Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
Глава 2. Материалы и методы 37
Глава 3. Результаты собственных исследований 42
3.1. Оптимизация условий хроматографического анализа этинилэстрадиола, гестодена, левоноргестрела, ципротерона ацетата 42
3.2. Разработка методики количественного определения компонентов комбинированных пероральных контрацептивов методом ВЭЖХ 54
3.3. Оценка качества промышленных КПК по содержанию этинилэстрадиола, гестодена, левоноргестрела и ципротерона ацетата 74
3.4. Изучение стабильности КПК при хранении 84
3.5. Сравнительная оценка препаратов Триквилар и Три-Регол по показателям «растворение» и «однородность дозирования» 87
Выводы 107
Список литературы
- Разработка методики количественного определения компонентов комбинированных пероральных контрацептивов методом ВЭЖХ
- Оценка качества промышленных КПК по содержанию этинилэстрадиола, гестодена, левоноргестрела и ципротерона ацетата
- Изучение стабильности КПК при хранении
- Сравнительная оценка препаратов Триквилар и Три-Регол по показателям «растворение» и «однородность дозирования»
Введение к работе
Актуальность темы. В современных условиях проблема
обеспечения качества лекарственных средств на международном,
региональном и национальном уровне приобрела особое значение (ICH.2003,
Федеральный закон РФ «Об обращении лекарственных средств, стратегия»).
Принятый в России закон «О техническом регулировании (2003 г.) направлен
на регулирование отношений, формирующихся в процессе исполнения
требований к продукции, процессам производства, хранения,
транспортировки и реализации. Все это в полной мере относится к области
стандартизации лекарственных средств, а также - к оценке соответствия
продукции.
Внимание к вопросам стандартизации и контроля качества
лекарственных средств в России обусловлено рядом причин, в том числе:
общим увеличением числа зарегистрированных лекарственных средств,
среди которых подавляющее большинство – воспроизведенные
(генерические) препараты; введением в медицинскую практику
высокоактивных веществ природного и синтетического происхождения,
применяемых в виде низкодозированных препаратов.
К их числу относятся гормональные контрацептивные средства,
представляющие собой комбинированные препараты, содержащие эстроген и
прогестаген. В качестве эстрогенного компонента используется главным
образом этинилэстрадиол (ЭЭ) в дозировке от 0,020 до 0,035 мг.
Прогестагенный компонент представлен производными 19-нортестостерона
(левоноргестрел, гестоден), 17а-гидроксипрогестерона, реже спиронолактона
с содержанием в одной таблетке 0,50-2,0 мг.
Степень разработанности темы исследования. Описанные в
литературе методы оценки качества и стандартизации комбинированных
пероральных контрацептивов (КПК) с различными гестагенами не
унифицированы, методики количественного определения действующих
веществ не позволяют с требуемой правильностью и воспроизводимостью
контролировать содержание действующих веществ. Присутствие на российском рынке преимущественно генерических препаратов, которые могут отличаться от оригинального составом вспомогательных веществ, технологией получения, требует обоснованного решения вопроса об их фармацевтической эквивалентности.
Цель исследования - разработка унифицированных методов контроля качества и стандартизации оригинального и генерических пероральных контрацептивов, содержащих этинилэстрадиол.
Задачи, решаемые для достижения поставленной цели
-
Провести информационно-аналитическое исследование по проблеме стандартизации лекарственных средств, содержащих ЭЭ и гестагенные компоненты.
-
Установить оптимальные условия определения ЭЭ, гестодена (Г), левоноргестрела (ЛН) и ципротерона ацетата (ЦА) методом ВЭЖХ.
-
Разработать унифицированную методику количественного определения действующих веществ в КПК с применением ВЭЖХ и провести ее валидацию.
-
Дать сравнительную оценку оригинального лекарственного средства Триквилар и воспроизведенного Три-Регол по показателю «Однородность дозирования действующих веществ».
-
По результатам испытания теста «Растворение» получить профили растворения таблеток Триквилар и Три-Регол трех типов, оценить их сопоставимость с помощью коэффициентов различия и подобия.
-
Доказать пригодность разработанной методики для контроля стабильность КПК при хранении.
