Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современный анализ атипичных нейролептиков (обзор литературы) 17
1.1. Общая характеристика атипичных нейролептиков 17
1.2. Возможные комбинации атипичных нейролептиков 21
1.3. Фармакокинетические показатели и побочные эффекты некоторых атипичных нейролептиков 23
1.4. Анализ атипичных нейролептиков
1.4.1. Анализ клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, ари-пипразола в таблетках 27
1.4.2. Химико-токсикологический анализ клозапина, рисперидона, сер-тиндола, оланзапина, арипипразола 30
1.4.3. Исследование комбинаций изучаемых атипичных нейролептиков с другими веществами в биологических объектах 34
Заключение по главе 39
ГЛАВА 2. Объекты, материалы и методики исследований 41
2.1. Дизайн исследования 41
2.2. Объекты исследований 42
2.3. Приборы, реактивы, материалы 48
2.4. Методики исследований и расчеты 51
Глава 3. Разработка методик анализа клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола в «вещественных доказательствах» небиологического происхождения 56
3.1. Обнаружение клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола с помощью ТСХ 56
3.2. Разработка спектрофотометрической методики анализа клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола и ее валидация... 60
3.2.1 Спектрофотометрическая методика обнаружения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола 60
3.2.2 Количественное определение клозапина, рисперидона, сертиндо ла, оланзапина и арипипразола в таблетках с помощью УФ-СФМ 65
3.3. Анализ клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и ари-пипразола с использованием ВЭЖХ 70
3.4. Идентификация клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола в извлечениях из таблеток с помощью КЭ 81
3.5. Разработка методик идентификации клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола в извлечениях из таблетокс по мощью ГХ/МС 85
Заключение по главе 90
Глава 4. Теоретическое обоснование условий экстракции клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола 93
4.1. Исследование влияния рН среды и природы органического растворителя на процесс изолирования клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола 101
4.2. Влияние электролита на изолирование изучаемых атипичных нейролептиков 107
4.3. Изучение влияния времени и кратности экстракции на изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола... 110
Заключение по главе 112
Глава 5. Разработка методик изолирования, обнаружения и количественного определения клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола, арипипразола во внутренних органах 114
5.1. Изолирование клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола и арипипразола из модельных проб внутренних органов классическими методами 115
5.1.1. Изолирование изучаемых атипичных нейролептиков методом Стаса-Отто 116
5.1.2. Изолирование изучаемых атипичных нейролептиков методом А.А. Васильевой 121
5.1.3. Изолирование изучаемых атипичных нейролептиков методом В.Ф. Крамаренко 126
5.1.4. Разработка оптимальной методики изолирования изучаемых атипичных нейролептиков из внутренних органов 132
5.2. Изучение распределения клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола и арипипразола после создания острого отравления лабо раторных животных 159
Заключение по главе 166
Глава 6. Разработка методик изолирования, обнаружения и количественного определения клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола, арипипразола в биологических жидкостях 168
6.1. Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола из модельных смесей мочи 169
6.2. Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола из модельных смесей слюны 175
6.3. Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола из модельных смесей плазмы 181
6.4. Установление коэффициентов корреляции между концентрациями атипичных нейролептиков в слюне и плазме 188
6.5. Определение клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола и арипипразола в моче и крови лабораторных животных 192
6.6. Разработка методик изолирования клозапина, рисперидона, сер тиндола, оланзапина, арипипразола в комбинации с типичными нейролептиками и транквилизаторами из мочи, крови, слюны 196
Заключение по главе 214
Глава 7. Схема химико-токсикологического анализа атипичных нейролептиков и обоснование методологического подхода к их аналитической диагностике при острых отравлениях 217
Заключение по главе 222
Заключение 223
Список литературы
- Фармакокинетические показатели и побочные эффекты некоторых атипичных нейролептиков
- Приборы, реактивы, материалы
- Анализ клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и ари-пипразола с использованием ВЭЖХ
- Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола из модельных смесей слюны
Фармакокинетические показатели и побочные эффекты некоторых атипичных нейролептиков
Психические заболевания принадлежат к наиболее серьезным проблемам во всех странах мира, при этом измененная психика, по прогнозам специалистов, станет одной из ключевых причин заболеваемости населения к 2020 году. К нарушениям психического здоровья можно отнести состояния тревоги и депрессии, расстройства, связанные с употреблением алкоголя и наркотических средств, болезнь Альцгеймера, шизофрения, биполярные аффективные расстройства, панические расстройства и др. Существенно и то, что в целом на проблемы психического здоровья приходится почти 20% всего бремени болезней. При этом, бюджет многих стран на охрану психического здоровья составляет, в среднем, лишь 5,8% от общих расходов на здравоохранение. Стоит отметить, что социальная среда и стрессоподобные ситуации, включая дом, учебные заведения, места работы, могут способствовать возникновению или усилению нозологий данного профиля. Особому риску при этом подвергаются маргинальные группы населения, такие как беженцы, мигранты, безработные, заключенные или лица с нетрадиционной сексуальной ориентацией, а также лица с инвалидностью или уже страдающие психическими проблемами.
