Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Современное состояние исследований в области ботаники, интродукции, химического состава, пищевого и медицинского использования артишока колючего 12
1.1 Ботаническая характеристика рода Артишок (CynaraL.) 12
1.2 Ботаническая характеристика видов рода артишок 13
1.2.1 Артишок колючий 13
1.2.2 Артишок испанский 15
1.2.3 Артишок низкий 16
1.3 Культивирование артишока колючего 16
1.4 Химический состав артишока колючего 19
1.4.1 Оксикоричные кислоты 19
1.4.2 Флавоноидные соединения 21
1.4.3 Другие группы биологически активных соединений 22
1.5 Биологическое действие и применение артишока колючего в медицине 23
1.6 Артишок как ценное пищевое растение 29
Заключение по главе 1 30
Экспериментальная часть 32
Глава 2 Объекты и методы исследований 32
2.1 Объекты исследований 32
2.2 Микроскопические исследования 33
2.3 Определение числовых показателей 33
2.4 Определение микробиологической чистоты 33
2.5 Фитохимическое исследование групп БАС листьев артишока колючего 33
2.5.1 Качественный и количественный анализ фенольных соединений методом ВЭЖХ 36
2.6 Изучение фармакологической активности 38
Глава 3 Изучение интродукции артишока колючего на Кавказских Минеральных Водах 40
Выводы по главе 3 45
Глава 4 Морфолого-анатомическое и товароведческое изучение сырья артишока колючего, выращиваемого на Северном Кавказе 46
4.1 Морфологическое изучение артишока колючего 46
4.2 Анатомо-диагностическое изучение вегетативных и генеративных органов артишока колючего 48
4.2.1 Лист : 48
4.2.2 Листочек обвертки соцветия 56
4.3 Определение товароведческих показателей листьев артишока колючего 58
4.3.1 Определение числовых показателей листьев артишока колючего 58
4.3.2 Микробиологическая чистота сырья артишока.колючего 59
Выводы по главе 4 60
Глава 5 Фотохимическое изучение листьев артишока колючего 62
5.1 Качественный анализ 62
5.2 Количественное определение биологически активных веществ листьев артишока колючего 5.2.1 Определение фенольных соединений 65
5.2.2 Идентификация и количественное определение суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего методом спектрофотометрии 68
5.2.3 Определение дубильных веществ 71
5.2.4 Определение свободных органических кислот 71
5.2.5 Определение кислоты аскорбиновой 72
5.2.6 Макро- и микроэлементный состав листьев артишока колючего 73
5.2.7 Выделение и исследование полисахаридов артишока колючего 75
5.2.8 Изучение аминокислотного состава листьев артишока колючего 77
Выводы по главе 5 79
Глава 6 Разработка лекарственного средства на основе листьев артишока колючего 81
6.1 Разработка способа количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего 81
6.2 Выбор оптимальных условий получения водного сухого экстракта из свежих листьев артишока колючего 87
6.3 Изучение качественного и количественного состава фенольных соединений в экстрактах, полученных из листьев артишока колючего 91
6.4 Количественное определение суммы оксикоричных кислот в экстракте листьев артишока колючего сухом 94
Выводы по главе 6 97
Глава 7 Фармакологическое изучение водного сухого экстракта из листьев артишока колючего 98
7.1 Определение острой токсичности 98
7.2 Исследование гепатопротекторной активности 99
7.3 Исследование желчегонной активности 103
Выводы по главе 7 104
Общие выводы 105
Литература 106
- Оксикоричные кислоты
- Лист
- Разработка способа количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего
- Исследование желчегонной активности
Введение к работе
Актуальность темы
Рост числа заболеваний печени и желчевыводящих путей представляет одну из важных медицинских проблем. Это связано с тем, что во всем мире ухудшаются экологические условия, увеличивается поступление химических средств в организм человека в виде различных добавок к пище, консервантов, ароматизаторов, красителей и удобрений. Кроме того возрастает потребление лекарственных средств синтетического происхождения и алкогольных напитков. Все это оказывает в первую очередь вредное влияние на функцию печени.
