Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Система метаболизма (биотрансформации) лекарственных средств 11
1.1.1. История изучения метаболизма лекарственных препаратов 11
1.1.2. Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС 13
1.1.2.1. Основные фазы метаболизма. Суперсемейство цитохром Р450 13
1.2. Функциональные особенности и полиморфизм изофермента CYP 2D6 21
1.2.1. -блокаторы как субстрат CYP 2D6 24
1.2.2. Метаболизм антипсихотических ЛС с участием CYP 2D6 25
1.2.3. Влияние заболеваний печени на активность CYP 2D6 26
1.3. Методы определения активности СУР 2D6 (фенотипирование) 27
1.3.1. Количественное определение дебризохина и спартеина 30
1.3.2. Количественное определение трамадола 31
1.3.3. Количественное определение метопролола 31
1.3.4. Количественное определение декстрометорфана 32
1.4. Определение активности CYP 2D6 по отношению пинолин/6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 33
1.4.1. Скрининг эндогенных субстратов CYP 2D6 33
1.4.2. Физические, химические и биохимические свойства пинолина 34
1.4.3. Существующие методики определения пинолина
1.4.3.1. Определение ex vivo 36
1.4.3.2. Определение in vivo 37
1.5. Метод ВЭЖХ-МС/МС 39
Экспериментальная часть (собственные исследования) 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы 42
2.1. Оборудование и материалы 42
2.1.1. Материалы 42
2.1.1.1. Стандарты определяемых веществ з
2.1.1.2. Биологическая матрица 42
2.1.1.3. Реактивы 42
2.1.2. Оборудование
2.2. Разработанная методика 43
2.3. Дизайн фармакологической части 44
ГЛАВА 3. Основные результаты и их обсуждение 46
3.1 Разработка методики определения отношения пинолин и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 46
3.1.1. Выбор внутреннего стандарта 46
3.1.2. Пробоподготовка
3.1.2.1. Отбор проб. Пробоподготовка 47
3.1.2.2. Пробоподготовка плазмы крови 48
3.1.2.3. Пробоподготовка мочи 50
3.1.2.4. Выводы по результатам пробопоготовки
3.1.3. Хроматографические условия 52
3.1.4. Масс-спектр условия 54
3.2. Валидация методики определения пинолина и
6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин 55
3.2.1. Параметры пригодности хроматографической системы 55
3.2.1.1. Селективность 56
3.2.1.2. Линейность зависимости отклика от концентраций определяемых веществ
3.2.1.2.1. Получение данных для построения калибровочного графика 58
3.2.1.2.2. Построение калибровочного графика 58
3.2.1.2.3. Оценка линейности 3.2.1.3. Оценка правильности и прецизионности методики 62
3.2.1.4. Оценка предела количественного определения 63
3.2.1.5. Эффект матрицы 64
3.2.1.6. Стабильность анализируемых веществ 66
3.2.1.6.1. Стабильность стандартного раствора 66
3.2.1.6.2. Стабильность пинолина и его метаболита в составе биологической матрицы при хранении в замороженном состоянии 67
3.2.1.6.3. Стабильность пинолина и его метаболита после пробоподготовки 68
3.2.1.7. Тест на разведение 70
3.3. Зависимость активности изофермента CYP 2D6 и изменения отношения пинолина и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина
3.3.1. Изучение влияния почечной патологии на активность изофермента CYP 2D6 73
3.3.2. Изменение активности изофермента CYP 2D6 под действием ингибиторов и индукторов 75
Общие выводы 77
Список литературы
- Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС
- Стандарты определяемых веществ
- Выводы по результатам пробопоготовки
- Стабильность пинолина и его метаболита после пробоподготовки
Системы и ферменты, участвующие в метаболизме ЛС
Основная функция метаболизма ЛС заключается в том, чтобы облегчить выведение соединений из организма, таким образом, предотвращая нежелательное накопление чужеродных соединений или потенциально токсичных концентраций эндогенных соединений. Эта физиологическая функция описывается количественными фармакокинетическими терминами биодоступность и клиренс. Биодоступность показывает количество принятого ЛС, которое достигло системного кровотока, т. е. количество абсорбированного ЛС минус пресистемный метаболизм. Степень выведения ЛС из системного кровотока и скорость постсистемного метаболизма характеризует клиренс. Биодоступность и клиренс в совокупности влияют на общее воздействие ЛС на организм и количественно характеризуются площадью под фармакокинетической кривой (AUC) (рис. 1).
