Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 11
2.1. Строение нервной системы взрослых архианнелид 11
2.2. Исследование нервной системы в развитии у представителей Lophotrochozoa 14
2.3. Роль серотонина у беспозвоночных животных 18
2.4. Рецепторы серотонина 20
3. Материалы и методы 21
3.1. Содержание Dinophilus gyrociliatus в лабораторной культуре 21
3.2. Техника отлова Dinophilus taeniatus из естественной среды обитания 21
3.3. Содержание D taeniatus в лабораторной культуре 22
3.4. Определение плодовитости и продолжительности жизни у D. gyrociliatus 23
3.5. Получение эмбрионов и ювенилей динофилид 23
3.6. Техника извлечения эмбрионов из оболочки кладки 24
3.7. Фармакологическая модуляция ресничной локомоции 24
3.8. Видеосъемка ювенильных и взрослых динофилид 25
3.9. Обработка видеозаписей 25
3.10. Анализ данных 25
3.11. Модуляция уровня серотонина в нервной системе 26
3.12. Иммунохимическое маркирование 26
3.13. Микроскопия 27
3.14. Обработка изображений 27
4. Результаты и обсуждение 28
4.1. Определение продолжительности жизни у D. gyrociliatus 28
4.2. Формирование ресничных элементов у эмбрионов D. gyrociliatus и D. taeniatus 28
4.3. Формирование нервных элементов на стадии прототроха у эмбрионов D. taeniatus и D. gyrociliatus 32
4.4. Формирование нервных элементов на стадии вентральной полоски у эмбрионов D. taeniatus HD. gyrociliatus 38
4.5. Формирование нервных элементов на стадии ресничных шнуров у эмбрионов D. taeniatus HD. gyrociliatus 42
4.6. Обсуждение начальных этапов нейрогенезау динофилид 48
4.7. Морфология ювенильных особей D. gyrociliatus и D. taeniatus 52
4.8. Внешние и внутренние ресничные структуры ювенильных особей D. gyrociliatus и D. taeniatus 54
4.9. Элементы нервной системы, выявляемые при иммуномечении тубулина у ювенильных особей D gyrociliatus и D. taeniatus 57
4.10. 5-НТ-иммунореактивные элементы нервной системы у ювенильных особей D. taeniatus и/). gyrociliatus 61
4.11. FMRFамид-иммунореактивные элементы нервной системы у ювенильных особей D. taeniatus и/). gyrociliatus 65
4.12. Обсуждение формирования нервной системы у ювенильных динофилид 69
4.13. Морфология взрослых особей/), gyrociliatus и/). taeniatus 69
4.14. Элементы нервной системы, выявляемые паннейрональным маркером у взрослых особей/), gyrociliatus и/), taeniatus 75
4.15. Серотонин-иммунореактивные элементы нервной системы у взрослых динофилид 78
4.16. FMRFa- иммунореактивные элементы нервной системы у взрослых особей D. taeniatus и/), gyrociliatus 82
4.17. Обсуждение формирования нервной системы у взрослых динофилид 88
4.18. Локомоторные ресничные структуры у ювенильных и взрослых особей D. gyrociliatus и/). taeniatus 93
4.19. Серотонин-иммунореактивная иннервация локомоторных структур у ювенильных и взрослых особей/), gyrociliatus и/), taeniatus 95
4.20. Фармакологическая модуляция уровня серотонина у ювенильных и взрослых особей D. gyrociliatus и/), taeniatus 95
4.21. Действие серотонина на ресничную локомоцию 96
4.22. Действие 5-НТР на ресничную локомоцию 102
4.23. Обсуждение влияния серотонина на ресничную локомоцию ювенильных и взрослых особей D. gyrociliatus и D. taeniatus 107
5. Заключение 109
6. Выводы 111
7. Список использованных сокращении 112
8. Благодарности 113
9. Список литературы 114
- Исследование нервной системы в развитии у представителей Lophotrochozoa
- Элементы нервной системы, выявляемые при иммуномечении тубулина у ювенильных особей D gyrociliatus и D. taeniatus
- FMRFa- иммунореактивные элементы нервной системы у взрослых особей D. taeniatus и/), gyrociliatus
- Действие 5-НТР на ресничную локомоцию
Исследование нервной системы в развитии у представителей Lophotrochozoa
Строение и развитие нервной системы личинок Lophotrochozoa изучено достаточно подробно. В литературе достаточно сравнительного материала. Новые методы существенно расширили возможности по исследованию микроскопических объектов. Динофилиды являются уникальной группой Polychaeta, так как сочетают в себе характеристики различных таксонов. Взрослые особи имеют ряд морфологических черт личинки трохофоры. Эти особенности могут указывать либо на древнее происхождение, либо на более позднее, но с участием неотении, происхождение этой группы. О развитии нервной системы динофилид до настоящего времени не было известно ничего.
