне целебное средство,
Вырвав его из земли, и природу его объяснил мне;
Корень был черен его, цветы же молочного цвета.
«Моли» зовут его боги. Отрыть нелегко это средство
Смертным мужам. Для богов же - для них невозможного нету.»
В общенародном творчестве можно встретить множественные упоминания о подснежнике. В Англии подснежники пользуются особой популярностью, и относятся к ним с особой любовью. Бытует мнение, что это случилось в связи со старинным английским поверьем: растущие около дома подснежники способны уберегать его жителей от посягательств нечистой силы и злых духов. Но главным образом, подснежники снискали себе славу благодаря своему самому раннему цветению, растения первыми появляются после зимнего периода буквально из-под снега, и, соответственно, тем самым символизируют наступление весны. Подснежники охотно включают в декоративное оформление самых разнообразных клумб в городах, а разведение подснежников одно из самых популярных хобби. Выведено огромное количество сортов, в том числе махровых форм, цена одной луковицы редкого сорта может достигать более 700 фунтов стерлингов. Существует даже специальный праздник, отмечаемый 19 апреля – “The Day of Snowdrop” («День подснежника»), учрежденный с 1984 г. [147].
В академических медико-ботанических работах XVI века (Fuchs, Brunfels и Bock) о подснежниках информация отсутствует, имеется только ссылка на близкий род Leucojum. Следует упомянуть о многозначности термина «подснежник», ввиду того, что нередко «подснежниками» также называют многие другие раннецветущие луковичные растения (пролеска, хионодокса, прострел). В то же самое время, следует отметить и другие близкородственные семейства Amaryllidaceae. Примечательно, что в описаниях немецкого фармакогноста Madaus (1938) нет ни подснежника, ни белоцветника, зато присутствует Narcissus pseudonarcissus, приводится ряд отдельных способов его употребления, которые не имеют прямого отношения к ЦНС, тогда, как Marzell не упоминает их вовсе. В труде «Arzneipflanzen» Кёлера для всех представителей перечисленных родов не указано точные медицинские показания к применению. Таким образом, можно с уверенностью сказать, что подснежники и представители других родов Amaryllidaceae не были популярными в качестве источников лекарственных средств в Европе. Из неподтвержденных данных, относящихся к 50-м гг. прошлого столетия, известно о применении подснежника в качестве неврологического средства. По замечанию одного болгарского фармаколога дикорастущий подснежник применялся в качестве средства для лечения неврологических болей в виде компрессов на лоб из свежих целых растертых растений. Вместе с тем, некоторые из еще более ранних упоминаний о подснежнике указывают на его широкое использование в Восточной Европе (Румыния, Украина, страны Восточного Средиземноморья и Балканского полуострова) [148].
Первые исследования фармакологической активности галантамина проводятся Машковским М.Д. и Кругликовой-Львовой Р.П. в 1951 г. [75]. Ими установлено, что галантамин является высокоэффективным природным антихолинэстеразным агентом [74]. В 1956 г. в своей работе Л. Иванова и Д. Пасков (Болгария) описывают получение галантамина из G. nivalis [58]. С 1958 г. в Болгарии налажено его промышленное производство («Nivalin») [81]. Монография «Нивалин» за авторством Д. Паскова издаётся в Италии. Галантамин представляет собой конкурентный, обратимый, селективный ингибитор ацетилхолинэстеразы (АХЭ) с продолжительным действием [177], субстанция которого в виде гидробромида (г/б) служит для производства лекарственных препаратов под коммерческими наименованиями: Галантамин-Тева (ООО Тева, Израиль), Галантамин Канон (ЗАО «Канонфарма продакшн», Россия), Гальнора СР (АО КРКА, д.д. Ново место, Словения), Нивалин (АО Софарма, Болгария), Реминил (ООО Джонсон энд Джонсон, Италия) и др. [52] для терапии полиомиелита, а также других неврологических болезней [148]. В ГФ СССР X изд. включена ФС 302 «Galanthamini hydrobromidum – Галантамина гидробромид», к лекарственным формам относятся порошок и 0,1, 0,25, 0,5, 1% раствор в ампулах по 1 мл [50]. Для галантамина г/б отмечен несколько более благоприятный профиль фармакологического действия, а также более высокий уровень переносимости при сравнении с другими стандартными АХЭ-ингибиторами, физостигмином (эзерином) или такрином [145]. Г/б галантамина применяется в терапии на определенных этапах болезни Альцгеймера благодаря выраженной АХЭ-ингибирующей активности. На докладе, представленном в ходе заседания Международной ассоциации по борьбе с болезнью Альцгеймера (ADI) было озвучено, что к 2050 году может значительно возрасти число пациентов с деменцией [116], что, действительно, подтверждает важность дальнейшего клинического применения галантамина для этих целей. Можно заключить, что АА галантамин стал ещё одним лекарственным средством, занимающим значимое место в фармации и медицине.