Поставленные задачи решались путем критического анализа и
обобщения данных литературы и результатов собственных
экспериментальных исследований.
Научная новизна результатов исследования. Определены
оптимальные хроматографические условия и разработана унифицированная,
селективная и воспроизводимая методика определения ЭЭ и гестагенных компонентов КПК с применением метода ВЭЖХ. Доказана применимость данной методики для контроля качества и стандартизации промышленных препаратов КПК.
В условиях теста «Растворение» проведено сравнительное изучение
высвобождения ЭЭ и ЛН из таблеток оригинального препарата Триквилар и
генерического Три-Регол. На основании полученных результатов построены
профили растворения. Результаты сравнительной оценки полученных
профилей растворения таблеток I, II, III типов обоих препаратов позволяют считать Три-Регол фармацевтически эквивалентным препарату сравнения Триквилар.
Теоретическая значимость работы. Обоснованы условия
хроматографического определения ЭЭ, ЛН, Г и ЦА на основании расчета
хроматографических характеристик: коэффициента емкости, числа
теоретических тарелок, разрешения, фактора асимметрии пика. Рассчитаны коэффициенты подобия и различия полученных профилей растворения таблеток Триквилар и Три-Регол I, II, III типов по ЭЭ и ЛН.
Практическая значимость результатов исследования.
Унифицированная методика количественного определения ЭЭ, ЛН, ЦА и Г в
препаратах КПК с применением ВЭЖХ апробирована в ФГБУ «Научный
центр экспертизы средств медицинского применения» и используется при
аналитическом контроле этих лекарственных средств, а также с целью
выявления фальсифицированных препаратов.
Получены профили растворения таблетированных форм, которые
целесообразно использовать при выборочном контроле лекарственных
средств, а также с целью подтверждения постоянства их состава и
технологии производства в течение всего срока регистрации на территории
Российской Федерации.
Данные о высвобождении ЭЭ и ЛН из препаратов КПК
рекомендуются для использования в исследованиях по оценке
эквивалентности препаратам сравнения других генерических лекарственных средств, содержащих ЭЭ и ЛН.
Методология и методы исследования. Теоретическую и
методологическую основу исследований составляли современные подходы к
анализу природных и полусинтетических стероидов, включая 17-этинил-17-
окси-19-норстероиды и этинилэстрадиол. В работе использованы
методические рекомендации Международной конференции по гармонизации
требований к регистрации лекарств (ICH) по оценке аналитических методик с
помощью валидационных характеристик, а также положения
фармакопейного анализа, развитые в фармакопеях ведущих стран мира.
Методология заключалась в выборе оптимальных
хроматографических условий для количественного определения ЭЭ, ЛН, Г и ЦА в КПК для последующего решения задач по унификации методов стандартизации, сравнительной оценки оригинального и воспроизведенного препаратов по показателям «Растворение» и «Однородность дозирования действующих веществ».
Основные положения, выносимые на защиту:
- оптимальные параметры ВЭЖХ для одновременного определения ЭЭ,
ЛН, ЦА и Г;
результаты валидации методики количественного определения ЭЭ и гестагенных компонентов в препаратах КПК;
сравнительная оценка высвобождения ЭЭ и ЛН из оригинального препарата Триквилар и генерического Три-Регол и полученных профилей растворения таблеток I, II, III типов с помощью коэффициентов подобия и различия.
Степень достоверности результатов. Достоверность результатов
обеспечена использованием современного сертифицированного
оборудования, статистической обработкой результатов количественных определений, валидацией методики количественного определения ЭЭ, ЛН, Г
и ЦА в модельных смесях; апробацией предложенных методов контроля КПК на промышленных образцах препаратов.
Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены: на научно-практической конференции «Современные методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств» (Москва, 2006 г.); на XII, XIV и XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006, 2007, 2008); на симпозиуме «Современные методы анализа лекарственных средств», являющегося частью 7-го Центрально-Европейского симпозиума по фармацевтическим технологиям и системам биодоставки (Любляна, 2008 г.); на межкафедральной конференции Фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 2014 г.).