Развитие в конце XX века микроскопии, появление разнообразных антител против маркеров, специфических для нервных клеток, и флуоресцентных меток, открыло новые возможности морфологам. Можно выявлять нервную систему на тотальных препаратах личинок, а не воссоздавать из отдельных срезов. Последовал целый ряд работ, которые выявили упущенные ранее детали, однако же, не привели к существенному изменению концепции нейрогенеза Trochozoa [Croll, 2000]. Полученные данные отражали подробную морфологию отдельных стадий развития, но не давали возможности составить картину о динамике перехода от личиночного типа строения к взрослому. Непонятна была логика, по которой у разных животных разные части личиночной нервной системы включались или не включались в состав дефинитивной.
Следует отметить, что хотя развитие техники выявления нервных элементов и шагнуло далеко вперед, однако иммуногистохимические методики были ограничены уже существующим разнообразием специфических нейрональных маркеров. Особенно принципиально это было для беспозвоночных, где не работают многие широко используемые на млекопитающих коммерческие антитела. Исследователям было доступно в основном выявление классических нейромедиаторов, таких как серотонин и дофамин [Marois, Carew 1990, 1997; Marois, Croll, 1992; Kempf et al., 1992; Voronezhskaya, Elekes, 1994; Voronezhskaya et al., 1999), или высоко консервативных нейропептидов, среди которых самым популярным был SCP [small cardioactive peptide, Kempf et al., 1987, 1992], впоследствии идентифицированный как FMRFamide [Price, Greenberg, 1977].
Исследования, проведенные на личинках Trochozoa разной систематической принадлежности показали, что как у пресноводных гастропод с прямым развитием личинки внутри яйца (Lymnaea stagnalis, Helisoma trivolvis), так и у морских гастропод (Aplysia: Mollusca: Opisthobranchea; Ilyanassa, Crepidula: Mollusca: Prosobranchea, Caenogastropoda), имеющих в развитии свободноплавающего велигера, первые нервные элементы иммунореактивны к БМИРамиду и появляются у трохофоры. Все они выявляются на периферии. Расположенные в эписфере клетки составляют апикальный орган, их базальные отростки не отходят далеко от тел клеток и формируют нейропиль апикального ганглия. В то время как клетки, расположенные в гипосфере, посылают длинные отростки по всему телу зародыша и формируют специфическую для каждого вида сеть [Dickinson et al., 1999, 2000; Dickinson, Croll, 2003]. У двустворчатых моллюсков (Crassostrea, Mytilus: Mollusca: Bivalvia) все ранние нейроны расположены в эписфере [Voronezhskaya et. al., 2008, Yurchenko et al., 2018]. В процессе развития они разделяются на две группы: одна составляет апикальный орган, а другие посылают в каудальную область отростки, вдоль которых и начинается потом последовательная дифференцировка нейронов центральных ганглиев в ростро-каудальном направлении. У представителя группы, считающихся самыми древними среди моллюсков, хитона Ischnochiton, самые первые нервные клетки также расположены претрохально, часть их формирует апикальный орган, а отростки клеток двух латеральных пар (которые иммунореактивны одновременно и к БМИРамиду, и к серотонину) идут контралатерально, проходят под апикальным нейропилем, затем круто поворачивают назад и разделяются на два пучка [Voronezhskaya et al., 2002]. У всех описанных выше личинок в состав апикального органа входят также и серотонинергические нейроны. Даже в тех случаях, когда исследователи говорят о формировании нервной системы только уже у достаточно развитой личинки (Antalis: Mollusca: Scaphopoda), они тем не менее отмечают, что на ранних стадиях в район апикального органа приходят какие-то отростки с периферии [Wanninger and Haszprunar, 2003]. Так что мы вполне можно предположить, что в данном случае тела самих клеток не были обнаружены из-за технических причин, как это было в случае ранее упомянутых нами работ.