Ликорин (ликорина гидрохлорид) – один из мощных стимуляторов активности секреции бронхиальных желез, обладает противовоспалительным, жаропонижающим, анальгезирующим действием, в малых дозах проявляет отхаркивающее действие. По основному фармакологическому эффекту ликорин подобен апоморфину, оказывает аналогичное рвотное действие. В меньших дозах используется как отхаркивающее средство. ЛП использовался в качестве отхаркивающего в терапии острых воспалительных, а также хронических процессов, происходящих в бронхах и легких. Для взрослых доза внутрь составляет 0,1 - 0,2 мг, принимать следует 3 - 4 раза в день. Назначение в больших дозах ликорина не рекомендуется, поскольку возможна тошнота и рвота [114, 173].
Помимо официальной медицины своё место подснежники нашли также и в альтернативной – гомеопатии, которая развивается уже несколько веков и в последнее время остается достаточно популярной [45, 63, 110]. Этот метод лечения около 200 лет известен в России [79]. Предложен G. nivalis был впервые Dr. A. Whiting Vancouver, на этот вид фармакопейная статья входит в “The Homopathic Pharmacopia of the United States” (Гомеопатическая фармакопея США) [152], в соответствии с Приказом Министерства Здравоохранения и Медицинской Промышленности № 335 в РФ G. woronowii разрешён для приготовления ГомЛС [82]. Ряд ГомЛС на основе подснежников представлен в таблице 1.3.1.
Изучение флавоноидов ГомЛРС подснежников
В настоящий момент о флавоноидах семейства Amaryllidaceae и рода Galanthus известно мало. В семействе наиболее часто встречаются два агликона – кверцетин и кемпферол, а также их гликозиды [146, 157]. Наряду с «обычными», характерными для абсолютного большинства растений гликозидами кверцетина (рутин, изокверцитрин, авикулярин, гиперозид) и кемпферола (астрагалин), среди этих растений встречаются более сложные по своей структуре гликозиды – софорозиды кемпферола (3-софорозидо-7-глюкозид, 3-софорозид). У некоторых представителей семейства обнаружены также ксилозиды кемпферола, гликозиды изорамнетина (3-арабинозидо-7-глюкозид, 3- и 5-глюкозиды) [64]. Среди других классов флавоноидов у представителей семейства обнаружены халконы, флавоны, изофлавоноиды, хромоны [168, 188], С-глюкозиды флаванонов (6,8-ди-C глюкозилнарингенин) [156]. В подснежнике кавказском обнаружены гликозиды кверцетина – гиперозид и рутин [179]. Флавоноидный состав G. woronowii и G. nivalis в доступной литературе не описан. На основании этого была поставлена задача провести идентификацию и определить содержание данной группы БАС в ГомЛРС G. woronowii и G. nivalis.
На ВЭЖХ-хроматограмме G. woronowii наблюдается 5 интенсивных пиков (рис. 4.2.1).
Пик с RT=8,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 464,6 ([M+Na]+ m/z 487, рис. 4.2. 2), а в режиме NS МИ m/z 462,6 (рис. 4.2.5). Для этого пика характерна структура гиперозида (таб. 4.2.2, №1).