Каждое соединение обычно биотрансформируется через ряд параллельных и/или последовательных реакций, через так называемый метаболический путь и, при этом, на разных стадиях образуются различные соединения. Общий метаболизм любого соединения является суммой всех доступных путей метаболизма ЛС. Условно реакции метаболизма можно разделить на «I фазу» и «II фазу». I фаза метаболизма включает в себя функциональные реакции (окисление, восстановление, гидролиз). С помощью этих реакций вводятся новые полярные функциональные группы, изменяются существующие группы с повышением полярности или гидролизуются закрытые полярные группы. II фаза характеризуется реакциями конъюгации (глюкуронирование, сульфонирование, конъюгация с глицином/глютамином/глютатионом, ацетилирование, метилирование). После конъюгации резко увеличивается полярность соединения, что способствует лучшему выведению. Следует отметить, что все реакции биотрансформации проходят в очень мягких условиях: нейтральный рН, приблизительно 37С, водный растворитель и атмосферное давление. Только благодаря ферментам, участвующим в реакциях в качестве катализаторов, реакции протекают в таких условиях.
При определении биодоступности и фармакокинетики ЛС следует учитывать роль различных семейств ферментов, которые участвуют в его метаболизме. Оценивают метаболизм ЛС по тем ферментам, которые проявляют большую активность по отношению к субстрату. В реакциях I фазы метаболизма в качестве катализаторов участвуют различные классы ферментов. Поскольку изоферменты суперсемейства цитохрома Р450 широко представлены в организме, они доминируют среди других ферментов по вкладу в биотрансформацию ЛС. Подсемейства CYP 1, CYP 2 и CYP 3 метаболизируют большинство ЛС и ксенобиотиков [46, 97]. Два важных класса ферментов локализованы в эндоплазматическом ретикулуме, рядом с цитохромом Р450: флавин-содержащие монооксигеназы, которые участвуют в реакциях N- и S-окисления и уридин-5 дифосфат глюкуронилтрансферазы, которые катализируют конъюгацию с уридин-5-дифосфорной глюкуроновой кислотой. В дополнение к этим семействам, существуют N-ацетил трансферазы, сульфотрансферазы, глутатион трансферазы, алкоголь дегидрогиназы и альдегид дегидрогиназы. Почти все метаболические пути включают один или несколько ферментов – большинство включают цитохром Р450.
Цитохром Р450 является одним из наиболее важных семейств ферментов, которые участвуют в регуляции фармакологически активных, токсичных и потенциально токсичных ксенобиотиков. Ферменты цитохрома являются мембранно-связанными гемопротеинами, которые соединяются с гладким эндоплазматическим ретикулумом. Известно, что субстратами цитохрома являются подвергаются метаболизму путем окисления. Цитохром делится на подсемейства в зависимости от общей аминокислотной последовательности. Более 50 различных изоферментов идентифицированы у человека. Среди них проявляют активность в метаболизме большинства ЛС следующие изоферменты: CYP 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 2J2, 3A4, 3A5, 4F2, 4F3a, 4F3b и 4F12. Фактически CYP 1A2, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6 и 3A4 являются наиболее важными изоферментами при определении фармакокинетических параметров. Эта номенклатура используется не только у человека, но и у других видов. Как правило, у различных соединения с различными функциональными группами, которые видов изоферменты имеют схожие между собой структуру, функции и название, но, важно отметить, что они не идентичны человеческим формам. Даже небольшое различие в аминокислотной последовательности может повлиять на сродство к субстрату и на способность фермента метаболизировать субстрат и/или регион специфичное место молекулы. Изучая метаболизм, следует обращать внимание на стадии биотрансформации, которым подвергается субстрат, а также определять ферменты, под действием которых происходят такие трансформации. Фармакокинетические показатели, полученные в испытаниях in vivo на мышах или других лабораторных животных, не всегда коррелируют с показателями человека. Для прогнозирования фармакокинетики ЛС у человека нужно проводить анализ на разных видах животных, а также учитывать данные, полученные в испытания in vitro и in silico [84, 89].
