Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Фармакогностическая характеристика видов рода золотарник 13
1.1 История и распространение видов рода Золотарник 13
1.2 Ботаническая характеристика видов рода Золотарник 16
1.3 Систематическое положение рода Золотарник 17
1.4 Химический состав изученных видов рода Золотарник 18
1.5 Использование сырья видов рода Золотарник 22
Выводы по обзору литературы 29
ГЛАВА 2 Объекты и методы исследования 30
2.1 Объекты исследования 30
2.2 Методы исследования
2.2.1 Химические реакции 31
2.2.2 Хроматографические методы исследования 32
2.2.3 Спектральные методы 33
2.2.4 Титриметрические методы 34
2.2.5 Гравиметрические методы 34
2.2.6 Ресурсоведческие исследования 34
2.2.7 Фармакологические методы исследования 35
2.2.8 Отбор проб для анализа 36
2.2.9 Методы макро– и микроскопического анализа сырья
2.2.10 Определение числовых показателей 37
2.2.11 Валидация методики количественного определения 37
2.2.12 Микробиологическая чистота 37
2.2.13 Определение сроков годности 37
2.2.14 Методы статистической обработки 37
ГЛАВА 3 Предварительные ресурсоведческие исследования золотарника кавказского и изучение возможностей введения его в культуру 38
3.1 Определение урожайности травы золотарника кавказского 38
3.2 Расчет объема ежегодных заготовок 39
3.3 Исследования по введению золотарника кавказского в культуру 41
Выводы по главе 45
ГЛАВА 4 Морфологическое и анатомо–диагностическое изучение травы и корневищ с корнями золотарника Кавказского 46
4.1 Морфологическая характеристика «Золотарника кавказского травы» 46
4.2 Анатомическое строение листа 4.2.1 Строение листа с поверхности 47
4.2.2 Строение листа на поперечном срезе 50
4.3 Анатомическое строение стебля 52
4.3.1 Строение стебля с поверхности 52
4.3.2 Строение стебля на поперечном срезе 53
4.3.3 Строение стебля на продольном срезе
4.4 Анатомическое строение цветка 59
4.5 Микроскопический анализ измельченной «Золотарника кавказского травы» 64
4.6 Микроскопический анализ порошка «Золотарника кавказского травы» 66
4.7 Морфологическая характеристика корневищ с корнями золотарника кавказского 68
4.8 Анатомическое строение корневищ с корнями золотарника кавказского 69
Выводы по главе 73
ГЛАВА 5 Фитохимическое изучение травы и корневищ с корнями золотарника кавказского. разработка норм качества золотарника кавказского травы 74
5.1 Анализ травы и корневищ с корнями золотарника кавказского с помощью качественных реакций 74
5.2 Изучение фенольных соединений травы золотарника кавказского методом БХ 75
5.3 Обнаружение рутина методом ТСХ в «Золотарника кавказского траве» 78
5.4 Изучение фенольных соединений золотарника кавказского травы методом ВЭЖХ 79
5.5 Количественное определение флавоноидов в пересчете на рутин в «Золотарника кавказского траве» методом дифференциальной спектрофотометрии 82
5.6 Количественное определение фенолкарбоновых кислот в траве и корневищах с корнями золотарника кавказского методом спектрофотомерии в пересчете на кофейную кислоту 89
5.7 Количественное определение дубильных веществ в траве и корневищах с корнями золотарника кавказского 93
5.8 Изучение тритерпеновых гликозидов травы золотарника кавказского 95
5.9 Изучение полиацетиленовых соединений корневищ с корнями золотарника кавказского 5.10 Количественное определение органических кислот в траве золотарника кавказского 100
5.11 Изучение органических кислот травы золотарника кавказского методом ВЭЖХ 101
5.12 Изучение углеводов травы золотарника кавказского 103
5.13 Биологически активные соединения травы золотарника кавказского, идентифицированные методом ГЖХ–МС 109
5.14 Изучение аминокислотного состава травы золотарника кавказского 112
5.15 Изучение минерального состава травы золотарника кавказского 113
5.16 Определение некоторых числовых показателей травы и корневищ с корнями золотарника кавказского 115
5.17 Микробиологическая чистота «Золотарника кавказского травы» 117
5.18 Установление срока годности «Золотарника кавказского травы» 118
Выводы по главе 120