В отличие от моллюсков, у аннелид самые ранние нервные элементы по большей части иммунореактивны к серотонину (5-НТ). Так, у Phyllodoce, самый первый нейрон выявляется на дорсальной стороне заднего конца тела [Voronezhskaya et al., 2003]. Отходящие от тела клетки два латеральных отростка сначала переходят на вентральную сторону тела, затем поворачивают под углом 90 градусов и идут к прототроху При достижении прототроха каждый из отростков дихотомически делится, вновь образованные ветви опять поворачивают на 90 градусов и далее следуют под прототрохом. К этому моменту начинают выявляться FMRFa- и 5-НТ-иммунореактивные клетки в апикальном органе, их отростки формируют очень компактный апикальный нейропиль. Вслед за этим появляются другие нейроны на периферии: часть из них посылает свои отростки вдоль уже проложенных путей, укрупняя вентральные стволы и нерв прототроха, а часть формирует пути совершенно новые, продлевая вентральный ствол и образуя будущую церебральную комиссуру или околоротовое кольцо. Сильно отличается от всего, описанного ранее для моллюсков, следующий шаг в нейрогенезе Phyllodoce когда формируется мощная личиночная нервная система. Она включает в себя и множество сенсорных нейронов, и дополнительные меридиональные стволы. Интересно, что после метаморфоза исчезают именно эти структуры, не использующие в качестве каркаса отростки ранних нейронов, в то время как промаркированный «пионерными» аксонами контур дефинитивной нервной системы начинает всё больше пополняться за счет отростков нейронов, дифференцирующихся в церебральных ганглиях и вентральных стволах. Аналогичную последовательность возникновения нервных структур можно проследить и у личинок других полихет: Platynereis (Annelida: Polychaeta: Nereididae) [Незлин, Воронежская, 20176 Starunov et al., 2017] и Pomatoceros (Annelidae: Polychaeta: Serpulidae) [McDougall et al., 2006], с той лишь разницей, что личиночная нервная система в каждом конкретном случае развита тем слабее, чем меньше времени проводит личинка в планктоне, и чем меньше ей нужно затрачивать усилий на добывание пищи.
У немертин, личинка которых совсем не похожа на трохофору формирование нервной системы, тем не менее, идет сходным образом. У только что вышедшей из яйца личинки вооруженной немертины Quasitetrastemma stimpsoni (Nemertea: Hoplonemertea) имеется два комплекса 5-НТ-иммунореактивных нервных клеток: один нейрон в каудальном отделе и комплекс апикальных клеток. Отростки каудального нейрона вместе с появляющимися чуть позже отростками латеральных клеток, по словам авторов, «...еще до окончания метаморфоза личинки маркируют общий план строения нервной системы взрослой немертины» [Чернышев, Магарламов, 2010]. Также имеются данные о распределении катехоламинов в стенке тела и составе нервных стволов взрослых немертин [Зайцева и др, 2007]. Причем, полученные данные подтверждают предположение о том, что катехоламины характерны для слабо дифференцированных функционально нервных элементов, имеющих эктодермальное происхождение [Зайцева и др, 2007].
Для другой группы, Lophophorata, личинки форонид, проведены детальные исследования развития нервной системы личинки Phoronopsis harmeri [Temereva and Wanninger, 2012; Temereva and Tsitrin, 2014]. Показано, что личинка Phoronopsis harmeri обладает достаточно сложной нервной системой, включающей апикальный орган, который состоит из четырех различных типов клеток. Среди этих клеток многочисленные серотонин-иммунореактивные бокаловидные клетки. Дополнительно есть серотонин- и БМКРамид- иммунореактивные би- и мультиполярные нейроны, которые дают начало тентакулярным нервным пучкам, иннервирующим посторальный ресничный шнур [Temereva and Wanninger, 2012]. Также в строении нервной системы выделяются парные вентральные стволы и регулярно повторяющиеся комиссуры, которые исчезают во время метаморфоза. Кроме того, было показано, что организация нервной системы личинок форонид имеет больше сходства с нервной системой вторичноротых, чем первичноротых [Temereva and Tsitrin, 2014].