По данным Европейского регионального Бюро ВОЗ на долю психических расстройств выпадает 19,5% всех лет жизни, утраченных в результате инвалидности [25]. Депрессии, третьей по значимости причине, принадлежит 6,2% всех DALYs (количество лет жизни, скорректированных на инвалидность – DALYs) . На долю самоповреждений, одиннадцатой по значимости причины DALYs, -2,2%, а на болезнь Альцгеймера и другие виды деменции, занимающие четырнадцатое место в списке причин, - 1,9% DALYs. По мере старения населения и увеличения средней продолжительности жизни, число людей с такими нарушениями, по-видимому, будет возрастать. Одним из наиболее трагических последствий психических расстройств на сегодняшний день являются самоубийства. Девять из десяти стран мира с наиболее высокими показателями самоубийств расположены в Европейском регионе. Согласно последним данным, ежегодно добровольно уходят из жизни около 150 тыс. человек, 80% из них - мужчины. Самоубийства - ведущая и скрытая причина смерти среди молодых людей, она занимает второе место в возрастной группе 15-35 лет (после дорожно - транспортных происшествий).
По данным Доклада о состоянии здравоохранения в Европе 2015 г. наблюдается общая тенденция к значительному увеличению числа заболеваний нервной системы [25, 213, 306]. В Российской Федерации за 2014 год в сравнении с 2008 годом отмечается рост болезней нервной системы на 5% [26]. Охрана психического здоровья становится одной из актуальных проблем на сегодняшний день [82, 221, 222, 240, 307].
Одной из важнейших задач нового этапа развития психофармакологии стала разработка нейролептиков, по эффективности не уступающих классическим препаратам, но превосходящих их по широте терапевтического действия и по критериям безопасности [138, 145, 235, 263, 264]. Появившиеся препараты нового поколения получили общее наименование атипичных нейролептиков, к которым в настоящее время относят клозапин, рисперидон, сертиндол, оланзапин, арипипра-зол и некоторые другие [2, 227, 285, 286]. Атипичные нейролептики за рубежом в значительной степени заменили традиционные препараты в качестве первой линии терапии при лечении шизофрении, несмотря на их высокую стоимость [140, 147, 150, 194, 229, 248]. Также имеются данные об использовании некоторых нейролептиков (рисперидон, арипипразол) для лечения алкоголизма [175, 241, 313]. Клозапин принимают наркозависимые лица с целью купирования абстинентного синдрома [316]. Атипичные нейролептики применяют также для лечения психозов различного генеза [10, 16, 91, 122], депрессий [139, 265], бессонницы и боли [262, 266], деменции [308]. Атипичный нейролептик - препарат, эффективно устраняющий как продуктивную, так и негативную симптоматику и не вызывающий побочных неврологических эффектов [229].