Как семейство, несколько изоферментов вместе участвуют в окислении и биотрансформации сложных соединения. Однако у отдельных изоферментов есть тенденция к большей селективности к субстратам с определенными свойствами, что позволяет дифференцировать их (табл. 1) [64, 65]. CYP 1A1 часто участвует в метаболизме арильных углеводов [40]. У CYP 1A1 и CYP 1A2 частично совпадает сродство к субстратам; однако, CYP 1A2 преимущественно метаболизирует полициклические ароматические углеводы. Как CYP 1A1, так и CYP 1A2 участвуют в биотрансформации проканцерогенов в канцерогены. Было показано, что CYP 1A2 является основным ферментом, метаболизирующим такие ЛС, как фенацетин и теофиллин. CYP 2A6 отдает предпочтение более мелким, нейтральным, менее липофильным молекулам, таким как кетоны и нитрозамины. CYP 2C9 и CYP 2C19 могут метаболизировать кислые молекулы. CYP 2C9 участвует в реакциях О-деметилирования фенольных радикалов, окислении ароматических метил радикалов, радикалов, содержащих атом серы, N деалкилировании [84]. Напротив, CYP 2D6 может метаболизировать основные молекулы с атомом азота (флуоксетин, нортриптилин, декстрометорфан и буфуралол), а также катализирует реакции О-деметилирования, окисления метил радикалов и фенол О-деметилирования. CYP 2E1 эффективен в биотрансформации малых молекул (этанол, ацетаминофен, халотан и пара нитрофенол), а CYP 3A4 – больших, липофильных молекул (симвастатин, тестостерон, кортизол, циклоспорин и мидазолам) [47, 64]. Также CYP 3A4 проявляет активность при N-деалкилировании, гидроксилировании ароматических систем и окислении радикалов, содержащих серу.
Стандарты определяемых веществ
Биологическая матрица для приготовления калибровочных образцов и образцов контроля качества - плазма крови человека и моча. ацетонитрил (supergradient, Scharlau, Испания); спирт метиловый (extra pure, Scharlau, Испания); муравьиная кислота (for LC-MS, Merck Millipore, США); аммония формиат (for LC-MS, Merck Millipore, США); этилацетат (extra pure, Scharlau, Испания); деионизированная вода, электрическое сопротивление 18,2 Мом см, Millipore simplicity UV (Merck-Millipore, США); триэтиламин (reagent grade, Scharlau, Испания); натрия тетраборат (extra pure, Scharlau, Испания); борная кислота (extra pure, Scharlau, Испания).
Оборудование жидкостной хроматограф Agilent 1290 Infinity оснащенный градиентным насосом, дегазатором, автосамплером, трехквадрупольным масс селективным детектором Agilent 6460, США; предколонка Agilent Zorbax Eclipce Plus C18 12,5 x 2,1 мм, 5 мкм (кат. № 821125-936) колонка Agilent Zorbax Eclipce Plus C18 RRHD 100 x 2,1 мм, 1,8 мкм (кат. № 959758-902K) картридж Chromabond С18 для ТФЭ, США весы аналитические ES 225 SMDR, Швейцария; рН-метр Seven Multi, Mettler Toledo, Швейцария; центрифуга Eppendorf 5415D, Германия; встряхиватель типа вортекс ELMI, Латвия; концентратор Eppendorf Concentrator plus, Германия; дозаторы переменного объема Eppendorf 10 - 100 мкл и 100 - 1000 мкл, Германия; холодильник Indesit, SD 125, Россия; морозильник для плазмы Sanyo, Япония; система водоподготовки Micropure, ThermoScientific, США.
Хроматограф: Agilent 1290 Infinity; Предколонка: Agilent Zorbax Eclipce Plus C18 12,5 x 2,1 мм, 5 мкм (кат. № 821125 936); Колонка: Agilent Zorbax Eclipce Plus C18 RRHD 100 x 2,1 мм, 1,8 мкм (кат. № 959758-902K); Температура колонки: (50 ± 1) С; Скорость потока: 0,4 мл/мин; Детектирование: МС/МС, MRM-переходы для пинолина 203,2 m/z 174,0 m/z, для 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина 189,2 m/z 160,0 m/z, для галантамина 288,3 m/z 213,0 m/z; Метод ионизации: электроспрей (ESI) в положительной полярности; Объем пробы: 5 мкл. Ориентировочные времена удерживания в плазме крови: 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин - около 1,1 мин; - пинолин - около 5,0 мин; - галантамин - около 2,4 мин. Ориентировочные времена удерживания в моче: 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболин - около 1,1 мин; - пинолин - около 5,0 мин; - галантамин - около 2,4 мин. Время хроматографирования: 14 мин Подвижная фаза: Элюент А: 5 мМ аммония формиата и 0,01 % муравьиной кислоты в воде.