ГЛАВА 6 Предварительные технологические исследования по разработке «золотарника кавказского травы экстракта сухого», стандартизация полученного экстракта и предварительное изучение его фармакологической активности 121
6.1 Получение «Золотарника кавказского травы экстракта сухого» 121
6.2 Разработка методик стандартизации «Золотарника кавказского травы
экстракта сухого» 122
6.2.1 Общие показатели 122
6.2.2 Изучение фенольных соединений 124
6.2.3 Количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин методом дифференциальной спектрофотометрии 125
6.2.4 Количественное определение фенолкарбоновых кислот в пересчете на кофейную кислоту методом спектрофометрии
6.3 Установление срока годности «Золотарника кавказского травы экстракта сухого» 131
6.4 Предварительное изучение фармакологической активности
6.4.1 Определение «острой» токсичности «Золотарника кавказского травы» 133
6.4.2 Патоморфологические изменения в органах, вызванные введением извлечения из травы золотарника кавказского в дозе 10000 мг/кг 134
6.4.3 Изучение диуретической активности «Золотарника кавказского травы экстракта сухого» 140
6.4.4 Изучение антибактериального действия «Золотарника кавказского травы экстракта сухого» 141
Выводы по главе 144
Заключение 145
Список литературы
- Химический состав изученных видов рода Золотарник
- Определение числовых показателей
- Расчет объема ежегодных заготовок
- Морфологическая характеристика корневищ с корнями золотарника кавказского
Химический состав изученных видов рода Золотарник
В народной медицине настой и отвар травы золотарника обыкновенного используется как диуретическое, антисептическое, противовоспалительное средство при болезнях почек и мочевого пузыря (мочекаменная болезнь, холецистит, язвенный цистит, энурез), гипертрофии предстательной железы. Однако, сфера применения золотарника намного шире. Он оказывает вяжущее, потогонное, отхаркивающее, гемостатическое действие, применяется при желчнокаменной болезни, сахарном диабете, бронхиальной астме, туберкулезе легких, острых респираторных инфекциях, остром ларингите, ангине, коклюше, подаг 23
ре, артритах, энтерите, колите, меноррагии, белях, экземе, асците. В Молдавии, Белоруссии соцветия используют наружно в смеси со сливками, свиным жиром или сливочным маслом при туберкулезе кожи, дерматитах, ожогах, ревматизме. В Коми АССР, на Кавказе, в Сибири – при скрофулезе. В китайской народной медицине семена золотарника обыкновенного применяют для разжижения крови и устранения вздутия кишечника, а также при нарушениях менструального цикла, холере, диарее, появлении крови в моче у детей. На Кавказе настойки подземной части золотарника применяются в качестве ранозаживляющего средства [43].
Применение золотарника в научной медицине
Золотарник обыкновенный, з. канадский и з. гигантский включены в Европейскую фармакопею [108], з. канадский и з. гигантский – в Британскую травяную фармакопею [90]. В СССР была разработана ФС «Трава золотарника канадского» [69]. Для видов рода Золотарник установлен целый спектр фармакологической активности. Мочегонная активность Флавоноидная фракция золотарника обыкновенного в дозе 25 мг/кг показывала увеличение диуреза у крыс на 88% через 24 ч по сравнению с контрольным образцом (NaCl, 5 мл, пероральное введение), при этом наблюдалось снижение ночной экскреции калия и натрия и увеличение экскреции кальция.
Значительное увеличение диуреза у крыс с повышенным выведением натрия, калия и хлорид–ионов наблюдалось после приема внутрь золотарника обыкновенного (0,3% флавоноидов, 4,64 мл / кг и 10,0 мл / кг). Причем низкая доза оказалась более эффективной [146].
Противовоспалительная активность Противовоспалительная активность сапонинов золотарника обыкновенного была испытана на модели отека у крыс. В результате наблюдалось значительное снижение отека после внутривенного введения 1,25-2,5 мг/кг комплекса тритерпеновых сапонинов [121, 125]. Лабдановые дитерпены, выделенные из золотарника чилийского, при хло-ровородно–этанольно индуцированных поражениях желудка у мышей проявили гастропротектиновую активность [147].