Для лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей в настоящее время в мировой практике имеется достаточно большой ассортимент лекарственных средств синтетического и природного происхождения. Однако следует отметить, что при заболеваниях печени необходимо отдавать предпочтение растительным средствам, т.к. синтетические лекарственные средства могут проявлять побочное действие.
Анализируя литературные сведения можно отметить, что число растительных средств, применяемых для лечения указанных заболеваний, сравнительно невелико и на фармацевтическом рынке России представлено преимущественно лекарственными препаратами, полученными из сырья расторопши пятнистой, бессмертника песчаного, тысячелистника обыкновенного, полыни горькой, чистотела большого, мяты перечной, куркумы длинной и др..
Используя опыт народной медицины, за рубежом разработаны и применяются гепатопротекторные лекарственные фитопрепараты Хофитол» (Франция), «Экстракт артишоков» (Германия), «Гербеон» (Словения), а также биологически активные добавки «Цинарикс», « Гефитол» (Вьетнам).
Большой интерес представляет изучение растительных объектов, которые применяются как пищевые и в то же время могут содержать биологически активные вещества, проявляющие гепатопротекторную и желчегонную активность. К числу таких объектов нужно отнести артишок колючий (Cynara scolymus L.) сем. астровые (Asteraceae). Этот вид применяется как пищевой продукт и лекарственное растение особенно в странах Западной Европы. Его пищевая ценность объясняется наличием таких биологически активных веществ как полифенольные соединения, полисахариды, органические кислоты и др. Однако в России лекарственные препараты артишока не выпускаются. Это связано с отсутствием достаточной сырьевой базы и недостаточным фармакогностическим изучением артишока, культивируемого на территории РФ. Решение вопросов перспективы интродукции артишока колючего, его фитохимической оценки позволит обеспечить фармацевтические производства сырьем и наладить выпуск ценных гепатопротекторных и желчегонных средств.
Поэтому фармакогностическое изучение артишока колючего и возможности его интродукции на Северном Кавказе является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики.
Цель и задачи исследования
Целью работы является фармакогностическое изучение нового для России лекарственного растения артишока колючего, интродуцированного в условиях Кавказских Минеральных Вод (КМВ) и создание на его основе отечественного лекарственного средства, обладающего гепатопротекторным и желчегонным действием.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
– выявить возможность интродукции артишока колючего в условиях КМВ и разработать элементы технологии возделывания его из семян марокканского экотипа;
– провести сравнительный химический анализ сырья артишока колючего, культивируемого в условиях КМВ и марокканского образца;
– выявить характерные анатомо-диагностические признаки вегетативных и генеративных органов, подтверждающие подлинность растительного сырья, и установить основные числовые показатели сырья, определяющие его качество;
– выбрать оптимальную технологию сухого экстракта на основе сырья артишока колючего;
– разработать нормы качества сырья (листьев) артишока колючего и сухого экстракта, полученных из свежих листьев;
– изучить острую токсичность, гепатопротекторную и желчегонную активность, сухого экстракта, полученного из свежих листьев артишока колючего;
– разработать проект ФСП «Артишока колючего листья, свежие».
Научная новизна
На основании изучения биологии развития артишока колючего в условиях Северного Кавказа и сравнительной оценки культуры в условиях Марокко установлена возможность его выращивания в условиях КМВ. Показано, что урожайность артишока колючего в условиях культуры может достигать 400-420 ц/га), которая приближается к урожайности артишока в условиях культуры в Марокко.