ЭлюентВ: 0,01 % муравьиной кислоты в ацетонитриле. Методика Стабилизируют систему ВЭЖХ в условиях начального градиента (элюент А : элюент В = 95 % : 5 %) в течение 15 мин. Градиентная программа: Время, мин Элюент А, % (об/об) Элюент В, % (об/об)
В исследовании принимали участие 20 мужчин (средний возраст — 39,5 ± 9,5 года), страдающих алкогольной зависимостью и находящихся на стационарном лечении в ГБУЗ «МНПЦ наркологии ДЗМ». В период актуализации патологического влечения пациенты получали галоперидол в таблетированной форме (ООО «Озон», Россия) в дозировке 5,00 ± 1,87 мг/сут (9 пациентов, однократный прием) и в инъекционной форме (ЗАО «БРЫНЦАЛОВ-А», Россия) в дозировке 5,86 ± 2,39 мг/сут (11 пациентов, однократный прием). Критерии включения в исследование: терапия, содержащая галоперидол длительностью 5 дней; пероральная и внутримышечная формы введения галоперидола; отсутствие в анамнезе сопутствующего психического заболевания. Критерии исключения: применение в терапии иных антипсихотических препаратов, помимо галопе-ридола; клиренс креатинина 50 мл/мин, концентрация креатинина в плазме крови 1,5 мг/дл (133 мкмоль/л); масса тела менее 60 кг или превышающая 100 кг; возраст 75 лет и более; наличие противопоказаний к применению галоперидола.
Выводы по результатам пробопоготовки
Построение калибровочного графика осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2010. После хроматографирования полученных растворов строили калибровочные графики зависимости отношения площадей исследуемого вещества к внутреннему стандарту (ось Y) от известных концентраций (ось X), по которым определяли концентрации пинолина и 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина. При этом определяли характер зависимости, тип аппроксимации, достоверность аппроксимации и коэффициенты соответствующего уравнения регрессии.
Представленные данные свидетельствуют о том, что для определяемого вещества калибровочные графики описываются линейной функцией с высоким показателем достоверности аппроксимации. В плазме коэффициент корреляции (R) составил 0,99474 для пинолина и R=0,99534 для 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина, что соответствует требованиям валидации методики (не менее 0,99 %). В моче коэффициент корреляции (R) составил 0,9913 для пинолина и R=0,9939 для 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина, что соответствует требованиям валидации методики (не менее 0,99 %). Рисунок 10 - Калибровочный график зависимости концентрации пинолина от площади пика в плазме крови.
Калибровочный график зависимости концентрации 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина от площади пика в плазме крови. Рисунок 12 - Калибровочный график зависимости концентрации пинолина от площади пика в моче.
Был выполнен расчёт концентраций пинолина и его метаболита по уравнению калибровочной зависимости, после чего полученные результаты сравнивались с фактическими, а затем были рассчитаны значения относительной погрешности (табл. 12, 13, 14, 15).
C факт,пг/мл 0,25 0,375 0,5 0,75 1,0 1,25 1,5 Площадь пика 1964 2876 3529 5571 7114 9140 10725 С рассчит,пг/мл 0,271 0,396 0,486 0,768 0,980 1,260 1,478 є, % 8,27 5,70 -2,73 2,37 -1,96 0,77 -1,46 Норма Не более 20 % Не более 15% Таблица 12 - Отклонения концентраций пинолина калибровочных растворов в плазме от фактических значений. C факт,пг/мл 0,25 0,375 0,5 0,75 1,0 1,25 1,5 Площадь пика 1986 3057 4758 6368 9001 10475 13347 С рассчит,пг/мл 0,224 0,394 0,509 0,742 0,989 1,240 1,508 є, % -10,22 5,12 1,79 -1,06 -1,07 -0,80 0,57 Норма Не более 20 % Не бол ее 15% Таблица 13 - Отклонения концентраций 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро- карболина калибровочных растворов в плазме от фактических значений. C факт,пг/мл 0,25 0,375 0,5 0,75 1,0 1,25 1,5 Площадь пика 2045 2587 3749 5527 7148 8993 10942 С рассчит,пг/мл 0,282 0,357 0,517 0,762 0,985 1,239 1,508 є, % 12,73 -4,92 3,34 1,56 -1,49 -0,85 0,53 Норма Не более 20 % Не бол ее 15% Таблица 14 - Отклонения концентраций пинолина калибровочных растворов в моче от фактических значений. C факт,пг/мл 0,25 0,375 0,5 0,75 1,0 1,25 1,5 Площадь пика 2479 2743 4478 6541 9201 10417 13195 С рассчит,пг/мл 0,280 0,354 4,79 0,762 1,011 1,233 1,491 , % 12,07 -5,67 -4,19 1,63 1,13 Не более 15% -1,35 -0,58 Норма Не более 20 % Таблица 15 - Отклонения концентраций 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина калибровочных растворов в моче от фактических значений. Полученные значения относительной погрешности соответствуют требованиям (не более 20% - для нижней точки, не более 15% - для остальных).