Элементы нервной системы, выявляемые при иммуномечении тубулина у ювенильных особей D gyrociliatus и D. taeniatus
Кроме внешних и внутренних ресничных структур, антитела к тубулину выявляют элементы нервной системы. У ювенилей D. gyrociliatus в головном отделе расположен мощный нейропиль. Во всех проекциях (спереди, сбоку, на поперечном срезе) - нейропиль имеет овальную форму (рисунок 22А-В, Ж-К). В центральной части нейропиля обнаруживается область с пониженным содержанием волокон (рисунок 22Б, Ж-К). От дорсальной части нейропиля отходят многочисленные волокна к основаниям ресничных шнуров и длинных ресничек в передней части головы (рисунок 22А-В, Ж).
Справа и слева от каудальной части нейропиля отходят по два толстых тяжа: дорсальные и вентральные, которые сливаются, формируя два мощных вентролатеральных ствола (рисунок 22А-Г, Е). Чуть каудальнее от места слияния дорсального и вентрального стволов отходят медиальные отростки, которые сливаются, образуя медиальный тяж (рисунок 22Б, В). От места их слияния также отходят по паре тонких тяжей, следующих каудально (парамедиальные продольные тяжи) (рисунок 22Б, В).
В туловищном отделе четко выделяется семь продольных стволов: парные вентролатеральные, парамедиальные и медиавентральные и непарный, более тонкий, медиальный (рисунок 22Б, В). На всем своем протяжении, вентролатеральные стволы соединены между собой комиссурами (рисунок 22Б, В). В зависимости от размера червя число комиссур варьирует от 12 до 15, они располагаются по телу червя неравномерно, однако их распределение позволяет выделить пять зон концентрации. При этом, на уровне первых сближенных двух пар протонефридиев наблюдается максимальное число комиссур (рисунок 22Б, В). Следует отметить, что зоны концентрации комиссур не соответствуют ни латеральным бороздам, ни ресничным шнурам на теле червя.
На всем протяжении от вентролатеральных стволов дорсально отходят шесть кольцевых нервов, лежащих в основании соответствующих ресничных шнуров (рисунок 22А-Г). Также от вентролатеральных стволов дорсально отходят многочисленные тонкие кольцевые нервы, идущие параллельно ресничным шнурам (рисунок 22Б-Г). Кроме этого, в стенке тела обнаруживаются тонкие продольные волокна, проходящие между всеми кольцевыми нервами (рисунок 22Г). В каудальной части туловищного отдела вентролатеральные стволы загибаются дорсально, сливаясь между собой на уровне последнего ресничного шнура. Медиальный ствол заканчивается в области каудального отростка, сливаясь с вентролатеральными (рисунок 22Б).
У ювенилей D. taeniatus в головном отделе расположен мощный нейропиль. Во всех проекциях (спереди, сбоку, на поперечном срезе) - нейропиль имеет овальную форму, как и у ювенилей D. gyrociliatus (рисунок 23А, Д-3). Также, в центральной части нейропиля обнаруживается область с пониженным содержанием волокон (рисунок 23А, Д-3). От дорсальной части нейропиля отходят многочисленные волокна к основаниям ресничных шнуров и длинных ресничек в передней части головы, (рисунок 23 А, Д-Ж).
Справа и слева от каудальной части нейропиля отходят по два толстых тяжа: дорсальные и вентральные, которые сливаются, формируя два мощных вентролатеральных ствола (рисунок 23А-В). Чуть каудальнее от места слияния дорсального и вентрального стволов отходят медиальные отростки, которые сливаются, образуя медиальный тяж (рисунок 23Б, В).
В туловищном отделе четко выделяется пять продольных стволов: парные вентролатеральные, медиавентральные и непарный, более тонкий, медиальный (рисунок 23А-В). На всем своем протяжении, вентролатеральные стволы соединены между собой комиссурами (рисунок 23 А, В). Комиссуры расположены равномерно, однако их расположение не совпадает с ресничными шнурами и расположением протонефридиев (рисунок 23 А, В).