Личный вклад автора. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки целей и задач, их экспериментальной реализации до аналитической и статистической обработки, научного обоснования, обобщения полученных результатов и рекомендаций по их внедрению. В публикациях, выполненных в соавторстве, автором лично проведено научное обоснование, анализ и обработка полученных данных.
Соответствие диссертации паспорту научной работы. Научные
положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 –
«фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного
исследования соответствуют области исследования специальности,
конкретно пунктам 2 и 3 паспорта «фармацевтическая химия, фармакогнозия».
Публикации. По теме диссертации опубликованы 10 работ, из них 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Связь задач исследования с проблемным планом
фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках
научно-исследовательской программы ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.
Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (номер государственной регистрации 01.2.006 06352). Тема работы включена в план научных исследований кафедры фармацевтической и токсикологической химии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова «Основные направления создания и оценки качества лекарственных средств».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа
изложена на 120 страницах машинописного текста, состоит из введения,
обзора литературы, включает раздел «Материалы и методы исследования»,
главу с результатами собственных исследований, общих выводов и списка
литературы. Диссертация включает 41 таблицу и 24 рисунка.
Библиографический список содержит 133 источника, из низ 82 - на
иностранных языках.
Разработка методики количественного определения компонентов комбинированных пероральных контрацептивов методом ВЭЖХ
Г. Б. Голубицкий, В.М. Иванов для количественного определения этинилэстрадиола и левоноргестрела в таблетках использовали метод ВЭЖХ на хроматографе «Миллихром»; условия хроматографирования: колонка - «SGX-RP-S-ODS» (8 мкм, 120 х 2,0 мм); подвижная фаза - ацетонитрил:вода (3:2); скорость потока - 0,15 мл/мин; длина волны - 220 нм [13].
Wilson с соавторами [124] определяли концентрацию этинилэстрадиола в крови методом ВЭЖХ в сочетании с масс-спектрометрией. Этинилэстрадиол экстрагировали из плазмы крови метилбутиловым эфиром, и реэкстрагировали в гексан. Хроматографические условия: колонка Luna Cig (5 мкм, 50 х 2 мм), ПФ: вода и ацетонитрил с 1% муравьиной кислотой в соотношении 20:80. Это исследование может быть использовано в определении биоэквивалентности препарата и взаимосвязь лекарство-лекарство в биологических объектах.
Durga Prasad с соавторами количественное определение этинилэстрадиола и левоноргестрела в таблетках проводили методом ВЭЖХ , используя колонку -« Qualisilgold-C 18» (5 мкм, 250 х 4,6 мм); подвижная фаза - ацетонитрил:вода (80:20); скорость потока - 1,0 мл/мин; длина волны - 225 нм [67].
Maria Ines Rocha Miritello, Santoro с соавторами [133] описали метод количественного определения этинилэстрадиола, левоноргестрела и гестодена в комбинированных пероральных контрацептивах. Содержание этинилэстрадиола и левоноргестрела было проанализировано на колонке Lichrospher 100 RP-8 (5 мкм, 125 х 4 мм), ПФ: ацетонитрил вода в соотношении 60:40. Определение этинилэстрадиола и гестодена проводили на той же колонке, ПФ: смесь ацетонитрил и вода (50:50), доведенная до рН=7,5 0,02 М раствором аммиака. Объем вводимой пробы для двух определений - 0,8 мл/мин, детектирование при 215 нм. Все анализы были проведены при комнатной температуре.
Исследователи из Нагарджунского университета, Индии [100] описали количественное определение этинилэстрадиола и дезогестрела в таблетках методом ВЭЖХ. Содержание этинилэстрадиола и дезогестрела было проанализировано на приборе Waters Model Alliance с использованием УФ-детектора при длине волны 225 нм и колонки Zorbax SB - С 18, (4,6 х 250 мм, размер частиц 5 мкм), с использованием градиентного режима.
Prabhakar В, Deshpande S.G.[104] одновременно определяли этинилэстрадиол и левоноргестрел в трансдермальной системе методом ВЭЖХ, используя прибор Waters с УФ-детектором при длине волны 275 нм и колонкой WATERS С18 (250 х 4.6 мм,размером частиц 5 мкм), ПФ: смесь ацетонитрил:ЮмМ кислоты муравьиной (70:30); скорость потока- 1,0 мл/мин.