Правильность – величина, отражающая степень соответствия между истинным значением измеряемой концентрации и результатом, полученным по данной методике. Показатели правильности оценивались по уровню относительной погрешности получаемых результатов (выраженное в процентах отношение разности «полученное значение – истинное значение» к истинному значению концентрации, метод «введено – найдено»).
Прецизионность – величина, выражающая степень близости (или разброса) результатов для серии измерений, выполненных по данной методике на различных пробах одного и того же однородного образца. Показатели прецизионности оценивались по уровню относительного стандартного отклонения. Оценку показателей правильности и прецизионности осуществляли путём исследования образцов контроля качества на 4 уровнях концентраций: 250 пг/мл, 375 пг/мл, 750 пг/мл и 1500 пг/мл. Правильность и прецизионность определяли в течение 1 рабочего дня (внутри серии) и в течение нескольких дней (между сериями). Расчёт концентраций определяемых веществ в образцах контроля качества выполняли по уравнению калибровочного графика, полученного в составе текущей аналитической серии. Результаты представлены в таблице 16, 17.
Нижний предел количественного определения – минимальная концентрация анализируемого вещества в образце, которая может быть определена с требуемой правильностью и прецизионностью; критерием предела количественного определения служило соотношение «сигнал : уровень флуктуационных шумов нулевой линии» не менее 10 : 1. Фактически в рамках представленного исследования в плазме крови предел количественного определения пинолина составил 250 пг/мл и для 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина тоже составил 250 пг/мл. В моче предел количественного определения пинолина составил 250 пг/мл и для 6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро--карболина тоже составил 250 пг/мл
Влияние компонентов биологической матрицы (сыворотки крови и мочи) оценивали путём определения степени извлечения пинолина и его метаболита из модельных смесей, приготовленных аналогично калибровочным образцам и образцам контроля качества, с концентрациями, соответствующими 250 пг/мл, 750 пг/мл и 1500 пг/мл (для каждой из указанных концентраций исследовали 5 независимых модельных смесей). За 100 % принимали раствор вещества в экстрагенте с аналогичной концентрацией, с поправкой на степень концентрирования при пробоподготовке. Степень извлечения рассчитывали, как выраженное в процентах соотношение площадей пиков определяемых веществ, полученных при хроматографическом исследовании экстрактов модельных смесей и растворов в чистом экстрагенте. Результаты приведены в таблице 18, 19, 20, 21.
Стабильность пинолина и его метаболита после пробоподготовки
Изофермент CYP 2D6 участвует в метаболизме по разным оценкам от 15 до 25 % ЛС [11, 25, 31]. Субстратами этого изофермента являются сильнодействующие ЛП, которые применяются в психиатрии и при лечении сердечно-сосудистых заболеваний. При неправильной дозировке или при изменении активности изофермента CYP 2D6 вследствии генетических факторов или внешних воздействий могут проявиться серьезные НЛР, а также может наблюдаться отсутствие фармакологического эффекта.
Целью нашей работы является разработать методику количественного определения пинолина и его метаболита методом LC/MS/MS для оценки активности изофермента CYP 2D6. Для достижения этой цели были подобраны оптимальные условия пробоподготовки биологических матриц и была разработана и валидирована методика количественного определения. Затем, методика была апробирована на пациентах для изучения активности CYP 2D6 [19, 36, 37]. Также для оценки возможности использования методики для определения изменений активности при приеме ингибиторов активности CYP 2D6 количественное определение проводили у пациентов при приеме ингибиторов.
