Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1 Проблема ожоговой травмы 12
1.2 Основы морфологической характеристики кожи 15
1.3 Характеристика основных возбудителей раневой ожоговой инфекции 17
1.4 Морфологическая характеристика регенерации 21
1.5 Современные подходы к консервативному лечению глубоких дермальных ожогов 26
1.6 Применение сплава никелида титана в практической медицине 28
Глава 2. Материалы и методы исследования 32
2.1 Оценка химического состава супернатанта сплава никелида титана 32
2.1.1 Качественный метод определения ионного состава супернатанта 33
2.1.2 Количественный метод определения ионного состава супернатанта 35
2.2 Оценка микробиологических свойств супернатанта сплава никелида титана 39
2.2.1 Тестирование супернатанта в среде диких штаммов 39
2.2.2 Тестирование супернатанта в среде тест-штаммов 40
2.3 Морфологические методы исследования 41
2.3.1 Объект и материал исследований 41
2.3.2 Планиметрические методы 43
2.3.3 Гистологическое исследование и сканирующая электронная микроскопия 44
2.3.4 Иммуногистохимическое исследование 46
2.4 Статистическая обработка полученных результатов 47
Глава 3. Результаты собственных исследований 48
3.1 Результаты химического анализа ионного состава супернатанта сплава никелида титана 48
3.2 Бактериостатические и бактерицидные свойства супернатанта 50
3.3 Гистологическая характеристика строения кожи сирийских хомяков (интактная группа) 52
3.4 Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы (контрольная группа) 63
3.5 Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы с воздействием супернатанта слава никелида титана (опытная группа) 100
Заключение 140
Выводы 155
Практические рекомендации 157
Список литературы 158
- Применение сплава никелида титана в практической медицине
- Гистологическая характеристика строения кожи сирийских хомяков (интактная группа)
- Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы (контрольная группа)
- Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы с воздействием супернатанта слава никелида титана (опытная группа)
Применение сплава никелида титана в практической медицине
В настоящее время отсутствуют сведения о применении супернатанта на основе металлов с эффектом «памяти формы» в качестве стимуляторов репаративных процессов в условиях модели ожоговых ран. Кроме того, нет данных об их воздействии на повреждённую поверхность. Взаимодействие материала и биологической среды может происходить по двум направлениям: воздействие на ткани материала и влияния материала на ткань. При подборе вида материала особое внимание уделяется его биосовместимости, а именно, влиянию на окружающие ткани (воспалительные реакции, раздражение, боль, некротические изменения и т.д.) и возможной нежелательной обратной реакции организма на субстрат. Таким образом, биологически совместимым называется материал, который не обладает отрицательным действием на живые ткани и не деградирует от их обратного действия. В последнее время в медицине все больше применяются многофункциональные материалы, в том числе сплавы с эффектом «памяти формы» (Муслов С.А. и соавт., 2007). Общепризнано, что единоличным лидером является сплав на основе никелида титана – нитинол. Хорошая биомеханическая совместимость никелида титана с организмом способствует его использованию в качестве материала для создания медицинских изделий, а также активного применения в медицинской практике (Молокова О.А., 2007).
Титан, открытый в 1794 году, относится к группе физиологически индифферентных металлов (Andersson O.H. et al., 1992). Сплавы на его основе активно используются не только в хирургии, стоматологии, травматологии, но и в других отраслях медицины.
В Тюменской области нитинол впервые использован в 80-х гг. в клинике факультетской хирургии Тюменского медицинского института профессором Р.В. Зиганьшиным. Было открыто принципиально новое направление в соединении отрезков пищеварительной трубки имплантатами из никелида титана. Устройство в виде канцелярской скрепки является в настоящее время «золотым стандартом» для разработчиков новых компрессионных устройств, оно соединило в себе простоту, надежность и эффективность, которые необходимы для широкого распространения любой методики (Дамбаев Г.Ц., 2004; Молокова О.А., 2007). На основе этой идеи в последующем были разработаны различные способы билиодигестивных, желудочно-кишечных, пищеводно-желудочно-кишечных, толсто-толстокишечных анастомозов. Преимущество используемого материала заключалось в его надежности, герметичности шва, функциональности; имплантаты из никелида титана осуществляли дозированную компрессию. Особенности заживления обуславливали исключение возможности кровотечения из зоны соустья, отсутствие тяжелых анастомозитов, а в отдаленном периоде — формирование рубцовых стриктур (Зиганьшин Р.В. и соавт., 1990; Зиганьшин Р.В. и соавт., 1995; Кононов В.П. и соавт., 2003; Гюнтер В.Э. и соавт., 2006; Дамбаев Г.Ц. и соавт., 2007).
Титан отличается легкостью, устойчивостью к коррозии, хорошо поддается обработке, не теряя при этом высокую прочность. По отношению к другим сплавам, используемым в медицине, нитинол имеет ряд преимуществ, таких как высокая биосовместимость, биоинертность, коррозионная устойчивость (благодаря образованию на поверхности пассивирующего оксидного слоя), низкая теплопроводность, малый коэффициент линейного расширения, отсутствие токсичности (Михайлова А.М. и соавт., 1999).
С точки зрения биологической безопасности, всегда вызывал опасение факт высокого содержания никеля и на поверхности, и в объеме сплава; вероятность его выделения из материала при помещении в жидкость и при этом токсичность данного сплава. В сравнительных исследованиях нитинола in vitro, в средах клеточных культур фибробластов и остеобластов, из никелида титана было выделено большее количество никеля, однако оно не достигло "ядовитых" величин и на быстрое увеличение или рост клеток около поверхности внедрения не повлияло (Ryhanen J et al.,1997). Отличительной особенностью никель-титановых сплавов, определяющих их биологическую безопасность, является образование на поверхности титана в кислородосодержащей атмосфере прочного окисного слоя (преимущественно диоксид титана TiO2, TiO, Ti2O3), который за несколько минут достигает толщины от 2 до 10 нм (Воронков М.Г. и соавт., 1978). Достоверно доказанным считается, что диоксид титана является безвредным в контакте с человеческой тканью, но его не должно быть более 10 масс. %. Данные мелкодисперсные системы (порошки на основе сплава Nii) производятся на массовых медицинских производствах, в исходно заданных пропорциях с учётом дальнейшей области применения, в ходе взаимодействия с организмом TiO2 используется в качестве зародышеобразователя (Forgacs Z. et al.,2012). Титан в живом организме под действием механической деформации, ионов хлора и коррозии частично биодеградирует и диффундирует в окружающие ткани. Но токсических эффектов или аллергизации при этом, в отличие от циркониевых и железохромовых сплавов, даже при достаточно высоком уровне содержания металла в тканях, как правило, не происходит (Корнилов И.И., 1975).
Что же касается исследования бактериологических свойств растворов на основе Nii, при наличии в ране микробиоты, показано, что образующийся кислород на поверхности сплава, взаимодействуя с клеточными мембранами, подавляет активность ферментов и уничтожает генетические супрамолекулы микроорганизмов. Бактерицидное воздействие TiO2 исследовано на многих бактериях и вирусах, известных в клинической практике. Последний эффект особенно важен, т. к. эндотоксин неблагоприятно влияет на человека даже в сверхнизкой концентрации. Низкая эффективность защиты во многом связана с недостаточной изученностью материаловедческих аспектов повреждающего воздействия микроорганизмов в условиях жидкой среды с использованием Nii (Becbilet M et al., 1996; Ibanez J.A. et al., 2003).
Факт недостаточной эффективности классической фармакотерапии, которая не всегда может обеспечить адекватную помощь в лечении термических повреждений кожи (Alharbi S.A. et al., 2014), позволяет в настоящий момент проводить сравнительную характеристику между классическим лечением ожоговых ран, а также поиском новых, совершенных средств, для достижения более эффективных и быстрых способов регенерации ожоговых ран.
Гистологическая характеристика строения кожи сирийских хомяков (интактная группа)
В области спины толщина кожи (эпидермис, дерма и гиподерма) сирийских хомяков с нормальным волосяным покровом в среднем составляет 760,2±81,6 мкм (Рисунок 1).
Эпидермис имеет толщину (ширина на поперечном срезе) – 48,7±4,3 мкм, он представлен базальным слоем (stratum basale), который прилежит непосредственно к базальной мембране и состоит из небольших малодифференцированных кератиноцитов округлой, местами овальной формы; ядра в них имеют полисадообразную структуру и, накладываясь друг на друга, смещаются к соединительнотканной основе эпидермиса. В некоторых полях зрения наблюдаются митозы, что подтверждает факт росткового дифферона эпидермиса (Рисунок 2). Кроме этого, наблюдается 2-4 ряда клеток шиповатого слоя (stratum spinosum), который образован более округлыми клетками по сравнению с базальным, ядра в них содержат глыбки хроматина и компактные ядрышки, цитоплазма здесь более светлая, что подтверждает наличие свободных рибосом, а именно проявление активного синтеза белковых веществ, в частности, прокератина (Ноздрин В.И. и соавт., 2005). Кроме этого, в пласте встречаются клетки, имеющие округлую, полигональную форму, которые были расценены как дендритные клетки эпидермиса, или клетки Лангерганса. Они находятся в межфолликулярном эпителии базального и шиповатого слоев. Далее расположен зернистый слой (stratum granulosum), имеющий в своем составе 2-3 пласта уплощенных клеток, цитоплазма которых содержит более базофильную окраску с кератогиалиновыми гранулами. Последний роговой слой (stratum corneum) занимает поверхностное расположение и придает ткани признаки ороговения. Он состоит из полностью ороговевших корнеоцитов, заполненных кератином.
Все перечисленные элементы эпидермиса отличались друг от друга не только формой, но и размерами, поэтому для каждого слоя клеток определялся такой важный показатель, как ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО), который позволяет оценить уровень метаболизма, а также выявить проявление компенсаторных реакций данной структуры (табл. 8). Измерения проводились по формуле: ЯЦО = Sя/Sц где: Sя — площадь ядра клетки; Sц — площадь цитоплазмы.
Из данной таблицы следует, что зрелые клетки верхних пластов эпидермиса имеют низкое ядерно-цитоплазматическое отношение (ниже 1 у.е.), в то время как для клеток базального слоя характерны более крупные ядра и высокий показатель ЯЦО.
С наружной поверхности между бороздками и валиками эпидермиса, формирующими его рельеф, на электронограммах, полученных методом СЭМ, обнаруживались стержневые составляющие многочисленных волос, формирующих шерстный покров (Рисунок 3).
Большую площадь кожи занимает дерма (dermis), являясь ее средним слоем, она обеспечивает структурную основу органа. Толщина собственного слоя кожи колеблется в пределах 356,83±36,24 мкм. Располагаясь под базальной мембраной, она обеспечивает трофическую основу для эпидермиса, а благодаря коллагеновым и эластическим структурам, входящим в ее состав, придает прочность и устойчивость всей кожи; здесь же находятся и ее производные. Сосочковый слой (stratum papillare) хорошо развит, образован рыхлой, волокнистой соединительной тканью, толщиной 152,7±12,59 мкм (Рисунок 4А, 4Б).
Сетчатый слой (stratum reticular) образован неоформленной соединительной тканью (Рисунок 5А, 5Б), которая придает прочность коже, а также препятствует её чрезмерному растяжению; в ней обнаруживались микрососуды артериального, венозного типов мелкого и среднего звена (Рисунок 6). Толщина данной структуры составляет 201,1±1,8 мкм. В обоих слоях микроциркуляторное русло занимает до 2,4%.
На препаратах, окрашенных по методу Массона, неоформленная рыхлая волокнистая соединительная ткань определялась в сосочковом слое дермы и в соединительнотканных капсулах волосяных фолликулов как окрашенная в оттенки синего цвета. Неоформленная плотная соединительная ткань сетчатого слоя дермы окрашивалась в красный цвет (Рисунок 7А). Более крупные пучковые образования эластических волокон, преимущественно лентовидного типа, наблюдались в сетчатом слое дермы. Более тонкие и ветвящиеся волокна обнаруживались на границе с подкожно-жировой клетчаткой, в соединительнотканных сумках волосяных фолликулов, в сосочковом слое (Рисунок 7Б).
При окрашивании препаратов альциановым синим при рН=1,0 в сетчатом слое дермы определялась альцианофилия умеренной интенсивности, свидетельствующая о содержании сульфатированных гликозаминогликанов (Рисунок 8а). Наиболее интенсивно окрашивалась рыхлая волокнистая соединительная ткань, содержащаяся в сосочковом слое дермы, волосяных влагалищах и периваскулярных пространствах (Рисунок 8б). Эпидермис имел очень слабое окрашивание.
При окрашивании альциановым синим с рН=2,5 слабое проявление альцианофилии отмечено в эпидермисе, в области соединительнотканных капсул волосяных фолликулов и прослоек рыхлой волокнистой соединительной ткани в гиподерме (Рисунок 9а, 9б), другие структуры альцианофильного связывания не проявляли.
Кроме коллагеновых и эластических волокон, на которые приходится до 78% объема дермы, в ней содержатся такие дериваты кожи, как комплексы сальных желез и волосяные фолликулы, занимающие до 22%. Волосяные влагалища у животного, в основном, расположены в сетчатом слое и окружены циркулярно 2-3 слоями клеток (Рисунок 10). Сальные железы имеют по 1-2 дольки, которые также окружены соединительной тканью.
Клеточные популяции локализуются, в основном, в сетчатом слое и имеют следующий состав: фибробласты (78,6%), макрофаги (8,4%), тканевые базофилы (6,7%), лимфоциты (4,1%), гранулоциты (2,2%). Наблюдалась следующая закономерность: чем ниже от базальной мембраны, тем меньше становилось содержание зрелых фибробластов, что подтверждает тот факт, что клеточный дифферон соединительной ткани является фибробластическим.
Гиподерма (hypoderma) представлена у хомяков жировыми клетками, которые формируют дольки и разграничены прослойками рыхлой соединительной ткани, толщина её – 317,4±99,4 мкм, что составляет 41% от общего строения кожи. В соединительной ткани содержатся кровеносные сосуды в большом количестве (6,24%), кроме того, здесь присутствует гладкие мышечные волокна – 233,08±1,8 мкм (Рисунок 11).
Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы (контрольная группа)
После термического воздействия на кожу животного описанным выше способом хомяки вели себя активно, не отказывались от еды, питья, что обусловлено не только седативным эффектом «Севорана», но и его анальгезирующим действием. В течение последующих суток, в связи с объёмом нанесённого повреждения, они становились менее подвижны, редко принимали пищу, обильно пили, что связано с дегидратацией организма на фоне экссудативных процессов. В месте ожоговой раны наблюдаются выраженные структурные и тинкториальные макроскопические изменения. В течение первых суток появляется отечность ткани, края раны с выраженным покраснением, на поверхности определяется фрагмент влажного некроза, захватывающего все слои повреждённых тканей (Рисунок 14).
В этот срок во всех экспериментальных группах микроскопически наблюдался выраженный отек дермы, деструкция и гомогенизация коллагеновых волокон, волосяных фолликулов и сальных желез (толщина до 161,35±12,1 мкм (p 0,01)). Эпидермис представлял собой гомогенную массу с обширными бесклеточными участками и достигал размера 25,59±3,2 мкм (p 0,01). В клетках происходили такие общепатологические процессы, как кариопикноз с выраженным кариорексисом. В гиподерме (114,74±4,9 мкм, p 0,01) также наблюдалось разрушение цитоплазмы (циторексис), мышечная пластинка была уменьшена в объеме (35,71±1,7 мкм3, p 0,01). Подсчет ядерно цитоплазматического отношения и индекса пролиферации клеток базального слоя эпидермиса в данный период затруднен (Рисунок 15А), также в материале отсутствали признаки острого воспаления. Экспрессия Ki-67 и CK-14 в данный период полностью отсутствовала (Рисунок 15Б).
При окрашивании препаратов орсеином по Тенцеру – Унну выявлено сохранение эластических волокон в дерме краев кожной раны. В области раневого дефекта специфично окрашивались только эластичные мембраны сосудов дна кожной раны. Артерии были преимущественно расширены, а вены дилатированы (Рисунок 17 А, Б, В).
При окрашивании препаратов альциановым синим с рН=1,0 альцианофильное связывание наблюдалось в дерме и соединительнотканных прослойках гиподермы неповрежденных участков кожи (Рисунок 18А, 18Б). В области ожоговой раны окрашивания не наблюдалось (Рисунок 18А).
При окрашивании срезов альциановым синим с рН=2,5 связывание красителя наблюдалось в области формирования грануляционной ткани в раневом дефекте и в области эпидермиса неповрежденной кожи (Рисунок 19).
Наиболее интенсивная ШИК-положительная реакция отмечена паравазально (Рисунок 20А). Подвергшийся ожогу участок кожи окрашивался менее интенсивно (Рисунок 20Б).
С краев отмечалось сохранение волосяного покрова. В области гиподермы имелись бесструктурные участки (Рисунок 21А).
В поврежденной коже фибробласты преимущественно были деструктурированы, однако встречались и типичные по форме и строению клетки (Рисунок 22). В данный период, как и в опытной серии, наблюдалась гистологическая картина формирования коагуляционного некроза в зоне повреждения.
На 3 сутки макроскопическая картина – без особой положительной динамики. Гистологически в области ожога у животных контрольной серии отмечалось дальнейшее деструктурирование коагулированного участка кожного покрова (Рисунок 24).
При проведении рентгеновского элекронно-зондового микроанализа содержание элементов никеля и титана во всей толще кожного покрова не определялось. В спектре наблюдались преимущественно элементы напыления Pt и Pd и элементы с возможностью перекрытия их орбиталей (Рисунок 25).
На 5-7 сутки после травмы повреждённая поверхность покрывалась утолщенным струпом серовато-бурого цвета, который был плотно спаян с подлежащими тканями и заходил за края раны, местами наслаиваясь на интактную часть кожи. Края раны были утолщены и возвышались над струпом (Рисунок 26).
В этот период в эпидермисе в срединной (центральной) части ожогового поля, как и в начале эксперимента, продолжался процесс дегенеративных изменений (толщина 38,42±6,7 мкм, р0,01), признаки паракератоза полностью отсутствовали. В дерме и гиподерме отмечались: отек ткани, паретически расширенные сосуды, их полнокровие, в некоторых наблюдалось образование тромбов. За счет изменения проницаемости микрососудов, в интерстициальном пространстве наблюдался выраженный отек, за счет этого лимфатические сосуды были сдавлены. Однако в этих участках в данный период новообразованных дериватов не наблюдалось.
Отмечалась васкуляризация дермы сосудами капиллярного типа (Рисунок 27А, Б). В соединительной ткани, выстилающей дно ожоговой раны, определялись сосуды более крупного звена сосудистого русла (артерии и вены) (Рисунок 28 А, Б, В).
Выраженные изменения наблюдались в краях раны, где происходило утолщение струпа за счет отека. В некоторых участках происходило его отслоение. Эластический каркас сохранялся в дерме краев кожной раны (Рисунок 30А), в области термического повреждения наблюдались деструктурированные эластические волокна (Рисунок 30Б).
В тканях в проекции кожной раны и в неповрежденных ее краях отмечалась диффузная лейкоцитарная инфильтрация, свидетельствующая о выраженном воспалительном ответе (Рисунок 31, 32).
При окрашивании препаратов альциановым синим с рН=1,0 альцианофильное связывание наблюдалось только в дерме краев кожной раны (Рисунок 33А, 33Б), в зоне повреждения оно отсутствовало (Рисунок 33В).
При рН=2,5 наружная часть поврежденной кожи не давала окрашивания. Однако в глубоких зонах, формирующих дно ожоговой раны, и в краях раны отмечено слабое альцианофильное связывание. Слабое окрашивание наблюдалось в дерме и в соединительнотканных прослойках гиподермы, капсулах новообразованных волосяных фолликулов (Рисунок 34 А, Б, В).
На 14 сутки в контрольной группе макроскопически наблюдалась углубленная рана, покрытая темным струпом с очагами изъязвлений, наползающим на её края (Рисунок 35).
Микроскопический анализ раны показал в центре раны сохранение фрагментов коагулированного кожного покрова, гипертрофию ее краев и возвышение над областью ожогового поля. На границе с повреждённой поверхностью край эпителиального пласта, состоящий из 2-3 слоев клеток, входил клином, отделяя струп от подлежащих структур на протяжении 0,3-0,7 мкм с неширокой полосой дермы, представленной отечной рыхлой волокнистой соединительной тканью (Рисунок 36). Кроме того, в области границы между повреждённой и неповрежденной частями отмечалось восстановление эпителиального пласта единичными камбиальными клетками волосяных фолликулов. Они располагались в сетчатом слое дермы и подтверждают тот факт, что также являются источником репаративной регенерации эпидермиса. В данный срок определялся высокий уровень пролиферативной активности (60%), как в восстанавливающемся покровном эпителии, так и в эпителии придатков кожи, кроме этого, было отмечено присутствие маркера Ki-67 и в эндотелиальных клетках микрососудов грануляционной ткани.
Морфометрическая и гистологическая характеристика кожи сирийского хомяка после термической травмы с воздействием супернатанта слава никелида титана (опытная группа)
В данном разделе представлены результаты сравнительного изучения динамики ожоговой раны при воздействии на ожоговую рану супернатанта сплава никелида титана (III группа эксперимента).
В экспериментальной группе особых различий в макро- и микроскопических картинах на первые сутки в сравнении с контрольной группой не наблюдалось.
На 3-4 сутки после термического воздействия раневая поверхность расположена на одном уровне с поверхностью края раны. Образовавшаяся корочка имела вид более светлый и тонкий, чем в контрольной группе (Рисунок 60).
При микроскопическом исследовании в этот срок поврежденный участок кожного покрова состоял из структурно измененных эпидермиса и дермы. Эпидермис был представлен некротизированной тканью, дерма – спаянными отечными утолщенными коллагеновыми волокнами с некротически измененными участками (Рисунок 61А).
Кроме этого, микроскопически у некоторых опытных животных в краях наблюдалось утолщение сохранного эпителиального пласта и нарастание его на раневую поверхность на 250-300 мкм. Регенерирующий эпителий в виде «языка» подрастал под струп и стелился по обнажающейся раневой поверхности, образованной грануляционной тканью (Рисунок 61Б, 62).
Здесь отмечались участки повышенной клеточности, преимущественно лейкоциты. В более глубокой части этой же зоны находились гиперемированные микрососуды (Рисунок 63Б) с признаками выраженного диапедеза, участки геморрагий (Рисунок 63А).
Между фрагментами поврежденной и сохраненной гиподермы отмечались участки грануляционной ткани с обилием микрососудов, преимущественно капиллярного типа (Рисунок 64А, 64Б). Со стороны здоровых тканей в поврежденный участок врастали небольшие по протяженности до 250 мкм тяжи рыхлой волокнистой соединительной ткани с активно пролиферирующими клетками фибробластического дифферона (Рисунок 64В). В краях раны наблюдались нервные стволики с утолщенными соединительнотканными оболочками (Рисунок 64Г) и сохраненные волосяные фолликулы.
При окрашивании препаратов альциановым синим при рН=1,0 альцианофилия наблюдалась в дерме и гиподерме неповрежденных участков кожи (Рисунок 66А, Б). В области ожоговой раны окрашивания не наблюдалось.
Наиболее интенсивное ШИК-положительное окрашивание отмечено в области грануляционной ткани. Подвергшийся ожогу участок кожи был слабо окрашен (Рисунок 68А), еще менее интенсивное окрашивание обнаруживалось в краях кожной раны (Рисунок 68Б).
Исследования, проведенные методом сканирующей электронной микроскопии, показали, что в области ожоговой раны волокнистый остов выглядел, как спаянный конгломерат, эпидермис был связан с дермой (Рисунок 69А, Б).
С наружной поверхности кожного покрова сохранялся волосяной покров с неравномерным распределением волос. В области гиподермы отмечены бесструктурные участки. На границе раны и неповрежденных участков также обнаруживалось подрастание под поврежденный участок эпидермиса с подлежащей волокнистой частью (Рисунок 69В).
Клеточный состав представлен преимущественно клетками лейкоцитарного ряда (Рисунок 70А), моноцитами и единичными макрофагами (Рисунок 70В), эритроцитами и лимфоцитами (Рисунок 70Б). Встречающиеся в поврежденном участке фибробласты, как правило, были деформированы (Рисунок 70Г) или запаяны в бесструктурный отечный волокнистый остов (Рисунок 70В). Таким образом, в данный период можно отметить формирование коагуляционного некроза в зоне термического повреждения.
В сравнении с контролем, в опытной группе на 3 сутки проводился рентгеновский электронно-зондовый микроанализ. Отмечено содержание элементов никеля и титана во всей толще кожного покрова (Рисунок 71А, Б). Данный факт свидетельствует о проникновении ионов никеля и титана в структуры кожного покрова.
На 4-5 сутки в опытной группе макроскопически наблюдалось размягчение струпа, сопровождающееся его отторжением с краев, которое проходило быстрее по сравнению с контролем (Рисунок 72). На 7-8 сутки происходило его отделение уже больше, чем с половины площади раны, в этих участках наблюдалась полноценная молодая грануляционная ткань. Следует заметить, что макроскопически выраженных воспалительных изменений раны не отмечалось.
Микроскопический анализ гистологических препаратов показал, что в области поврежденного участка наблюдалось деструктурирование поврежденного в результате термического воздействия кожного покрова (Рисунок 73А). В срединной (центральной части) ожогового поля он был отграничен от подлежащих тканей лейкоцитарным валом (Рисунок 73Б). Под ним определялась новообразованная рыхлая соединительная ткань с зачатками дериватов (Рисунок 73В), обильно пронизанная сосудами капиллярного типа, и в глубокой части – микрососудами с расширенными просветами, заполненными единичными эритроцитами (Рисунок 73Г). Необходимо заметить, что эндотелий микроциркуляторного русла восстановился полностью.
Со стороны краев кожной раны в области раневого дефекта под поврежденный деструктурированный кожный покров на значительном протяжении (2,0-2,5 мкм) врастали участки новообразованного регенерирующего кожного покрова (Рисунок 74А), представленного 4-5 рядами эпителиальных клеток и подлежащей рыхлой волокнистой продольно ориентированной соединительной ткани с многочисленными пролиферирующими фибробластами (Рисунок 74Б) и зачатками дериватов (сальных желез и волосяных фолликулов). В этих участках базальные клетки эпителиального пласта имели пузыревидные ядра, поверхностные были пикнотичными. В некоторых местах наблюдались небольшие глыбки кератогиалина, что указывало на начавшийся здесь процесс ороговения. Кроме этого, наблюдалось отслоение струпа от новообразованного участка кожного регенерата (Рисунок 74В). В некоторых участках (ближе к центру раны), где полного отслоения еще не происходило, в некротизированных участках кожи отмечено образование многочисленных полостей (Рисунок 74Б).