Пик с RT=5,8 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Na]+ m/z 649 (рис. 4.2. 3), а в режиме NS m/z 625 (рис. 4.2.5). Предположительно, данный пик – кверцетин-3-галактозил-(16)-галактозид или кверцетин-O-софорозид (таб. 4.2. 2, №2).
Пик фрагмента МИ с m/z 317 в режиме PS соответствует 2-м соединениям с RT=6,5 и RT=9,9 мин. Предположительно, компоненты – производные изорамнетина или рамнетина. Пик с RT=6,5 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 641 ([M+Na]+ m/z 663, рис. 4.2. 3), а в режиме NS m/z 639 (рис. 4.2.5). В литературе для этого пика описывается несколько возможных структур – например, изорамнетин-3-галактозил-(16)-галактозид софорозид (таб. 4.2.2, №3).
Пик с RT=9,9 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 479 ([M+Na]+ 501, рис. 4.2.3), а в режиме NS m/z 477 (рис. 4.2.5). Для данного пика в литературе отсутствуют структурные формулы, но принимая во внимание предложенную выше структуру, можно сделать предположение о следующей структуре– 3-О--D-галактозид изорамнетина (таб. 4.2.2, №4).
МИ m/z 296 в режиме PS обнаружен для пика с RT=10,9 мин (рис. 4.2.4). В режиме NS ионизация для этого вещества отсутствует (рис. 4.2.5).
На ВЭЖХ-хроматограмме извлечения ГомЛРС G. nivalis наблюдается 1 интенсивный пик и еще 1 пик, интенсивность которого значительно меньше (рис. 4.2.6).
В режиме PS наблюдается МИ m/z 303 у пика с RT=5,7 мин (рис. 4.2.7). Предположительно, что этот компонент – производное кверцетина.
Пик с RT=5,7 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z 626,7, а в режиме NS m/z 624,7. Возможные структуры для этого пика – кверцетин-3-галактозил-(16)-галактозид или кверцетин-3-O-софорозид (таб. 4.2. 3, №1).
Содержание кверцетина в ГомЛРС G. woronowii составило 0,606±0,008%, а в ГомЛРС G. nivalis – 0,252±0,009%; содержание изорамнетина в ГомЛРС G. woronowii – 0,345±0,005 %, кемпферола в ГомЛРС G. nivalis – 0,172±0,006%.
ВЭЖХ-хроматограммы представлены на рис. 4.2.10 и 4.2.11. Метрологические характеристики методики представлены в таб. 4.2.4.
Результаты ТСХ-анализа флавоноидов ГомЛРС G. woronowii и G. nivalis представлены в Приложениях 3, 5 раздел «Подлинность; 2. Тонкослойная хроматография (флавоноиды)».
Изучение флавоноидов НГМ подснежников
В режиме PS МИ m/z = 303 наблюдается у 2-х пиков с RT=7,1 и RT=13.5 мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компоненты – производные кверцетина.
Пик с RT=7,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 464,6 ([M+Na]+ m/z = 487) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z = 462.6 (рис. 5.3.3). Структура гиперозида (I) может быть предположена для этого пика (таб. 5.3.1).
Пик с RT=13,5 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 303 (рис. 5.3.2), а в режиме NS 301 (рис. 5.3.3). Данный пик соответствует кверцетину (II) (таб. 5.3.1).
МИ m/z = 317 в режиме PS наблюдается для 3-х оставшихся пиков с RT=4.1, 9.4 и 17.4 мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компоненты – производные изорамнетина (V) или рамнетина (VI) (таб. 5.3.1).
Пик с RT=4,1 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 641 ([М+Na]+ m/z = 663) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z = 639 (рис. 5.3.3). В литературе отсутствуют подходящие структуры для этого пика, но можно предложить одну из следующих возможных структур – изорамнетин-О-софорозид (III) (таб. 5.3.1).
Пик с RT=9,4 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 479 ([М+Na]+ m/z = 501) (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z =477 (рис. 5.3.3). В литературе отсутствуют подходящие структуры для этого пика, но исходя из структуры, предложенной выше, можно предложить одну из следующих возможных структур – изорамнетин-3-О-галактозида (IV) (таб. 5.3.1).
