Введение к работе
Актуальность проблемы. В 21 веке отмечается значительный рост заболеваемости атипичными пневмониями, вызванными возбудителями оппортунистических инфекций, развивающихся у лиц с приобретенными иммуно-дефицитами разной этиологии. Число таких иммунокомпрометированных лиц за последние годы резко возросло во многих странах, в том числе и в России. На этом фоне могут происходить существенные изменения эпидемиологических закономерностей многих инфекционных заболеваний, в том числе и оппортунистических, включая пневмоцистоз.
Проблемой пневмоцистоза в нашей стране начали заниматься в конце 50-х, начале 60-х годов прошлого столетия. Первые сообщения касались изучения пневмоцистной пневмонии у детей (Вишневецкая Л.О., 1959; Жукова В.К., 1959; Бакланова В.Ф., 1965). В 1973 году Ковалева Е.П. с соавторами начали разрабатывать методы лабораторной диагностики пневмоцистоза. Именно с этого момента началось изучение широты распространения возбудителя инфекции, источников, механизмов, путей и факторов передачи возбудителя и профилактики пневмоцистоза. За последние десятилетия пневмоцистоз из проблемы детской патологии превратился в серьезную проблему "оппортунистических" инфекций, которые вызываются условно-патогенными микроорганизмами и проявляют свои патогенные свойства только на фоне угнетения иммунной системы организма. Впервые распространение пневмоцистоза среди гематологических больных было показано в работе Ярашевой Д.М. (1982) у детей с различными формами гсмобластозов и продолжено Каражас Н.В. (2002) при исследовании распространения пневмоцистоза среди взрослых гематологических больных. В 1991 году появилась работа Ковалевой Е.П. по выявлению пневмоцистной инфекции в детском туберкулезном стационаре и показана возможность внутрибольничного распространения пневмоцистоза.
Особый интерес к пневмоцистозу возник в связи с пандемией ВИЧ-инфекции. Попытки изучить частоту поражения пневмоцистозом ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом в России сделаны Лысенко АЛ. с соавторами (1996), Рыбалкиной Т.Н. (2000) и Ермак Т.Н. (2003).
В настоящее время пневмоцистоз занимает существенное место в структуре инфекционной патологии человека, что подчеркивает серьезность и актуальность пневмоцистной инфекции. Пневмоцистоз по-прежнему остается официально не регистрируемой инфекцией. По данным сведений об инфекционной заболеваемости в РФ ежегодно выявляется всего от 1-го до 5-ти случаев пневмоцистоза. Такие низкие показатели свидетельствуют об очень ограниченном использовании методов лабораторной диагностики этой инфекции. Основой диагностики пневмоцистоза по-прежнему остается выявление характерных клинических симптомов, что более выражено при пневмониях, а при других более легких формах встречается достаточно редко. В настоящее время всего лишь две фирмы выпускают коммерческие тест-системы. Немецкая фирма «Медак» - для определения антигенов и француз-
екая «Био-рат» - для выявления антител. Из-за высокой рыночной стоимости эти тест-системы практически не доступны отечественному здравоохранению, что не только затрудняет своевременную и правильную диагностику этого заболевания, но и не позволяет проводить эпидемиологические исследования. Учитывая вышеизложенное, а также то обстоятельство, что культивирование пневмоцист на питательных средах ограничено и описано только в научной литературе, необходимо создание и внедрение в практику отечественных высокоэффективных лабораторных методов диагностики пневмоци-стоза.
Цель работы: изучение эпидемиологических характеристик пневмоци-стной инфекции с использованием комплекса современных иммунобиологических методов диагностики.
Задачи исследования:
разработать тест-систему для диагностики пневмоцистной инфекции на основе метода прямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ);
дать оценку эффективности различных методов диагностики пневмоци-стоза;
изучить сезонность и цикличность пневмоцистной инфекции;
определить значимость пневмецистоза у больных с различными иммуно-дефицитными состояниями;
изучить возможность формирования внутрисемейных и внутрибольнич-ных очагов пневмоцистной инфекции;
определить распространенность пневмоцистоза среди медицинского персонала в стационарах различного профиля.