Дитерпен солидагогенон, содержащийся в водном экстракте из соцветий золотарника чилийского, также проявил гастропротективную активность [111].
На крысах был протестирован препарат Phytodolor на противовоспалительную, обезболивающую и жаропонижающую активность. Активность была такой же, как и у стандартных образцов салицилового спирта и индометацина [137, 138, 150].
Сапонины, флавоноиды и кофейная кислота, выделенные из золотарника обыкновенного ингибировали активность лейкоцитарной эластазы и протеазы, участвующих в прогрессировании воспаления. Сапонины стимулировали синтез и высвобождение глюкокортикоидов в надпочечниках [131].
Водный экстракт золотарника обыкновенного значительно подавлял воспалительную реакцию на коже морских свинок, индуцированную рентгеновским излучением [156]. 46% водно–спиртовый экстракт золотарника чилийского оказывал противовоспалительную активность за счет ингибирования дигидрофолат редуктазы.
Лейокарпозид, выделенный из золотарника чилийского, оказывал противовоспалительный и болеутоляющий эффект [111, 154].
Выделенная из золотарника гигантского 3,5–ди–О–кофейная кислота обладала противовоспалительными свойствами, не имея побочных эффектов, и поэтому исследовалась как потенциальное лекарственное средство [159].
Антиоксидантная активность Водно–спиртовый экстракт золотарника обыкновенного как компонент препарата Phytodolor ингибировал образование активных форм кислорода [142]. Анальгетическая активность Экстракт золотарника обыкновенного проявлял анальгетическую активность, воздействуя на брадикининовые рецепторы [107, 132]. Установлена эффективность жидкого экстракта золотарника чилийского при лечении люмбаго: в течение 15 дней кожу смазывали гелем, содержащим 5% экстракта золотарника чилийского, и добились значительного анальгетиче-ского эффекта [109]. Спазмолитическая активность Наличие флавоноидов (кверцетин и кемпферол) в золотарнике обыкновенном обуславливало установленное вазодилаторное действие, зависящее от ингибирования протеинкиназы С, ингибирования фосфодиэстеразы и циклических нуклеотидов, а также уменьшения поступления ионов Ca2 + [103].
Определение числовых показателей
Наличие биологически активных веществ в траве и корневищах с корнями з. кавазского устанавливали с помощью общепринятых качественных реакций [4, 35, 40, 71, 72].
Для обнаружения флавоноидов использовали спиртовое извлечение (спирт этиловый 70%) в соотношении 1:10, с которым проводили цианидино-вую пробу (восстановление магнием в присутствии хлористоводородной кислоты концентрированной) и реакцию с алюминия хлоридом.
Для установления наличия тритерпеновых сапонинов готовили водное извлечение 1:10 кипячением на водяной бане в течение 10 минут, охлаждали и фильтровали. В 2 пробирки помещали по 2 мл фильтрата. В первую пробирку прибавляли хлористовородную кислоту 0,5 М, во вторую – натрия гидроксид 0,5 М. Пробирки встряхивали и наблюдали пену как в кислой, так и в щелочной средах (тритерпеновые сапонины). Для проведения реакции Либермана– Бурхарда навеску травы золотарника кавказского (10,0 г) обезжиривали бензолом, проводили экстракцию последовательно хлороформом и метанолом. Мета-нольное извлечение упаривали и к сухому остатку прибавляли укусный ангидрид и серную кислоту концентрированную.
Присутствие дубильных веществ определяли в водном извлечении (мас-со–объемное соотношение 1:10, продолжительность экстракции 5 мин) по реакции с раствором квасцов железоаммонийных.