На всем протяжении от вентролатеральных стволов дорсально отходят шесть кольцевых нервов, лежащих в основании соответствующих ресничных шнуров (рисунок 23 А, В, Г). Также от вентролатеральных стволов дорсально отходят многочисленные тонкие кольцевые нервы, идущие параллельно ресничным шнурам (рисунок 23В, Г). Кроме этого, в стенке тела обнаруживаются тонкие продольные волокна, проходящие между всеми кольцевыми нервами рисунок 23Г).
В каудальной части туловищного отдела вентролатеральные стволы сливаются между собой на уровне последнего ресничного шнура. Медиавентральные стволы заканчиваются в области каудального отростка, сливаясь с вентролатеральными стволами (рисунок 23 А-В).
Иммунохимическое маркирование антителами к ацетилированному а-тубулину на стадии ювенильной особи у D. taeniatus. Головной отдел особи ориентирован вверх на всех фотографиях. А- общий вид нервной системы с вентральной стороны. Овальный нейропиль расположен в центре головного отдела. В центральной части нейропиля выявляется область с пониженным содержанием волокон {звездочка). От нейропиля отходит две пары продольных стволов {дел и вел). В туловищном отделе расположено пять продольных стволов: парные вентролатеральные (вл), медиавентральные {мв) и непарный медиальный {м), которые соединены между собой поперечными комиссурами {к1-к7)\ кольцевые нервы под ресничными шнурами и между ними {двойные и группа из 4ех стрелок, соответственно). Б-общий вид с вентральной стороны, срез на уровне протонефридиев {н1-н5). В- общий вид с вентральной стороны, срез на уровне комиссур. Г-общий вид с дорсальной стороны, срез на уровне кольцевых нервов. В туловищном отделе выявляютя кольцевые нервы под ресничными шнурами и между ними {двойные и группа из 4ех стрелок). Д- Крупный план нейропиля, вид с вентральной стороны. От нейропиля отходит две пары продольных стволов {дел и вел), окологлоточное нервное кольцо {огк). Е-Крупный план нейропиля, вид с дорсальной стороны. Ж-Крупный план нейропиля, поперечный срез на уровне области с пониженным содержанием волокон {звездочка). 3-Крупный план нейропиля, вид сбоку. Масштабная линейка: 25 мкм.
FMRFa- иммунореактивные элементы нервной системы у взрослых особей D. taeniatus и/), gyrociliatus
Основные БМКРамид-иммунореактивные элементы (FMRFa-ИР) обнаруживаются вдоль нервных структур, выявляемых при иммуномечении антителами к тубулину. В головном отделе выявляется мощный нейропиль, в туловищном - вентральные нервные стволы (рисунок 39А-Д, 3-М). Во всех проекциях нейропиль имеет овальную форму, в центральной части нейропиля выявляется область с пониженным содержанием волокон (рисунок 393, К, Л, М).
В головном отделе выявляются около 30 FMRFa-ИР тел нейронов вокруг нейропиля, и посылающих в него свои отростки (рисунок 39А-Д, 3-М). На вентральной стороне головного отдела, фронтальнее нейропиля выявляется крупная одиночная FMRFa-ИР клетка. От её тела отходит мощный отросток, делящийся на две ветви в непосредственной близости от тела клетки (псевдоуниполярный нейрон). Оба отростка проходят через головной нейропиль и следуют далее в составе латеральных стволов. На основании характерной морфологии этой клетки мы полагаем, что это сохранившаяся первая FMRFa-ИР клетка, появившаяся в отногенезе (рисунок 39А, В, 3).
Вентролатерально с обеих сторон нейропиля в каудальном направлении отходит пара продольных стволов (вентральные вентролатеральные стволы). Эти стволы переходят в туловищный отдел, образуя парные вентролатеральные стволы (рисунок 39А-В, 3-К).
На границе головного и туловищного отделов от нейропиля отходит тонкое волокно, окружающее глотку в форме подковы (окологлоточное нервное кольцо, рисунок 39А, Б, Г, Д, 3-К). По ходу этого волокна выявляется пара тел нейронов.