Анализ данных литературы[13,67,88,98,100,104,117,120,121,124,129,134] позволяет заключить, что метод ВЭЖХ является универсальным и позволяет контролировать не только количественное содержание вещества и посторонние примеси, но и определять вещества в биологических средах. Вместе с тем, условия анализа требуют ряда уточнений и модификаций, что и являлось предметом нашего исследования.
Оценка воспроизведенных лекарственных средств (дженериков). КПК, зарегистрированные на территории РФ, представляют собой преимущественно генерические лекарственные средства[19]. Они могут отличаться между собой и от оригинального препарата своими эффективностью и безопасностью[2,49,52,84-87,108,111,115,123,126,127]. Это обусловлено различиями технологии производства, вспомогательными веществами, упаковкой и хранением. Под влиянием этих факторов эффективностью таких препаратов может значительно варьироваться.
Для обоснованного заключения о качестве, эффективности и безопасности генеритеческих лекарственных средств, проводятся исследования биоэквивалентности[6-9,15,28,37,78,83,113]. Согласно Методическим Указаниям МЗиСР «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств» (2008 г.) два лекарственных препарата считаются биоэквивалентными, если они обеспечивают одинаковую биодоступность действующего вещества.
Биоэквивалентность определяют путем проведения фармакокинетических исследований на здоровых добровольцах, что является длительным и дорогостоящим исследованием[40,43,44,47,56,75]. Менее трудоемким способом для оценки эквивалентности генерических лекарственных средств может являться изучение сравнительной кинетики растворения в условиях in vitro[28,51,55,62,63,90,96,106,107,122,128]. В России данное исследование применяется в дополнение к исследованиями биоэквивалентности при оценке эффективности и безопасности воспроиведенных препаратов, а также для сравнения эквивалентности различных дозировок лекарственного средства [МУ МЗиСР РФ, 2008].
Согласно нормативным документам ВОЗ FDA изучение сравнительной кинетики растворения для некоторых генерических лекарственных средств может заменять исследования биоэквивалентности в условиях in vivo при их государственной регистрации[35,36,69,102,103]. Для данной цели создана процедура изучения сравнительной кинетики растворения «биовейвер»[28,51], которая базируется на био фармацевтической классификационной системе [FDA, 2001; ВОЗ, 2006]. Использование подобной процедуры для некоторых генерических лекарственных средств позволяет сделать оценку их эквивалентности с оригинальным препаратом менее длительной и трудоемкой.
Статистические методы используются[77], когда необходимо оценить разницу между средними значениями параллельных определений высвобождения лекарственного вещества двух выборок в определенной точке времени растворения (растворение за фиксированный промежуток времени - ANOVA или t-student test) или в пределах диапазона временных интервалов (MANOVA). 2) Методы, зависящие от модели (модель-зависимые методы), такие как квадратичная, логическая или модель Гомперца. Эти методы не нашли широкого применения в практике. 3) Методы, не зависящие от модели (модель-независимые) - Однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) - Многофакторный дисперсионный анализ (MANOVA). Методы, не зависящие от модели, могут быть далее дифференцированы как «испытания отношения» и «попарные процедуры». Попарные процедуры включают «коэффициент различия» (fi) и «коэффициент подобия» (f2). Коэффициент различия отражает процент ошибки между двумя кривыми по всем точкам времени и рассчитывается по формуле [78]:
Оценка качества промышленных КПК по содержанию этинилэстрадиола, гестодена, левоноргестрела и ципротерона ацетата
Препарат «Три-регол, драже» представляет собой круглые, двояковыпуклые таблетки трёх цветов: 1) розового; 2) белого; 3) темно-желтого. Препарат зарегистрирован в РФ в качестве лекарственного средства, регистрационный номер
Статистическая обработка результатов количественных определений проводили с помощью пакета Microsoft Office Excel 2007. Хроматографические характеристики получены с использованием программного обеспечения ChemStation для LC 3D, версия. A. 10.02 [1757]. Расчет валидационных характеристик методик проводили с учетом рекомендации ICH.