Атипичные нейролептики по механизму действия условно можно разделить на две группы [28, 243]. Первая группа препаратов (включающая клозапин, олан-запин) характеризуется взаимодействием с несколькими различными нейроме-диаторными системами, в частности с дофаминовыми, серотониновыми, норадре-нергическими, холинергическими и гистаминовыми рецепторами [121, 204, 267]. Вторая группа препаратов (состоящая из рисперидона, сертиндола, арипипразола) оказывает свое действие преимущественно за счет влияния лишь на 2 типа рецепторов - дофаминовые и серотонинергические [1, 2, 90, 123, 196]. Способность блокировать серотонинергические рецепторы у этих препаратов превосходит способность связываться с дофаминовыми рецепторами типа D2 [137, 195, 270, 299, 303]. При этом каждый из атипичных нейролептиков обладает специфическими механизмами действия [220, 232, 302, 306], клиническими эффектами и, наконец, значительными различиями характеристик безопасности и, соответственно, особенностями терапевтического спектра, что определяет целесообразность назначения конкретного препарата при определенных клинических формах и синдромах [22, 24, 47, 133, 193]. Общие сведения о структуре и используемых дозировках некоторых атипичных нейролептиков [101] представлены в таблице 1.1.
Приборы, реактивы, материалы
Обычно при лечении шизофрении назначается классический нейролептик в инъекционной лекарственной форме (обычно галоперидол) с одновременным назначением «атипичного» антипсихотика в пероральной лекарственной форме (кроме клозапина) [56, 150, 172]. Клиническим основанием для этого является предположение о более быстром достижении седативного и антипсихотического эффектов при парентеральном введении нейролептика.
Поэтому при возникновении отравлений в биологических жидкостях какое-то время может обнаруживаться несколько нейролептиков одновременно. Для установления точного диагноза отравления необходимо разработать методику их обнаружения при совместном присутствии.
При изучении условий обнаружения каждого вещества в растворе методом ВЭЖХ нами не использовались подвижные фазы с объемной долей органического растворителя более 80% для исключения нормально-фазовых взаимодействий, затрудняющих дальнейшее регулирование состава подвижной фазы. Объемная доля органического растворителя менее 10% приводила к функциональной неустойчивости подвижной фазы и невоспроизводимости времен удерживания. Полученные хроматограммы характеризовались временами удерживания основных пиков изучаемых веществ. На хроматограммах рисперидона, оланзапина и ари-пипразола присутствовали минорные пики компонентов таблеток.
Разработанные методики обнаружения изучаемых веществ методом ВЭЖХ могут применяться для двух или трех компонентов при совместном присутствии. Как свидетельствуют полученные данные (таблица 3.8) подобрать оптимальные условия, при которых можно было бы обнаружить изучаемые атипичные нейролептики при совместном присутствии всех изучаемых веществ в растворе методом ВЭЖХ не представляется возможным, так как используются различные режимы градиента и область детекции. Поэтому наблюдаются неразделенные пики при анализе смеси, что приведет к искажению результатов и их интерпретации при химико-токсикологическом исследовании.
Одним из подтверждающих методов, который используется в настоящее время для разделения сложных смесей с высокой эффективностью, является капиллярный электрофорез [124]. Нами было исследована возможность обнаружения рисперидона, оланзапина, сертиндола, арипипразола и галоперидола в смеси методом капиллярного электрофореза .
В отличие от разделения смеси методом ВЭЖХ, который использует в качестве ограниченного пространства, где происходит разделение, колонку, разделение смеси методом капиллярного электрофореза ослабляют такие факторы, как диффузионные, сорбционные, конвекционные, гравитационные и т. д., благодаря чему достигается высокая эффективность разделения.
В доступной нам литературе описана методика анализа сертиндола, норсер-тиндола и дегидросертиндола в плазме с использованием капиллярного зонного электрофореза [170]. Низкая растворимость аналитов в воде (коэффициент распределения октанол-вода 10:5) преодолевается путем применения метанола и аце-тонитрила в качестве растворителей для фонового электролита. Было установлено, что в метаноле подвижность аналитов в основном регулируется кислотно-щелочным равновесием, в то время как в ацетонитриле другие реакции, такие как ионные пары и гомо-конъюгации играют значительную роль в подвижности. Разделение изучаемых веществ может быть получено менее, чем за 10 мин в обеих системах растворителей.