В результате фитохимического анализа листьев артишока колючего, выращенного в Марокко и на КМВ, установлена идентичность образцов и наличие:
- флавоноидов, оксикоричных кислот, дубильных веществ, сесквитерпеновых лактонов, кислоты аскорбиновой, алкалоидов, тритерпенов и стеринов, углеводов, белков;
- 15 аминокислот (аспарагиновая кислота, аргинин, серин, глутаминовая кислота, глицин, аланин, изолейцин, треонин, лейцин, тирозин, валин, фенилаланин, гистидин, лизин, и метионин), последние 8 – являются незаменимыми аминокислотами.
- моносахаридного состава полисахаридов (методом ГЖХ): водорастворимые полисахариды (ВРПС-Х) - 5,1% (ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); водорастворимые полисахариды (ВРПС-Г) - 0,78% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); пектиновые вещества (ПВ) - 2,4% (рамноза, ксилоза, арабиноза, галактоза, уроновые кислоты); гемицеллюлоза (ГМЦ) - 2,63% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты);
- 5 макроэлементов (натрий, калий, кальций, магний, фосфор), и 16 микроэлементов (медь, серебро, молибден, литий, свинец, кобальт, никель, ванадий, хром, железо, бор, алюминий, кремний, марганец);
- 12 фенольных соединений (методом ВЭЖХ): флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, гиперозид, дигидрокверцетин, витексин, рутин, ориентин, гесперидин); кумарины (4-оксикумарин); оксикоричные кислоты (кофейная кислота, хлорогеновая кислота, неохлорогеновая кислота); фенологликозиды (арбутин).
Из свежих и сухих листьев артишока колючего получены сухие экстракты. Методом ВЭЖХ в экстракте из сухих листьев обнаружено 15 веществ, идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, рутин, гиперозид, апигенин, робинин); фенолокислоты (галловая кислота, цикориевая кислота); оксикоричные кислоты (кофейная кислота, хлорогеновая кислота, неохлорогеновая кислота, феруловая кислота). В полученном экстракте из свежих листьев обнаружено 35 веществ, методом ВЭЖХ идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (рутин, кверцетин, лютеолин, виценин, апигенин); кумарины (умбелиферон, 4-оксикумарин); фенолокислоты (салициловая кислота); оксикоричные кислоты (хлорогеновая кислота, кофейная кислота, неохлорогеновая кислота).
Разработаны нормы подлинности и качества для листьев артишока колючего, методики количественного определения действующих веществ в сухих экстрактах из сухих и свежих листьев артишока колючего.
В опытах in vivo показано, что по гепатопротекторной и желчегонной активности сухие экстракты не уступают препарату сравнения «Хофитол», являются практически нетоксичными веществами.
Практическая значимость
Выявлена возможность выращивания артишока колючего на КМВ (урожайность 420 ц/га) и использования для России нового вида лекарственного сырья – листьев артишока колючего для получения лекарственных средств, обладающих гепатопротекторной и желчегонной активностью.
Разработаны методики качественного и количественного анализа сырья артишока колючего, основанные на обнаружении фенольных соединений, полисахаридов и аминокислот с использованием методов тонкослойной хроматографии (ТСХ), спектрофотометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Разработаны нормы качества листьев артишока колючего и сухого экстракта из него, с учетом современных требований, предъявляемых к подлинности и качеству лекарственного растительного сырья.
Разработана технология сухого экстракта из листьев артишока колючего, выращиваемого на КМВ.
Материалы внедрения
Результаты исследований по гепатопротекторной и желчегонной активности сухого экстракта из свежих листьев артишока колючего внедрены в учебный процесс в виде информационного письма на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», что подтверждено актом внедрения от 9 апреля 2007 г.
Проект ФСП на лекарственное растительное сырьё «Листья артишока колючего, свежие» передан ЗАО «Вифитех» (Россия) (акт внедрения от 9 апреля 2007 г.).
Апробация и публикация результатов исследования
Фрагменты диссертации докладывались и обсуждались на VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001) и четырёх региональных научных конференциях по проблемам фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1999 – 2001, 2003).Основное содержание диссертации опубликовано в 9 научных работах, в том числе в трех журналах, рекомендуемых ВАК.
Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации 01.200.112164).
Положения, выносимые на защиту:
- результаты интродукционных исследований артишока колючего в условиях КМВ;
- результаты изучения показателей подлинности (морфолого-анатомическая диагностика) и качества листьев артишока колючего (числовые товароведческие показатели, нормирующие качество исследуемого сырья, содержание основных биологически активных соединений в сырье);
- обоснование технологии сухого экстракта из листьев артишока колючего;
- результаты изучения острой токсичности, гепатопротекторной и желчегонной активности сухого экстракта из листьев артишока колючего.
Объём и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 119 страницах, состоит из введения, обзора литературы, шести (2-7) глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, приложений. Работа иллюстрирована 21 рисунком и 28 таблицами. Библиография включает 166 источников, из которых 80 на иностранных языках.
Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.
Оксикоричные кислоты
Ещё в 1931 г. Е. Chabrol с соавторами отметили, что «активным началом» является циклическое вещество фенольного характера, названное впоследствии «ци-нарином». Позже, в 1934 г., G.E. Rosa сообщил о выделении из артишока кристаллического вещества, обладающего спиртовыми и кислотными свойствами [149]. Только в 1954 г P. Panizzi и M.L. Scarpati впервые предложили структуру цинарина как 1,4-дикофеилхинную кислоту [142, 143]. Спустя 10 лет те же авторы [144] в результате химических превращений цинарина и его синтеза показали что в водных экстрактах из свежих листьев артишока находится 1,5- дикофеилхинная кислота. Причиной затруднений при установлении химического строения цинарина явилось то обстоятельство, что сложные эфиры хинной кислоты обладают свойством-внутримолекулярной переэтерификации, т.е. миграции цинамоильных радикалов по ОН группам хинной кислоты. Это свойство впервые отметили Т. Haslam с соавторами при синтезе оксикоричных эфиров хинной кислоты. Переэтерификация происходит довольно легко уже при нагревании в течение 30 мин при температуре 100 С в буферном растворе (рН 7,2) или при облучении раствора УФ-светом [26]. В спиртовом экстракте цинарин не обнаруживается и появляется только в экстрактах, полученных кипящей водой [93, 95, 101]. Исследователи пришли к заключению, что цинарин (1,5-дикофеилхинная кислота, температура плавления 226-227 С, [а]= -59, концентрация метанольного раствора 2%) является вторичным продуктом, а его предшественником 1,3-дикофеилхинная кислота, что было позднее подтверждено работами J. Michaud [88, 130, 131].
Хлорогеновая (1) и кофейная (2) кислоты из свежих листьев артишока были выделены также M.L. Scarpati с соавторами [100, 150].
Химические структуры этих кислот были установлены K.Freudenberg и H.O.L. Friher [90, 109]. Свойства кофейной и хлорогеновой кислот подробно описаны в обзоре R. Herrmann [115].
В 1963 г M.L. Skarpati и P. Esposito выделили из артишока колючего 5 кофеилхинную и 4-кофеилхинную кислоты, соответственно получившие названия неохлорогеновой (3) и криптохлорогеновой кислот (4) [26, 87, 118, 152, 153].
Наряду с указанными кислотами, М. Scarpati и M.Guiso удалось выделить из артишока изохлорогеновую кислоту и доказать, что она является смесью трёх кислот: 4,5-, 3,4- и 3,5-дикофеилхинных кислот [102, 146, 151]. При нагревании в фосфатном буферном растворе рН 7,0-7,2 эти кислоты находятся в состоянии равновесия [151, 154].
Все кислоты, выделенные из артишока колючего: цинарин, хлорогеновая, кофейная, неохлорогеновая, криптохлорогеновая, изохлорогеновая - в литературе известны под общим названием «оксикоричные кислоты», «кофеилхинные кислоты», «оксициннамоилхинные кислоты», «ортодиоксифенолы», «полифенолы» [80, 97, 120].