Для обнаружения кумаринов была использована лактонная проба. Готовили извлечение из сырья золотарника кавказского спиртом этиловым 95% в соотношении 1:10 путем кипячения в течение 15–20 мин на водяной бане с обратным холодильником. К 5 мл приготовленного извлечения прибавляли 10 капель спиртового раствора натрия гидроксида 10% и нагревали на водяной бане. Затем добавляли 10 мл воды и 15 капель хлористоводородной кислоты 10%. Идентификацию аминокислот проводили в кислотном извлечении (хлористоводородная кислота, массо–объемное соотношение 1:10, температура 70 С, 10 мин) по биуретовой реакции и реакции с нингидрина раствором.
Обнаружение углеводов осуществляли с помощью реакции Бертрана и со спиртом этиловым 95%.
Для проведения хроматографического анализа использовалась хромато-графическая бумага «Filtrak», а также пластинки «Sorbfil» (ПТСХ–П–В–УФ). Пластинки для ТСХ–анализа предварительно выдерживали в сушильном шкафу при температуре 100–105 С в течение 1 часа с целью их активирования. Методика обнаружения: на линию старта хроматографической пластинки размером 1515 или хроматографической бумаги наносили с помощью микрошприца по 5 мкл или 10 мкл соответственно извлечения из травы з. кавказского. Параллельно наносили по 5 мкл растворов рабочих стандартных образцов. Хроматографи-ческие камеры предварительно насыщали парами растворителей в течение 40 – 60 мин в случае ТСХ и в течение 12–16 часов в случае бумажной хроматографии. Хроматографирование осуществляли восходящим способом в герметично закрытой камере, содержащей соответствующую систему растворителей.
Анализ хроматограммы проводили, когда фронт растворителя достигал 13 см для ТСХ или 40 см для БХ. После хроматографирования пластинки высушивали на воздухе под вытяжным шкафом, просматривали в видимом и УФ–свете, обрабатывали определенным реагентом с помощью пульверизатора [1, 32, 75].
ВЭЖХ использовалась для анализа фенольных соединений и органических кислот. Анализ проводили на хроматографе фирмы «Gilston» с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для «Windows».
Идентификацию разделенных веществ проводили путем сопоставления времен удерживания пиков, полученных на хроматограмме пробы, со временами удерживания растворов стандартных образцов. Оценку количественного со 33 отношения идентифицированных веществ проводили по площади пиков, используя метод внутренней нормализации [29].
Для установления моносахаридного состава углеводов проводили их ки слотный гидролиз. Нейтральные сахара идентифицировали методом ГЖХ. ГЖХ – анализ образцов снимали на хроматографе Сhrom-5 с пламенно– ионизационным детектором, стеклянная колонка (1,5 м 0,3 м) 5% Silicone XE – 60 на хроматоне NAW – 0,2000,250 меш, 210 С; газ–носитель – гелий, 30 мл/мин в виде ацетатов альдононитрилов.
Также для анализа БАС травы золотарника кавказского использовали хромато–масс–спектрометр AT–5850/5973 Agillent Technologies (США). Масс– спектрометр квадрупольный с диапазоном масс 2 – 950 а.е.м. имеет разрешающую способность 0,5 а.е.м. во всем рабочем диапазоне. Ионизация электронами 70 эВ. Чувствительность прибора составляет 0,01 нг по метилстеарату. Для хроматографического разделения пробы использовали капиллярную колонку из плавленого кварца длиной 25 м и внутренним диаметром 0,25 мм. Неподвижная фаза НР–5ms Хьюлетт–Паккард с толщиной слоя 0,2 мкм. Хроматогра-фирование проводили в режиме программирования температуры от 135 до 320 С со скоростью 7 град/мин. Температура инжектора и интерфейса 280 С. Обработку данных проводили с помощью штатных программ прибора. Вещества в хроматографических пиках идентифицировали с помощью библиотечных программ с базой данных масс–спектров NIST.
Расчет объема ежегодных заготовок
При рассматривании ложноязычковых цветков с обеих сторон видны прямоугольные клетки эпидермиса с прямыми или слабоизвилистыми равномерно утолщенными стенками, с округлыми хроматопластами (рисунок 4.18). Кутикула поперечно-морщинистая, устьица не обнаружены (рисунок 4.19). У основания цветка имеются простые многоклеточные тупоконусовидные волоски, тонкостенные с гладкой поверхностью (рисунок 4.20).