Описана методика с использованием электролита буферного раствора Бриттона-Робинсона (рН 2,3), содержащего 50% этиленгликоля, благодаря которому разделяются галоперидол, клозапин в смеси с другими веществами [201]. Также описана методика определения арипипразола и его метаболита дегидроа-рипипразола с использованием мицеллярной электрокинетической хроматографии [288].
Исследования проводились совместно с канд. фармацевт. наук, доцентом кафедры фармацевтической и токсикологической химии ПМФИ С.П. Сенченко Анализ проводили с использованием фосфатного буферного раствора (рН 3,5) с 40% метанола и 0,02% поливинилового спирта. Разработана методика определения бензодиазепинов [304]. В качестве ведущего электролита использован фосфатно-боратный буферный раствор (рН 8,5) с добавкой метанола 15%. Показано, что методом КЭ могут быть определены вещества только в токсической концентрации.
Химическая структура клозапина, рисперидона, оланзапина, сертиндола, арипипразола и галоперидола предполагает протонирование атомов азота при разных значения рН. Поэтому анализ смеси возможно вести в широком диапазоне рН, так как изучаемые вещества будут ионизироваться при кислых значениях рН ведущего электролита. В связи с этим на основании данных литературы нами использовался фосфатный буферный раствор с рН 2,5 без использования дополнительных добавок.
Такие «вещественные доказательства» небиологического происхождения как таблетки кроме основного компонента обязательно содержат вспомогательные вещества. В наших случаях это кукурузный крахмал, гипромеллоза, двуокись кремния, тальк и др. [67, 68, 69, 71, 72]. Поэтому дополнительной операцией при подготовке проб является центрифугирование растворов.
При анализе были выбраны следующие параметры приготовление раствора ведущего электролита: 0,78 г натрия гидрофосфата помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 90 мл воды очищенной, добавляли кислоту фосфорную до рН 2,5, раствор доводили водой до метки. Режим ввода пробы: 30 мбар/сек 5 сек, напряжение + 25 кВ, сила тока: 68 мА. Анализ проводился на приборе «Капель 103 Р». Использовался капилляр с длиной 65 см, эффективная длина капилляра - 55 см, диаметр капилляра 50 мкм. Регистрация электрофореграмм проходила при фиксированной длине волны 254 нм. Полученные качественные характеристики изучаемых веществ представлены в таблице 3.12.
Анализ клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и ари-пипразола с использованием ВЭЖХ
Полученные данные свидетельствуют о том, что спектрофотометрической методикой можно обнаружить 99,96-103,01% клозапина, рисперидона, сертиндо-ла, оланзапина и арипипразола. RSD для всех веществ ± 2,15-2,42%. Коэффициент корреляции калибровочных графиков r0,99 для всех веществ. Самый высокий предел обнаружения наблюдается для клозапина и оланзапина, самый низкий – для сертиндола. Очевидно, это связано с тем, что клозапин и оланзапин в виду своей химической структуры поглощают УФ-свет в большей степени, нежели другие изучаемые вещества. Таким образом, валидационные характеристики свидетельствуют о том, что разработанная методика количественного определения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапин и арипипразола может быть применена для химико-токсикологического анализа «вещественных доказательств» небиологического происхождения.
Разработанная спектрофотометрическая методика экспрессная, простая, не требует использования дорогостоящего оборудования. Она использована нами в последующих исследованиях для изучения влияния некоторых факторов экстракции в процессе изолирования клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола. Но мы не рекомендуем использовать спектрофотометрический метод для анализа биологических объектов, содержащих клозапин, рисперидон, сер-тиндол, оланзапин и арипипразол, ввиду того, что эндогенные вещества извлечений также могут поглощать УФ-свет и мешать определению. Для использования метода УФ-СФМ в анализе извлечений из биологических объектов требуется проведение тщательной очистки извлечений от эндогенных веществ, что увеличивает потери анализируемых веществ и время проведения анализа.