Для оптимизации условий хроматографического определения эстрогенного и прогестагенных компонентов КГЖ изучено их хроматографическое поведение на колонках с различными сорбентами, исследовано влияние состава подвижной фазы (ПФ) на разделение действующих веществ. На основании полученных данных установлены оптимальные условия хроматографического определения ЭЭ, Г, НА и ЛН с целью разработки методики их определения в таблетках.
На основании информационно-аналитического исследований установлено, что для разделения изучаемых соединений рекомендован сорбент С18 (октадецилсиликагель), подвижные фазы, включающие как правило, ацетонитрил, воду и метанол в различных соотношениях. Наряду с этим нами изучено хроматографическое поведение данных веществ на колонках Nova-Pak С18 150 х 4,6 мм, 4 мкм; Luna С 18(2) 150 х 4,6мм, 5мкм; Hypersil BDS-C18, 150 х 4,6мм, 5мкм; Luna С8(2)150 х 4,6мм, 5мкм; Luna Phenyl-Hexyl 150 х 4,6 мм, 5 мкм. Хроматографировали раствор смеси стандартных образцов.
Работу проводили с использованием хроматографических комплексов "Agilent" 1100 (США), оснащенных УФ детектором с переменной длиной волны. Выбор аналитической длины волны для детектирования основывался на УФ-спектрах поглощения ЭЭ и гестагенных компонентов КГЖ. В качестве аналитической была выбрана длина волны 215 нм.
Объемная скорость подвижной фазы составляла 1,0 мл/мин. Исходный раствор стандартного образца готовили растворением точной навески вещества в смеси растворителя: ацетонитрил-метанол-вода в соотношении (3:2:5). Рабочие растворы готовили разбавлением исходных тем же растворителем.
В качестве подвижных фаз использовали смеси ацетонитрила и воды в соотношениях: 5:5; 4:6; 6:4, а также - ацетонитрила, метанола и воды в соотношениях: 3:2:5; 4:4:2. По результатам хроматографирования растворов стандартных образцов лекарственных веществ в различных подвижных фазах рассчитывали следующие хроматографические характеристики: коэффициенты емкости (К ), число теоретических тарелок (N), фактор асимметрии пика (Т), разрешение относительно ЭЭ (R) (таблица 8).
Данные, представленные в таблице 8, показывают, что подвижные фазы 1-4 позволяют получить сопоставимые хроматографические характеристики для колонок I и II: К более 1,85; N - от 6405 до 12637, R между ЭЭ и Г - от 3,14 до 6,06, что доказывает их приемлемость для разделения исследуемых веществ. Для колонки III разрешение между ЭЭ и Г составляет менее 3. Для колонок IV и V фактор асимметрии пиков во всех используемых ПФ превышал значения этой характеристики, рассчитанных для других колонок.
По зарубежным фармакопеям для количественного определения ЭЭ, ЛН рекомендована смесь ацетонитрила и воды в различных соотношениях. Полученные данные показывают, что на разделение ЭЭ и ЛН состав ПФ существенное влияние не оказывает, так как разрешение между ЭЭ и ЛН достаточно большое. Однако для смеси ЭЭ и Г предпочтительнее использовать в качестве ПФ смесь ацетонитрил-метанол-вода в соотношении 3:2:5 соответственно, так как на хроматограмме отмечается четкое разделение анализируемых веществ и разрешение между пиками ЭЭ и Г больше, чем при использовании других ПФ.
Для дальнейшей работы мы использовали колонку Nova-Pak С18, 150 х 4,6 мм, 4 мкм, на которой удалось сократить времена удерживания ЭЭ, Г, ЛН и НА и добиться их хорошего разделения. Пики симметричны, колонка обладает достаточной эффективностью в отношении анализируемых соединений. При хроматографировании стандартных образцов ЭЭ, Г, ЛН и ЦА на колонке Nova-Pak С18 с использованием элюентов, содержащих ацетонитрил, метанол и воду в соотношении (3:2:5 соответственно), фактор асимметрии пиков ЭЭ, Г, ЛН и ЦА имел значение близкое к 1,0. Использование смеси ацетонитрила, метанола и воды является предпочтительным при определении ЭЭ, Г, ЛН и ЦА в составе твердых дозированных форм с учетом их растворимости.