При рассмотрении эпидермиса трубчатого цветка (рисунок 4.21-1) видны прямоугольные клетки с прямыми или слабоизвилистыми равномерно утолщенными стенками, с многоугольными хроматопластами (рисунок 4.21-3). Кутикула поперечно-морщинистая, устьица не обнаружены (рисунок 4.21-2). По краю цветка встречаются пучковые волоски, состоящие их нескольких клеток, сросшихся друг с другом (рисунок 4.21-4). Рисунок 4.18 – Фотография строения эпидермиса ложноязычкового цветка золотарника кавказского (ув. 128) Хроматопласты и морщинистость кутикулы ложноязычкового цветка Простые волоски у основания ложноязычкового цветка золотарника кавказского (ув. 128) Имеются многочисленные простые многоклеточные волоски с толстой стенкой и тонкой полостью внутри. Некоторые волоски двухконечные (рисунок 4.21-5). Пыльца округлая, поверхность шиповатая, трехбороздная (рисунок 4.21-6). 2 - складчатость кутикулы (ув. х160); 3 - хроматопласты (ув. х160); 4 - пучковые волоски (ув. х128); 5 - простые волоски (ув. х128); 6 - пыльца (ув. х640) Клетки эпидермиса листочков обвертки также прямоугольные с прямыми или слабоизвилистыми равномерно утолщенными стенками и поперечно-морщинистой кутикулой. Имеются многочисленные устьица. Устьичный аппарат аномоцитного типа, околоустьичных клеток 4-6. Замыкающие клетки устьиц чечевицевидные или сферовидные. Устьица расположены в одной плоскости с эпидермисом. Головчатые волоски на одноклеточной ножке с одно-, двух-клеточной головкой (рисунок 4.22). По краю цветка располагаются сосочковид-ные выросты (рисунок 4.23-1). На поверхности видны простые многоклеточные остроконусовидные и бичевидные волоски (рисунок 4.23-2). По краю листочков располагаются бахромчатые волоски (рисунок 4.23-3). Эфирномасличные железки ярусного типа (рисунок 4.23-4).
Анализ проводили в соответствии с указаниями статьи «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» и по методике приготовления микропрепаратов измельченной (резаной или порошка) травы (листья, цветки, стебли) (ГФ XI, в. 1, с. 278 [16]).
При рассмотрении микропрепаратов (рисунок 4.25) с поверхности верхней стороны листа видны изодиаметрические клетки эпидермиса многогранной, овальной или округлой формы со слабоизвилистыми равномерно утолщенными стенками. Клетки нижнего эпидермиса мельче, с более извилистыми боковыми стенками. Местами может наблюдаться слабо выраженная морщинистость кутикулы (продольно–морщинистая). Устьичный аппарат аномоцитного типа; околоустьичных клеток 4-5. Они такой же формы, как и покровные клетки эпидермиса. Замыкающие клетки устьиц чечевицевидные овальной формы. Устьица расположены в одной плоскости с эпидермисом. Волоски железистые и простые. Железистые короткие на одно–, двухклеточной ножке и с одноклеточной головкой, их места прикрепления обычные. Волоски простые многоклеточные остроконусовидные, тонкостенные с гладкой поверхностью; места их прикрепления обычные или у основания некоторых волосков образуется розетка из клеток эпидермиса. Пыльца округлая, поверхность ее шиповатая, трехбо-роздная.
Таким образом, для цельного и измельченного сырья «Золотарника кавказского трава» можно выделить следующие диагностические признаки: клетки эпидермиса с извилистыми стенками и слабо выраженной продольно– морщинистой кутикулой. На обеих сторонах листа встречаются многочисленный волоски и железки. Волоски простые многоклеточные остроконусовидные, тонкостенные с гладкой поверхностью; места их прикрепления обычные или у основания некоторых волосков образуется розетка из клеток эпидермиса. Желе 65 зистые волоски короткие на одно-, двухклеточной ножке и с одноклеточной головкой. 3 Рисунок 4.25 – Микрофотографии измельченного сырья золотарника кавказского (ув. 640): 1 – эпидермис верхней стороны листа; 2 – эпидермис нижней стороны листа; 3 – волоски простой и железистый; 4 – пыльца Характерной особенностью золотарника кавказского является то, что участки колленхимы коры стебля чередуются с хлоренхимой, а эндодерма содержит хлоропласты. На эпидермисе листочков обвертки встречаются эфирномас 66 личные железки ярусного типа. Пыльца округлая, поверхность шиповатая, трехбороздная. Микроскопический анализ порошка «Золотарника кавказского травы» Анализ проводили в соответствии с указаниями статьи «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» и по методике приготовления микропрепаратов порошка травы (ГФ XI, в. 1, с. 278 [16]).
При рассмотрении микропрепаратов порошка (рисунок 4.26) видны обрывки элементов эпидермиса многогранной, овальной или округлой формы со слабоизвилистыми или извилистыми равномерно утолщенными стенками. Устьичный аппарат аномоцитного типа; околоустьичных клеток 4-5. Они такой же формы, как и покровные клетки эпидермиса. Замыкающие клетки устьиц чечевицевидные овальной формы. Видны железистые волоски и обрывки простых волосков. Железистые короткие на одно–, двухклеточной ножке и с одноклеточной головкой, их места прикрепления обычные. Волоски простые многоклеточные остроконусовидные, тонкостенные с гладкой поверхностью; места их прикрепления обычные или у основания некоторых волосков образуется розетка из клеток эпидермиса. Видны обрывки сосудов. Пыльца округлая, поверхность ее шиповатая, трехбороздная.
Морфологическая характеристика корневищ с корнями золотарника кавказского
Для изучения углеводов травы золотарника кавказского навеску сырья (30,0 г) двукратно экстрагировали хлороформом (100 мл) с последующим высушиванием.
Затем остаток сырья дважды экстрагировали кипящим спиртом этиловым 82% для выделения спирторастворимых сахаров (СРС). Полученные экстракты упаривали и хроматографировали на бумаге Filtrak FN 7, 12 в системе бутанол– пиридин–вода (6:4:3) в течение 17-18 часов со стандартными образцами нейтральных моносахаридов. СРС по данным БХ представлены глюкозой, галактозой (проявитель кислый фталат анилина), фруктозой и сахарозой (проявитель 5% мочевина). Идентификацию углеводов проводили в сравнении со стандартными образцами и по величине Rf.
Затем проводили выделение полисахаридов, последовательно экстрагируя водорастворимые полисахариды водой (ВРПС), смесью растворов щавелевой кислоты и аммония оксалата – пектиновые вещества (ПВ), раствором щелочи – гемицеллюлозы (ГМЦ).
Шрот, полученный после экстракции спиртом этиловым 82%, высушивали и проводили трехкратную экстракцию водой в соотношении 1:10; 1:5; 1:2 в условиях постоянного промешивания. Извлечения объединяли, фильтровали, упаривали при пониженном давлении с использованием роторного испарителя до 1/5 первоначального объема извлечения при температуре 45-50 С, затем осаждали трехкратным объемом спирта этилового 95%. Осадок центрифугировали, промывали спиртом этиловым, обезвоживали ацетоном, высушивали и взвешивали.
Для выделения пектиновых веществ остаток сырья, полученный после проведения предыдущих операций, экстрагировали смесью растворов щавелевой кислоты 0,5% и аммония оксалата 0,5% в равных пропорциях в соотношении шрот – экстрагент 1:5, 1:4 и 1:2 на водяной бане при 85-90 С в течение 3 часов. Далее экстракты объединяли, центрифугировали и диализовали. Проводили упаривание полученного извлечения до 1/20 первоначального объема, осаждали шестикратным объемом спирта этилового 95%. Полученный осадок центрифугировали, промывали спиртом этиловым, высушивали и взвешивали.
Для выделения гемицеллюлоз полученный остаток сырья экстрагировали четырех- и трехкратным объемом натрия гидроксида 5% при комнатной температуре. Полученные экстракты объединяли, нейтрализовали уксусной кислотой, диализовали, упаривали диализат до 1/10 первоначального объема и осаждали трехкратным объемом спирта этилового 95%. Осадок очищали, высушивали, как описано выше, и взвешивали.
Для установления моносахаридного состава углеводов проводили их кислотный гидролиз серной кислотой 10% в соотношении 1:4,9 при температуре 100-105 C в течение 10 часов для ВРПС; 24 ч – ПВ; 72 ч – для ГМЦ в запаянных ампулах [53, 54]. Затем содержимое ампул переносили в стаканчики, ампулы промывали 5 мл воды, нейтрализовали бария карбонатом по универсальному индикатору до нейтральной среды. Полученные растворы фильтровали, фильтры промывали водой до объема фильтратов 10 мл. Далее прибавляли трехкратный объем спирта этилового 95%, тщательно перемешивали, отстаивали 1-2 ч и образовавшиеся осадки фильтровали. Фильтраты упаривали на кипящей водяной бане до объема около 1 мл. Осадки бариевых солей уроновых кислот деио-низировали катионитом КУ-2 (Н+) до рН 3-4. Растворы фильтровали, упаривали до получения объема около 1 мл раствора.
Нейтральные сахара идентифицировали методом ГЖХ. ГЖХ – анализ образцов снимали на хроматографе Сhrom – 5 с пламенно–ионизационным детектором, стеклянная колонка (1,5 м 0,3 м) 5% Silicone XE – 60 на хроматоне NAW – 0,2000,250 меш, 210 С; газ-носитель – гелий, 30 мл/мин, в виде ацета 105
тов альдононитрилов. По количеству составляющих моносахаридов выделенные ВРПС и ПВ относятся к галактанам, ГМЦ – ксиланам. Наибольшее количество галактозы обнаружено во фракциях ПВ. Основными по содержанию являются фракции ПВ и ГМЦ.
Количество уроновых кислот определяли фотоэлектроколорометрическим методом по реакции взаимодействия с карбазолом в сернокислой среде [21]. Глюкуроновые кислоты идентифицированы во всех фракциях, особенно в ПВ.
Количественное определение свободных (Кс) и этерифицированных (Кэ) карбоксильных групп проводили титриметрическим методом с потенциометри-ческой фиксацией точки эквивалентности на рН-метре марки «рН-340» [11] с последующим вычислением степени этерификации.
ВРПС представляют собой порошок темно–коричневого цвета. При растворении в воде имеют показатель вязкости 3,0 (с 1%, вода). Титрометрическим методом установлено Кс = 1,98%, Кэ = 4,6%. Степень этерификации при этом составляет 69,9%. Следовательно, ВРПС являются высокоэтерифицированны-ми, что является основанием для их рекомендации к использованию в качестве вспомогательных веществ при приготовлении лекарственных форм: гелеобразо-вателей, загустителей, стабилизаторов и др.
Пектиновые вещества представляют собой порошок темно–коричневого цвета, при нагревании растворяются в воде, образуя вязкие растворы (коэффициент вязкости 10,17). Содержание Кс = 6,75%, Кэ = 3,78%, = 35,89%. Следовательно, ПВ являются низкоэтерифицированными, а достаточно высокое содержание свободных карбоксильных групп делает перспективным данный растительный объект для выделения пектинов с выраженными сорбционными свойствами, особенно в отношении ионов металлов.
На основании анализа выявленных характеристических полос поглощения в ИК–спектрах углеводных образцов [20] можно сделать следующее заключение.
Практически во всех спектрах анализируемых фракций в областях 3300– 3700 см–1 наблюдается широкая и интенсивная полоса валентных колебаний, как первичных, так и вторичных OH–групп, ассоциированных внутри– и межмолекулярными водородными связями. Наличие данной полосы поглощения можно объяснить присутствием характерных донорно–акцепторных водородных связей гидроксила с замещенным гидроксилом. В области 2930-2810 см–1 находятся полосы валентных колебаний СН–групп.
Наличие выраженных полос валентных колебаний в областях 1758-1605 см–1 и 1479-1412 см–1 характерно для несимметричных и симметричных ионизированных карбоксильных групп соответственно, что предполагает присутствие кислот, прежде всего уроновых, по–видимому, связанных электростатической связью с ионами некоторых S–металлов.