3.3 Анализ клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола с использованием ВЭЖХ
Данные обзора литературы свидетельствуюто том, что метод ВЭЖХ наиболее часто используется для анализа биологических и небиологических объектов, содержащих клозапин, рисперидон, сертиндол, оланзапин, арипипразол [48, 94, 97], но применяют различные условия. Так в методиках анализа используются различные неподвижные и подвижные фазы; режимы хроматографирования, как правило, градиентные, иногда с использованием сложного градиента. Расчет количественного содержания вещества проводят с использованием стандартного вещества или внутреннего стандарта, что не позволяет использовать данный метод в скрининговых исследованиях.
В качестве неподвижной фазы нами при проведении исследований использовался сорбент Prontosil 120-5-C18 AQ, который является химически модифицированным сорбентом на основе силикагеля и привитой фазой С 18. В обращенно-фазовой хроматографии для анализа изучаемых веществ применяют такие растворители как метанол, ацетонитрил и вода [6, 8, 255, 275].
Для оптимизации разделения чаще всего применяют буферные растворы [106]. Поэтому нами были использованы подвижные фазы, содержащие ацето-нитрил, метанол и воду с добавлением фосфатного буфера и без. Нами исследовалась возможность использования при анализе клозапина, рисперидона, сертиндо-ла, оланзапина и рисперидона в таблетках подвижных фаз ацетонитрил-вода и метанол-вода в соотношениях 20:80; 30:70; 40:50; 50:50;50:40; 70:30; 80:20. При таких условиях наблюдались неразделенные пики анализируемых веществ с компонентами таблеток и примесями, а также пики, имеющие ассиметричную форму (коэффициент ассиметрии пиков 2,01—2,18), что свидетельствует о наличии значимых ионообменных взаимодействий.
При замене воды фосфатным буферным раствором (рН=3) наблюдались симметричные формы пиков, но время удерживания имело маленькое значение, что не дает возможности в последующем применить выбранные условия для анализа объектов биологического происхождения, когда могут встречаться пики эндогенных веществ с маленьким временем удерживания.
Американская фармакопея для улучшения селективности подвижной фазы при анализе таблеток, содержащих рисперидон, где присутствует значительное количество примесных соединений, рекомендует добавлять трифторуксусную кислоту [312]. Нами была осуществлена замена фосфатного буферного раствора на 0,1% раствор кислоты трифторуксусной. Кроме того, при анализе клозапина и рисперидона было применено термостатирование при 35 оС. Время удерживания веществ увеличилось, но при этом наблюдались пики соэкстрактивных веществ таблеток, которые перекрывались с основными пиками. Дальнейшие исследования проводились с подбором условий градиентного режима хроматографирова-ния.
Приготовление извлечений из таблеток клозапина, рисперидона, сертиндо-ла, оланзапина и арипипразола для анализа методом ВЭЖХ описано в разделе 2.2. Полученные результаты по выбору условий хроматографирования клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола в таблетках представлены в таблице 3.8. Таблица 3.8 –Условия хроматографирования клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола Хроматографическая колонка 2х75 мм Сорбент «ProntoSil 120-5-C18 AQ» Элюент А — 0,1% раствор трифторуксусной кислоты
Арипипразол 1,5 1,5 4847 Полученные данные свидетельствуют о соответствии современным требованиям параметров пригодности хроматографической системы.
Полученные хроматограммы стандартных образцов клозапина, рисперидо-на, сертиндола, оланзапина и арипипразола, которые вошли в библиотеку данных атипичных нейролептиков, представлены на рисунках 3.7 – 3.11.
Для характеристики гомогенности полученных пиков (чистоты раствора основного исследуемого вещества, который не содержит примесей вещества и компонентов таблеток) нами были использованы спектральные соотношения (отношения площадей пиков при разных длинах волн). Самое важное свойство спектральных соотношений – их независимость от концентраций веществ. Это свойство используется для контроля чистоты раствора вещества, выходящего из хро-матографической колонки ("гомогенности хроматографического пика"). Кроме того, по спектральным соотношениям возможно проводить идентификацию ос новных веществ.
Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина, арипипразола из модельных смесей слюны
Представленные данные свидетельствуют о том, что правильность при оп ределении изучаемых атипичных нейролептиков в слюне не превышает ±16,11 %, что доказывает значительное влияние эндогенных веществ слюны на результаты анализа. Разработанные методики обнаружения и количественного определения клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола соответствуют критериям приемлемости [64] и могут использоваться для целей химико токсикологического анализа. Эти методики могут также использоваться и для рутинных анализов при ТЛМ и для экспресс-диагностики острых отравлений. Ограничением использования разработанной методики является ПКО.
Наиболее информативным биологическим объектом, по которому можно установить степень отравления токсическим веществом, является кровь. Нами для проведения эксперимента использовалась плазма. Плазма как объект химико-токсикологического анализа вызывает значительные трудности при пробоподго-товке. Хотя на 90% она состоит из воды, в ней содержатся белки, большая часть которых приходится на альбумины, в меньших количествах содержатся глобулины. В плазме также содержатся минеральные соли, фосфолипиды, низкомолекулярные органические вещества (гормоны, амины, билирубин и др.). Концентрация токсического вещества в плазме зависит от его особенностей распределения в организме, метаболизма, степени связывания с белками. Именно последний фактор определяет трудности в пробоподготовке плазмы, так как необходимо разрушить комлекс белков плазмы с токсическим веществом, тем более, что степень связывания с белками клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипразола высокая - от 90 до 99% (таблица 1.2) и свободной фракции токсических веществ в крови будет содержаться мало. В практике химико-токсикологического анализа используется несколько приемов для проведения депротеинизации: добавление органических растворителей в соотношении 1:10 [230, 233], кислот (хлористоводородной, хлорной, трихлоруксусной и др.), электролитов (натрия хлорид насыщенный, аммония сульфат насыщенный и др.), проведение ферментативного гидролиза [131]. Добавление кислот приведет не только к депротеинизации, но и переходу изучаемых атипичных нейролептиков в ионную форму, что уменьшит их переход в органическую фазу, а значит, снизит степень извлечения. Добавление некоторых электролитов (таблица 4.3) может привести к процессу всаливания атипичных нейролептиков и уменьшению степени извлечения. Ферментативный гидролиз требует дополнительных операций и времени, что в условиях рутинных анализов приведет к уменьшению их числа, кроме того, ферменты обладают большой специфичностью по отношению к гидролизу пептидных связей опреде 182 ленных пар аминокислот в белковой молекуле. Поэтому мы остановились на добавлении органического растворителя, применяемого для экстракции, в соотношении 1:10 для того, чтобы совместить процесс депротеинизации с одновременным процессом экстракции, что сокращает по времени процедуру анализа, а также оптимального электролита, который не только осадит белки, но и будет способствовать переходу токсического вещества в органическую фазу.
Так как для изолирования изучаемых веществ нами использовалась жидкость-жидкостная экстракция, то при разработке методики изолирования учитывалось влияние различных факторов на экстракцию клозапина, рисперидона, сер-тиндола, оланзапина и арипипразола, описанных в главе 4. При разработке методики изолирования использовали модельные смеси плазмы, приготовленные, как описано в разделе 2.2.
Изолирование клозапина, рисперидона, сертиндола, оланзапина и арипипра-зола из плазмы. К модельной смеси плазмы добавляли аммиака раствор 25% до рН 10 (или до рН 12 в случае изолирования оланзапина), 1 мл натрия карбоната раствора 10 % (или натрия карбоната раствора насыщенного в случае изолирования сертиндола, или натрия сульфата раствора насыщенного в случае изолирования оланзапина, или натрия хлорида раствора 20% в случае изолирования ари-пипразола) и 10 мл хлороформа. Содержимое колбы взбалтывали в течение 5 минут (или 3 минут в случае изолирования рисперидона или оланзапина, или 7 минут в случае изолирования сертиндола) и помещали в делительную воронку. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагента, растворяли в 5 мл спирта 96%. Расчет количественного содержания изучаемых атипичных нейролептиков проводили по уравнению калибровочного графика (раздел 3.3). Степень извлечения рассчитывали по формуле (5). Полученные данные представлены в таблицах 6.15- 6.19