Каудальнее первой латеральной борозды, от вентролатеральных стволов отходят отростки, которые сливаются, образуя медиальный ствол (рисунок 39А-В). Всего в туловищном отделе можно выделить три продольных ствола: парные вентролатеральные и непарный медиальный ствол (рисунок 39А-В). В составе комиссур, соединяющих вентролатеральные стволы FMRFa-ИР элементы, не обнаруживаются (рисунок 39А-В). По боковым сторонам тела от нейропиля каудально отходит пара тонких латеральных продольных стволов (рисунок 39В). В каудальном отделе ветролатеральные и медиальный стволы сливаются между собой на вентральной стороне тела (рисунок 39А).
На уровне пятой латеральной борозды от медиального тяжа отходит единичное нервное волокно, охватывающее кольцом с дорсальной стороны кишку на уровне сфинктера, разделяющего среднюю и заднюю кишку (рисунок 39А-Г, Е, Ж). По ходу кольцевого волокна также расположены 3 единичных нейрона (рисунок 39Г, Ж).
Таким образом, FMRFa-ИР элементы выявляются только в вентролатеральных и медиальном продольных стволах у ювенилей D. gyrociliatus. В медиавентральных, парамедиальных стволах и в комиссурах FMRFa-ИР элементы не выявлены.
У взрослых особей D. taeniatus общий план расположения FMRFa-ИР элементов сходен расположением элементов, выявляемых при иммуномечении антителами к тубулину В головном отделе выявляется мощный нейропиль, в туловищном - вентральные нервные стволы (рисунок 40А- В).
Во всех проекциях нейропиль имеет овальную форму (рисунок 40А- В). В головном отделе выявляются около 30 FMRFa-ИР тел нейронов вокруг нейропиля, и посылающих в него свои отростки (рисунок 40А- В). На дорсальной стороне головного отдела, над нейропилем выявляется пара крупных FMRFa-ИР клеткок, посылающих свои отростки в нейропиль. Мы полагаем, что это сохранившиеся первые FMRFa-ИР клетки, появившиеся в отногенезе (рисунок 40А, Б). От каудальной части нейропиля отходит тонкое окологлоточное кольцо (рисунок 40А, Б).
Вентролатерально с обеих сторон нейропиля в каудальном направлении отходит пара продольных стволов (вентральные вентролатеральные стволы). Эти стволы переходят в туловищный отдел, образуя парные вентролатеральные стволы (рисунок 40А, Г, Е). От вентролатеральных стволов отделяются ветви, загибающиеся навстречу друг другу, формируя медиальный нервный ствол. Выявляется семь FMRFa-ИР комиссур, соединяющих венролатеральные стволы (рисунок 40А, Д). В каудальной части туловищного отдела вентролатеральные стволы сливаются между собой на вентральной стороне (рисунок 40А, Б). В отличие от D. gyrociliatus у взрослых D. taeniatus выявляется мощная сеть волокон вокруг кишки (рисунок 40Б). На уровне сфинктеров выявляются кольцевые волокна, по ходу которых выделяются тела 3-4 нейронов (рисунок 40Б). В околокишечном сплетении выявляется около десятка тел нейронов (рисунок 40А, Б, Е). Таким образом, FMRFa-ИР элементы выявляются только в составе нейропиля и вентролатеральных стволов.
Двойное иммунохимическое маркирование антителами к FMRFa (зеленый) и а-тубулину (красный) на стадии взрослой особи у D. gyrociliatus. Головной отдел особи ориентирован вверх на всех фотографиях. А- общий вид FMRFa-ИР нервной системы с вентральной стороны. В головном отделе выявляется нейропиль (нп). В туловищном отделе расположено окологлоточное нервное кольцо (огк), на вентральной стороне пять продольных стволов: парные вентролатеральные (ел), медиавентральные (мв) и непарный медиальный (м); тела нейронов (треугольники) расположены в головном отделе, окружая нейропиль и единичные в туловищном отделе по ходу продольных стволов; в каудальном отделе выявляется каудальное нервное кольцо (кк). Б-общий вид FMRFa-ИР нервной системы с вентральной стороны, двойное окрашивание. В головном отделе выявляется нейропиль (нп). В туловищном отделе расположено окологлоточное нервное кольцо (огк), на вентральной стороне пять продольных стволов: парные вентролатеральные (ел), медиавентральные (мв) и непарный медиальный (м), кольцевые нервы под ресничными шнурами (двойные стрелки) и межсегментарные нервы (группа из 4ех стрелок) выявляются только антителами к тубулину; тела нейронов (треугольники) расположены в головном отделе, окружая нейропиль и единичные в туловищном отделе по ходу продольных стволов; в каудальном отделе выявляется каудальное нервное кольцо (кк). В- общий вид FMRFa-ИР нервной системы с латеральной стороны, двойное окрашивание. В головном отделе выявляется нейропиль (нп). В туловищном отделе расположено окологлоточное нервное кольцо (огк), на вентральной стороне пять продольных стволов: парные вентролатеральные (ел), медиавентральные (мв) и непарный медиальный (м), кольцевые нервы под ресничными шнурами (двойные стрелки) и межсегментарные нервы (группа из 4ех стрелок) выявляются только антителами к тубулину; тела нейронов (треугольники) расположены в головном отделе, окружая нейропиль и единичные в туловищном отделе по ходу продольных стволов; в каудальном отделе выявляется каудальное нервное кольцо (кк). Г- Головной нейропиль, вид с вентральной стороны, крупный план, двойное окрашивание. Д- Передний конец туловищного отдела, крупный план. Е- Головной отдел, вид с латеральной стороны, крупный план. От нейропиля к поверхности отходят многочисленные тонкие отростки; Ж- Крупный план нейропиля, вид с латеральной стороны, двойное окрашивание. Под нейропилем расположены две симметричные группы тел нейронов (треугольники), от нейропиля отходит окологлоточное нервное кольцо (огк), на вентральной стороне отходит вентральный вентролатеральный ствол (вел). Масштабные линейки: А-В - 70 мкм; Г-Ж — 30 мкм.
Действие 5-НТР на ресничную локомоцию
При нанесении 5-НТР ювенильным особям D. gyrociliatus наблюдалось увеличение длины локомоторного трека, как в случае с 5-НТ (рисунки 53, 54).
Длина трека ювенильных особей D. gyrociliatus до и спустя 1, 3, 10 и 30 минут после аппликации 5-НТР в концентрации ю-6м. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: р 0,0015, p=0,0240 согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.
Длина трека ювенильных особей D. gyrociliatus до и спустя 10 минут после аппликации 5-НТР в разных концентрациях. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: р 0,0026, р=0,0160 согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.
При нанесении 5-НТР ювенильным особям D. taeniatus также наблюдалось достоверное увеличение длины трека (рисунки 55, 56).
Длина трека ювенильных особей D. taeniatus до и спустя 1, 3, 10 и 30 минут после аппликации 5-НТР в концентрации ю-6м. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: р 0,0104, согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.
Длина трека ювенильных особей D. taeniatus через 10 минут после аппликации 5-НТР в разных концентрациях. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: р 0,0104, согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.
Однако, при нанесении 5-НТР взрослым особям эффект либо не развивался, либо длина трека уменьшалась. При добавлении 5-НТР взрослым особям D. gyrociliatus не было выявлено достоверных отличий в длине трека по сравнению с контролем, ни в одном из временных интервалов (рисунки 57, 58).
Длина трека взрослых особей D. gyrociliatus до и спустя 1, 3, 10 и 30 минут после аппликации 5-НТР в концентрации 10-6М. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: р 0,0104, согласно U-критерию Манна-Уитни; ns -отсутствие статистически достоверных различий.
Длина трека взрослых особей D. gyrociliatus до и спустя 10 минут после аппликации 5-НТР в разных концентрациях. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: ns - отсутствие статистически достоверных различий.
Длина трека взрослых особей D. taeniatus до и через 10 минут после аппликации 5-НТР в разных концентрациях. Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.
Аналогичный эффект наблюдался при нанесении 5-НТР взрослым особям D. taeniatus. Достоверных отличий не выявлено.
Длина трека взрослых особей D. taeniatus до и спустя 1, 3, 10 и 30 минут после аппликации 5-НТР в концентрации Каждая точка представляет длину индивидуального трека. Статистически значимые отличия от контроля: согласно U-критерию Манна-Уитни; ns - отсутствие статистически достоверных различий.