В исследовании принимали участие 20 мужчин (средний возраст — 39,5 ± 9,5 года), страдающих алкогольной зависимостью и находящихся на стационарном лечении в МНПЦ наркологии. В период актуализации патологического влечения пациенты получали галоперидол в таблетированной форме (ООО «Озон», Россия) в дозировке 5,00 ± 1,87 мг/сут (9 пациентов, однократный прием) и в инъекционной форме (ЗАО «БРЫНЦАЛОВ-А», Россия) в дозировке 5,86 ± 2,39 мг/сут (11 пациентов, однократный прием). Критерии включения в исследование: терапия, содержащая галоперидол длительностью 5 дней; пероральная и внутримышечная формы введения галоперидола; отсутствие в анамнезе сопутствующего психического заболевания. Критерии исключения: применение в терапии иных антипсихотических препаратов, помимо галопе-ридола; клиренс креатинина 50 мл/мин, концентрация креа тинина в плазме крови 1,5 мг/дл (133 мкмоль/л); масса тела менее 60 кг или превышающая 100 кг; возраст 75 лет и более; наличие противопоказаний к применению галоперидола.
В качестве биообъекта собирали утреннюю мочу пациентов, находящихся на лечении препаратом. Забор материала проводили в количестве не менее 10 мл в сухой стерильный флакон. Первый отбор образцов проводился до начала лечения, а затем через 5 дней, после начала приема препарата.
Время от момента забора клинического материала до его доставки в лабораторию составляло: при комнатной температуре (18–25 C) — не более 6 часов; при температуре 2–80 C — не более 1 суток (при доставке в лабораторию в специальных термоконтейнерах с хладогеном, термосах с термопакетами). Образцы исследуемой мочи хранили в морозильнике для плазмы при оо температуре от – 75 С до – 80 С. Метод пробопоготовки отобранной мочи, описан в разделе «3.1.2.3. Пробоподготовка мочи».
В исследовании приняли участие те же пациенты, так как у них в анамнезе у всех значился алкогольный гепатит. В контрольной группе исследовались 20 добровольцев мужского пола в возрасте от 30 до 48 лет с верифецированным диагназом «здоров», не приниавших никакого лечения (табл. 34). № пациента Испытуемая группа до начала лечения Контрольная группа Пинолин (пг/мл) Метаболит (пг/мл) Метаболическое отношение Пинолин (пг/мл) Метаболит (пг/мл) Метаболическое отношение
Расчитанные значения концентраций пинолина и его метаболита, метаболический индекс. Статистический анализ результатов исследования производили методами непараметрической статистики с помощью пакета прикладных программ Statsoft Statistica v. 10.0. При выборе метода брали во внимание нормальность распределения выборок, которую оценивали с помощью W-теста Шапиро–Уилка. Различия считали статистически значимыми при р 0,05 (при статистической мощности свыше 80 %). Для определения корреляционной связи между количественными характеристиками вычисляли коэффициент ранговой корреляции Спирмена (rS). Значение коэффициента корреляции rS в диапазоне от 0,3 до 0,7 при р 0,05 означало положительную умеренную, но достоверную корреляцию между признаками; rS 0,7 при р 0,05 — сильную и достоверную связь; отрицательное значение rS соответствовало обратной корреляции.
Было доказано, что статистически значимого отличия между больными алкогольным гепатитом и здоровыми добровольцами в отношении метаболической активности CYP 2D6 нет (р 0,05 ).
Так как пациенты получали галоперидол, который является классическим ингибитором CYP 2D6, то в нашем исследовании были измерены метаболические отношения по пинолину до начала лечения и после 2 недель приема галоперидола. Результаты приведены в таблице 35. № пациента До начала лечения После 2 недель приема галоперидола Пинолин (пг/мл) Метаболит (пг/мл) Метаболическое отношение Пинолин (пг/мл) Метаболит (пг/мл) Метаболическое отношение
Статистический анализ результатов исследования производили методами непараметрической статистики с помощью пакета прикладных программ Statsoft Statistica v. 10.0. При выборе метода брали во внимание нормальность распределения выборок, которую оценивали с помощью W-теста Шапиро–Уилка. Различия считали статистически значимыми при р 0,05 (при статистической мощности свыше 80 %). Для определения корреляционной связи между количественными характеристиками вычисляли коэффициент ранговой корреляции Спирмена (rS). Значение коэффициента корреляции rS в диапазоне от 0,3 до 0,7 при р 0,05 означало положительную умеренную, но достоверную корреляцию между признаками; rS 0,7 при р 0,05 — сильную и достоверную связь; отрицательное значение rS соответствовало обратной корреляции.
Как видно из приведенных данных в процессе лечения ингибитором CYP 2D6 галоперидолом метаболическое отношение снижается (rS в диапазоне от 0,3 до 0,7 при р 0,05 ). Данную методику можно использовать для оценки активности изофермента CYP 2D6 при приеме индукторов.