Научная новизна:
впервые разработана и апробирована диагностическая тест-система на основе метода прямой реакции иммунофлюоресцении для детекции пневмо-цистного антигена;
дана оценка эффективности различных методов диагностики пневмоцистной инфекции (РИФ, НРИФ, ИФА);
с использованием разработанных методов лабораторной диагностики впервые выявлен ряд эпидемиологических характеристик пневмоцистоза:
установлена сезонность пневмоцистной инфекции у детей до 18 лет, с пиком заболеваемости в августе и сентябре (на основании данных иммунобиологических методов исследований о частоте выявления маркеров пневмоцистоза);
показано, что для пневмоцистной инфекции не характерна цикличность;
выявлена высокая значимость пневмоцистоза у больных с различными иммунодефицитными состояниями;
установлено, что в семейных очагах может происходить активная циркуляция возбудителя пневмоцистной инфекции;
охарактеризована внутрибольничная вспышка пневмоцистной пневмонии среди пациентов и медицинских работников в крупном стационаре онкологического профиля;
установлено, что продолжительность сохранения антител класса IgM составляет от одного до четырех месяцев;
показано, что медицинский персонал стационаров различного профиля является одной из групп риска по заболеванию внутрибольничной пневмоцистной инфекцией.
Практическая значимость
Разработана экспериментальная диагностическая тест-система на основе метода прямой РИФ, позволяющая выявлять пневмоцисты в различных биологических материалах.
Материалы диссертации включены: в «Методические рекомендации по диагностике пневмоцистной инфекции» (одобрены на Совете по внедрению научных достижений в практику ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Протокол №4 от 25 сентября 2008г); в «Методические рекомендации по применению компьютерной программы для расчета разведений сывороток дающих 50% насыщение сорбента антителами в иммуноферментном анализе» (одобрены на Совете по внедрению научных достижений в практику ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Протокол № 1 от 22 февраля 2007г).
Результаты диссертации могут быть использованы в клинических лабораториях и медицинских центрах, занимающихся диагностикой пневмоцистной инфекции, а также включены в учебный процесс при чтении курсов лекций по эпидемиологии на кафедре инфектологии последипломного образования Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.
Положення, выносимые на защиту:
впервые разработана и апробирована диагностическая тест-система на основе метода прямой реакции иммунофлюоресценции для детекции пнев-моцистного антигена и при сравнительной оценке эффективности 3-х методов диагностики (РИФ, НРИФ, ИФА) показано преимущество РИФ;
установлена сезонность пневмоцистной инфекции у детей до 18 лет, с пиком заболеваемости в августе и сентябре. Показано, что для пневмоцистной инфекции не характерна цикличность;
на основании эпидемиологических данных и выявления маркеров пневмоцистоза в биологических жидкостях показаны проявления эпидемического процесса пневмоцистоза, как среди детского, так и среди взрослого населения: в возрасте от года до 15 лет отмечается рост случаев заболеваний ппевмоцистозом, а во всех остальных возрастных группах их количество практически не меняется;
выявлена высокая значимость пневмоцистоза у больных с различными иммунодефицитными состояниями (у больных ВИЧ-инфекцией на стадии вторичных заболеваний - туберкулез и у больных активными формами ту-
беркулеза; у взрослых больных гемобластозами и у детей с иммунными ней-тропениями);
показана возможность формирования внутрисемейного очага пневмо-цистной инфекции, где источником инфекции может быть любой член семьи, и внутрибольничного - где может идти постоянная циркуляция возбудителя в коллективе;
показано, что медицинские работники в стационарах различного профиля являются одной из групп риска по заражению нневмоцистозом от больных, но они же могут являться и источником внутрибольничной пневмоци-стной инфекции.
Апробации работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 2-й Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье», Рязань 2007г.; 9 Съезде научного общества специалистов клинической лабораторной диагностики, «Национальные дни лабораторной медицины», Москва 2007г.; II Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения», Санкт-Петербург 2007г.; семинаре для врачей-инфекционистов амбулаторно-поликлинической службы департамента здравоохранения г. Москвы, 2008г; Всероссийской научной конференции, посвященной 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России» «Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология». Киров, 2008г; научной конференции отдела эпидемиологии, 2008г.
Апробация диссертации состоялась 29 июня 2009 года на научной конференции отдела эпидемиологии НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 15 научных работ.