Затруднением при стандартизации растительного сырья и препаратов из артишока является также выбор различных стандартных веществ, например, сухие листья должны содержать 1,7-4,2 % орто-диоксифенолов в пересчёте на кофейную ки слоту, 0,9-1,4 % фенолкарбоновых кислот в пересчёте на цинарин, 0,02-1,4% кофе-илхинных кислот в пересчёте на хлорогеновую кислоту [92, 112].
В процессе вегетации в различных частях растения показана следующая последовательность образования метаболитов в растении: хлорогеновая кислота -хлорогеновая кислота + сколимозид - хлорогеновая кислота+ сколимозид + цинарозид - сколимозид — хлорогеновая кислота+ сколимозид + цинарозид + цинарин. При этом содержание хлорогеновои кислоты в различных частях растения уменьшается по мере увеличения содержания других ортодифенолов [103, 125, 126, 127].
Лист
Для анатомо-диагностического исследования были использованы прикорневые черешковые листья, которые составляют по своей массе основную часть сырья. Черешок листа на поперечном срезе имеет ладьевидную форму. Верхняя поверхность черешка слегка вогнутая, нижняя - выпуклая, сильно ребристая (рис. 3).
Покровная ткань черешка представлена эпидермой, которая по всей поверхности покрыта тонким слоем кутикулы. Клетки верхней эпидермы более крупные, чем клетки нижней эпидермы. На поперечном срезе они имеют квадратную или прямоугольную форму. На эпидерме черешка встречаются редко кроющие простые многоклеточные волоски.
Уголковая колленхима располагается под верхней эпидермой и только по ребрам под нижней эпидермой.
Хлоренхима, представлена 3-4 слоями клеток, которые расположены за верхней колленхимой и между участками колленхимы (в ложбинках) с нижней стороны листа. Остальная часть черешка занята основной паренхимой, в которую погружено большое количество проводящих пучков, клетки паренхимы тонкостенные многогранной формы. Проводящие пучки открытые коллатеральные, длиной от 38,7 мкм до 172,1 мкм, шириной от 23,6 мкм до 86,3 мкм. Вокруг проводящих пучков располагаются смоляные ходы.
На продольном срезе черешка листа (рис. 4) клетки эпидермы имеют прямоугольную форму со слабо утолщенными стенками. Клетки хлоренхимы прямоугольной формы с хлоропластами, крупнее клеток эпидермы. Клетки паренхимы еще более крупные по размеру, четырех-пятиугольной формы с тонкими стенками. Смоляные ходы представлены в виде продольных, тонких каналов. Клетки флоэмы имеют удлинённую форму. Ситовидные пластинки располагаются перпендикулярно оси или под углом. Сосуды ксилемы толстостенные, вытянутой формы. Их стенки утолщены в виде спиралей или колец.
Лист артишока колючего на поперечном срезе имеет дорзовентральный тип строения, характерный для двудольных растений (рис. 5). Эпидерма представлена одним рядом клеток с тонким слоем кутикулы. Клетки верхней эпидермы более крупные, чем нижней. Трихомы эпидермы в виде простых многоклеточных волос ков имеются на верхней и нижней сторонах листа в большем количестве, чем на черешке.
Палисадный мезофилл представлен двумя слоями клеток. Клетки 4-5- угольные вытянутые, в среднем длиной 45,48±6,07 мкм, шириной 20,75±3,08 мкм. Клетки губчатого мезофилла округлой формы диаметром 17,12±0,26 мкм, располагаются 5 51 слоями. На долю палисадного мезофилла приходится 39,1 % паренхимы, губчатого - 47,9 %. На верхнюю и нижнюю эпидерму приходится 13,0 % толщины листовой пластинки.