Изучение стабильности КПК при хранении
Установленные нами условия хроматографического определения действующих веществ были использованы при разработке методики их определения в таблетках ЮЖ. Методика количественного определения ЭЭ и ЦА в препарате Диане-35 Приготовление раствора испытуемого образца 10 драже (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл подвижной фазы. Мерную колбу закрывали пробкой и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин. Полученную дисперсию тщательно взбалтывали, после термостатирования при комнатной температуре переносили в центрифужную пробирку и центрифугировали в течение 10 мин при 5000 об/мин. Прозрачный надосадочный раствор использовали для определения, (концентрация этинилэстрадиола около 7 мкг/мл; ципротерона ацетата около 400 мкг/мл). Приготовление стандартного раствора Около 3,5 мг стандартного образца этинилэстрадиола (точная навеска) и 200,0 мг стандартного образца ципротерона ацетата (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в подвижной фазе, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 5 мл, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали, (концентрация этинилэстрадиола 7 мкг/мл; ципротерона ацетата 400 мкг/мл).
Последовательно хроматографировали по 20 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца в условиях разработанной методики. Содержание ЭЭ и ЦА (Х,%) в драже рассчитывали по формуле:
Где Аисп - площадь пика ЭЭ или ЦА на хроматограмме испытуемого раствора; Аст - площадь пика ЭЭ или ЦА на хроматограмме стандартного раствора; Сст - концентрация ЭЭ или ЦА в стандартном растворе, мг/мл; Сиш - концентрация ЭЭ или ЦА в испытуемом растворе, мг/мл;
10 драже (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл подвижной фазы. Мерную колбу закрывали пробкой и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин. Полученную дисперсию тщательно взбалтывали, после термостатирования при комнатной температуре переносили в центрифужную пробирку и центрифугировали в течение 10 мин при 5000 об/мин. Прозрачный надосадочный раствор использовали для определения, (концентрация этинилэстрадиола около 6 мкг/мл; левоноргестрела около 30 мкг/мл). Приготовление стандартного раствора
Около 3,0 мг стандартного образца этинилэстрадиола (точная навеска) и 15,0 мг стандартного образца левоноргестрела (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в подвижной фазе, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 5 мл, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали (концентрация этинилэстрадиола 6 мкг/мл; левоноргестрела 30 мкг/мл).
Последовательно хроматографировали по 20 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца. 10 драже (точная навеска) помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл подвижной фазы. Мерную колбу закрывали пробкой и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин. Полученную дисперсию тщательно взбалтывали, после термостатирования при комнатной температуре переносили в центрифужную пробирку и центрифугировали в течение 10 мин при 5000 об/мин. Прозрачный надосадочный раствор использовали для определения, (концентрация этинилэстрадиола около 6 мкг/мл; гестодена около 15 мкг/мл).
Приготовление стандартного раствора Около 3,0 мг стандартного образца этинилэстрадиола (точная навеска) и 7,5 мг стандартного образца гестодена (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в подвижной фазе, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 5 мл, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали, (концентрация этинилэстрадиола 6 мкг/мл; гестодена 15 мкг/мл).
Нами установлено, что содержание ЭЭ и Г снижается от 99,8% и 99,7% (на момент выпуска) до 97,3% и 98,1% соответственно (по истечении срока годности), при этом оно укладывается в регламентируемые нормы, что подтверждает соответствие качества препарата Фемоден по содержанию действующих веществ нормативным требованиям. Таблица 27. Результаты изучения стабильности препарата «Микрогинон».
Сравнительная оценка препаратов Триквилар и Три-Регол по показателям «растворение» и «однородность дозирования»
КПК относятся к микро дозированным лекарственным средствам. Поэтому для обеспечения точности (однородности) дозирования и кинетики высвобождения из пероральных таблетированных форм требуется применение современных технологий на разных этапах их изготовления. Эти этапы включают энергозатратные и материалозатратные технологии, что, к сожалению, не всегда экономически выгодно. Однако при выходе на рынок генерических препаратов, их производители в качестве преимуществ указывают на их более низкую стоимость, не сообщая порой возможные отличия с оригинальными препаратами по фармацевтическим свойствам (например, однородности дозирования или скорости и полноте растворения).