Пик с RT=17,4 мин в режиме PS соответствует МИ [М+Н] m/z = 317 (рис. 5.3.2), а в режиме NS m/z = 315 (рис. 5.3.3). Предположительно, данный пик – изорамнетин (V) или рамнетин (VI) (таб. 5.3.1).
При анализе НГМ G. nivalis получена ВЭЖХ-хроматограмма, представленная на рис. 5.3.1, наблюдается 1 интенсивный пик и еще 1 пик, интенсивность которого значительно меньше.
В режиме PS молекулярный ион m/z = 303 наблюдается у пика с RT=5,7 мин (рис. 5.3.4). Предположительно, компонент – производное кверцетина.
Пик с RT=5,7 мин имеет в режиме PS МИ [М+Н] m/z=626,6 (рис. 5.3.4), а в режиме NS МИ [M+H] m/z=624,7 (рис. 5.3.5). Одна из возможных структур для данного пика – кверцетин-3-О-софорозид (VII), кверцетин-3-галактозил-(16)-галактозид (VIII) (таб. 5.3.1).
МИ m/z = 287 в режиме PS отмечен для 1-го оставшегося пика с RT=6,83 мин (рис. 5.3.1). Предположительно, компонент – производное кемпферола.
Пик с RT=6,85 мин имеет в режиме PS МИ [M+Na]+ m/z = 633,1 (рис. 5.3.4), а в режиме NS [M+Na]+ m/z = 609 (рис. 5.3.5). Одна из возможных структур для данного пика – кемпферол-3-О-галактозил-(16)-галактозид (IX) или кемпферол-3-О-софорозид (софорафлавонолозид) (X) (таб. 5.3.1).
Результаты ТСХ-анализа флавоноидов НГМ G. woronowii и G. nivalis представлены в Приложениях 4, 6 раздел «Подлинность; 2. ТСХ (флавоноиды)».
Содержание кверцетина в НГМ G.woronowii составило 0,075±0,0047%, а в НГМ G. nivalis – 0,029±0,0026%; содержание изорамнетина в НГМ G.woronowii – 0,043±0,0028 %, кемпферола в НГМ G. nivalis – 0,011±0,0009%. Метрологические характеристики методики представлены в таб. 5.3.2.
Исследование цитотоксических эффектов НГМ подснежников Воронова, белоснежного
Результаты исследования цитотоксических эффектов НГМ подснежников Воронова и белоснежного представлены в таблице 8.1.1.
На рис. 8.1.1-8.1.4 и таб. 8.1.1-8.1.2 представлены результаты исследования цитотоксических эффектов двух видов подснежников на культурах клеток HeLa и Fet MSC: чем ниже высота столбика гистограммы, тем более сильный цитотоксический эффект оказывает образец настойки или её разведение.
Влияние СО галантамина и ликорина на жизнеспособность клеток. Исследованные стандарты АА в концентрациях 1 и 0,5 мг/мл оказывают влияние на жизнеспособность клеток линий HeLa и Fet MSC. Клетки HeLa и Fet MSC более чувствительны к ликорину по отношению к галантамину. Галантамин практически не оказывает цитотоксических эффектов на клетки линии Fet MSC. Цитотоксические эффекты ликорина несколько более выражены на культуре опухолевых клеток линии HeLa, нежели на линии нормальных клеток Fet MSC.
Установлено, что наиболее выраженной цитотоксической активностью обладают сами настойки и их гомеопатические разведения D1, D2, С1 G. woronowii и G. nivalis. Таким образом, изученные образцы НГМ и разведений гомеопатических двух видов подснежников оказывают цитотоксические эффекты на опухолевые клетки HeLa и нормальные клетки Fet MSC. Цитостатические эффекты более выражены у НГМ и разведений подснежника белоснежного, цитостатическая активность подснежника Воронова несколько ниже. На основании полученных экспериментальных данных можно сделать заключение о том, что биологическая активность двух видов подснежников различается за счёт различного компонентного состава алкалоидов.