Жилка листа сильно выпуклая с нижней стороны и ребристая. По жилке листа под эпидермой располагается уголковая колленхима и хлоренхима. В паренхиме располагаются проводящие пучки овальной формы разные по размерам: пять больших пучков длиной 440,06±2,16 мкм, шириной 200,01±1,07 мкм и три маленьких пучка длиной 160,08±0,06 мкм, шириной 60,03±0,83 мкм. Проводящие пучки окружены склеренхимой. В обкладке проводящих пучков имеются смоляные ходы с зернистым содержимым желтого цвета.
При рассматривании эпидермы с поверхности (рис. 6) было установлено, что ее клетки имеют 4-6-угольную форму. Антиклинальные стенки верхней эпидермы прямые.
Клетки верхней эпидермы более крупные, чем клетки нижней эпидермы. Длина их составляет 155,36±5,21 мкм, а ширина 125,41±4,38 мкм. Длина замыкающих клеток устьица составляет 30,11±0,02 мкм, ширина 25,81±0,01 мкм. На площади 1 мм верхней эпидермы расположено до 6 устьиц. Устьичный аппарат аномоцитного типа (рис. 6). На верхней эпидерме встречаются два типа трихом: железистые и кроющие волоски. Железистые волоски на короткой ножке с 2—4-клеточной голов-кой. На 1 мм верхней эпидермы железистых волосков 1-2 штуки, кроющих - 3-4 штуки.
Клетки нижней эпидермы более разнообразные по форме, чем клетки верхней эпидермы. В основном они 4-6-угольные с извилистыми антиклинальными стенками (рис. 7). Клетки нижней эпидермы имеют длину 146,51±8,32 мкм, ширину 125,32±5,16 мкм. Длина замыкающих клеток устьиц составляет 30,11±0,02 мкм, ши-рина 25,81±0,01 мкм. На площади 1 мм" нижней эпидермы расположено до 8 устьиц. Устьичный аппарат аномоцитного типа (рис. 8). На нижней эпидерме имеются такие же два типа волосков, как на верхней эпидерме: железистые и кроющие. На 1 мм нижней эпидермы железистых волосков 2-3 штуки, кроющих волосков 5-6 штук. Кроющие волоски многоклеточные, тонкие, заостренные. На рисунках 9 и 10 представлены два типа трихом (железистые и кроющие).
Разработка способа количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего
Для разработки способа количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего нами были изучены возможности метода спек-трофотометрии. Предварительными исследованиями установлено, что сопутствующие биологически активные вещества, извлекаемые водой (в основном полисахариды и белки) не мешают количественному определению суммы оксикоричных кислот методом УФ-спектрофотометрии.
Из высушенных листьев артишока колючего готовили извлечение по методике: точную навеску измельченного сырья массой около 1,0 г помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, приливали 100 мл спирта этилового 40%, взвешивали колбу с точностью до 0,01 г, нагревали на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Охлаждали, взвешивали, пополнили экстрагентом до первоначальной массы, фильтровали через бумажный фильтр (красная полоса), отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата (раствор А).
1,0 мл раствора А вносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объем раствора до метки раствором кислоты хлористоводородной 0,1 моль/л.
Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно растворителя в интервале длин волн от 200 нм до 400 нм (рис. 16).
Как следует из рисунка 16 спектр поглощения спиртового извлечения из листьев артишока колючего имеет полосу поглощения с максршумом при 328±2 нм, минимум при 265±2 нм и перегиб в области 300-320 нм (рис. 17, кривая 1).
Сравнение с данными литературы показало, что такой характер спектров соответствует полосам поглощения оксикоричных кислот.
Для подтверждения указанного предположения параллельно измеряли спектры поглощения СОВС оксикоричной кислоты, в качестве которого использовали раствор кофейной кислоты (рис. 16, кривая 2). Установлено, что полосы поглощения спиртоводного извлечения из листьев артишока колючего и кислоты кофейной имеют одинаковый характер. Методом добавок установлено, что внесение определенного количества кофейной кислоты в спиртоводное извлечение из листьев артишока колючего вызывает увеличение интенсивности поглощения в области от 270 до 330 нм при сохранении характера полосы поглощения. На рис. 16 наблюдается полоса поглощения с максимумом при 328±2 нм, минимумом при 265±2 нм и перегибом в области 300-310 нм (рис. 16, кривая 3).
В связи с этим количественное определение оксикоричных кислот проводили методом прямой епктрофотометрии, предложенной В.А. Куркиным и модифицированной нами для анализируемого образца.
Методика количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего заключалась в следующем: около 1,0 г (точная навеска) сырья, измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл 40% спирта этилового, закрывали пробкой, взвешивали. Соединяли колбу с обратным холодильником и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Содержимое колбы охлаждали. Закрывали колбу той же пробкой, взвешивали. По терю в массе восполняли тем же растворителем. Фильтровали извлечение через бумажный фильтр (красная полоса), отбрасывая первые 10-15 мл фильтрата.
1,0 мл извлечения помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объем раствора до метки 40% спиртом этиловым (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 25 мл вносили 5,0 мл раствора А, доводили до метки 96%) спиртом этиловым, перемешивали (раствор Б).
Измеряли оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре относительно растворителя в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 330 нм.
Таким образом, установлено, что в листьях артишока колючего содержание фенолокислот в пересчете на кислоту кофейную составляет 2,1±0,1% . Методика количественного определения суммы оксикоричних кислот была проверена на 3 различных концентрациях извлечения из листьев артишока колючего (табл. 17) и методом добавок (табл. 18).
Для первого варианта (табл. 17) в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили соответственно 2,5; 5,0; 10,0 мл раствора А, доводили раствор до метки 96% спиртом этиловым, перемешивали (раствор Б).
Измеряли оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре относительно растворителя в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 330 нм.
Содержание суммы оксикоричных кислот в воздушно-сухих листьях артишока колючего (табл. 17) рассчитывали в пересчете на кофейную кислоту по формуле (1).
Как показали данные таблицы 17, методика количественного определения суммы оксикоричных кислот в пересчете на кислоту кофейную дает правильные и воспроизводимые результаты. Поэтому она может быть использована для стандартизации листьев артишока колючего по содержанию суммы оксикоричных кислот.
Методом добавок проверена правильность методики количесвтенного определения суммы фенолокислот в пересчете на кислоту кофейную.
Для этого в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили 5,0 мл раствора А, 2,5 мл 0,02%) раствора кислоты кофейной, доводили до метки 96% спиртом этиловым, перемешивали (раствор Б).
Измеряли оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре относительно растворителя в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 330 нм.
Содержание суммы фенолокислот в воздушно-сухих листьях артишока колючего (табл. 18) рассчитывали в пересчете на кофейную кислоту по формуле, приведенной ранее.
Исследование желчегонной активности
Результаты исследования влияния водного сухого экстракта из листьев артишока колючего на желчевыделение в сравнении с лекарственным препаратом «Хо-фитол» в опытах in vivo приведены в таблице 28.
Примечание: п - количество животных, использованных в опыте;
Pi - вероятность различий по отношению к интактным животным;
Р2 - вероятность различий по отношению к животным, получавшим препарат сравнения «Хофитол».
Результаты исследования желчегонной активности свидетельствует о том, что водный сухой экстракт из листьев артишока колючего способствует выделению желчи у крыс и эта активность находится на уровне действия, не уступающему препарату сравнения «Хофитол».
Установлено, что водный сухой экстракт из артишока колючего относится к группе практически нетоксичных веществ.
Доказана способность водного сухого экстракта из артишока колючего нормализовать нарушенные при интоксикации показатели углеводного и липидного обмена: содержание гликогена и триглицеридов.
Показана способность водного сухого экстракта нормализовывать процессы перекисного окисления липидов и экскреторную функцию печени.
Выявлена желчегонная активность водного сухого экстракта.
Установлено, что по гепатопротекторному и желчегонному действию исследуемый водный сухой экстракт не уступает по уровню действия лекарственному препарату «Хофитол».