При этом рекомендуется определять профиль растворения (т.е. несколько точек), а не одну точку во времени, как предписывается нормативной документацией. В качестве препарата сравнения обычно используют оригинальный препарат фирмы-разработчика или (реже) дженерик, который был зарегистрирован первым.
В настоящее время для сравнения профилей растворения используется достаточно широкий диапазон математических методов. К числу наиболее употребительных относятся попарные процедуры. Они включают «коэффициент различия» (f\) и «коэффициент подобия» (f2). Коэффициент различия отражает процент ошибки между двумя кривыми по всем точкам времени. Коэффициент различия равен нулю, если профили испытуемого и стандартного препарата идентичны. По мере увеличения несходства между двумя профилями растворения значение коэффициента различия возрастает.
Коэффициент подобия - это величина, представляющая собой логарифмическое преобразование значения суммы квадратов ошибок. Значения коэффициента подобия находятся в интервале от 0 до 100, по мере увеличения несходства кривых профилей растворения значение коэффициента подобия приближается к 0. Если его значение равняется 100, то испытуемый и стандартный профили идентичны.
Профили растворения принято считать подобными, если значение fi находится в пределах диапазона от 0 до 15, и значение /? находится в пределах диапазона от 50 до 100.
В последнее время роль показателя «Растворение» значительно возросла как для характеристики качества твердых дозированных лекарственных форм, так и для сравнительной оценки высвобождения одноименных лекарственных препаратов, изготовленных различными производителями.
Нами проведена сравнительная оценка КПК, содержащих этинилэстрадиол и левоноргестрел, оригинального и воспроизведенного препаратов по тесту «Растворение».
Оригинальный препарат Триквилар и воспроизведенный препарат Три-Регол, относятся к числу трехфазных контрацептивов, содержащих 3 типа таблеток с различными дозировками действующих веществ. Для исследования использовали таблетки каждого типа обоих препаратов.
Исследование проводилось в соответствии с ОФС 42-003-04 «Растворение» на аппарате Distek Evolution 6100 (фирма «Distek») со следующими характеристиками: вращающийся элемент - лопастная мешалка; скорость вращения - 50 об/мин; среда растворения - 0,1 М хлористоводородная кислота; объем среды растворения - 500 мл; температура - 37 ± 0,5С; время отбора проб 5, 10, 15, 20, 30, 40 мин.
Пробы отбирали через 5, 10, 15, 20, 30, 40 мин и фильтровали через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Объем среды растворения восполнялся при каждом отборе проб. Условия хроматографирования: колонка Nova-Pak С18, 150 х 4,6 мм, 4 мкм; подвижная фаза: вода-ацетонитрил-метанол в соотношении (53:30:17) соответственно; температура колонки 30С; объем вводимой пробы 200 мкл; скорость потока 1,0 мл/мин. Количественное определение ЭЭ и ЛН проводили с помощью ВЭЖХ с флюоресцентным детектором (этинилэстрадиол) при возбуждении 280 нм и эмиссии 310 нм, а также УФ-детектора в области максимального поглощения 245 нм (левоноргестрел).
В качестве стандартов использовали растворы этинилэстрадиола и левоноргестрела в среде растворения концентрацией 0,06 и 0,1 мкг/мл соответственно.
Приготовление стандартного раствора: Около 6,0 мг стандартного образца этинилэстрадиола (точная навеска) и 10,0 мг стандартного образца левоноргестрела (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в подвижной фазе, доводили объем раствора до метки тем же растворителем и перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора до метки средой растворения и перемешивали. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводили объем раствора до метки средой растворения и перемешивали. Расчет процента высвобождения лекарственного вещества из таблетки: 1. Содержание лекарственного вещества (ЛВ): Содержание ЛВ, высвободившегося в каждый момент времени (неисправленное) рассчитывается по формуле: