Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Секреторные кардиомиоциты - главные составляющие эндокринной системы сердца в регуляции артериального давления 14
1.1.1. Предсердный натрийуретический пептид – основной гормон секреторных кардиомиоцитов: действие в органах-мишенях и факторы, влияющие на его образование и выделение .17
1.1.2. Диагностическая и практическая значимость предсердного натрийуретического пептида 25
1.2. Морфологические и функциональные изменения в сердце при нарушениях кровоснабжения и гемодинамики 27
1.3. Роль препарата Мексидола при коррекции повреждений сердца, вызванных нарушением кровоснабжения .38
2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Характеристика экспериментальных групп животных 44
2.1.1. Модель клинической смерти по Корпачеву 46
2.1.2. Модель изолированной перфузии по Лангендорфу 47
2.1.3. Модель перевязки левой почечной артерии по Когану 48
2.2. Методы исследования .48
2.2.1. Морфологическое исследование миокарда правого предсердия и левого желудочка .48
2.2.2. Иммуноцитохимическое и иммуногистохимическое определение предсердного натрийуретического пептида в миокарде правого предсердия .51
2.2.3. Физиологический контроль: измерение артериального давления и анализ вариабельности сердечного ритма .53
2.3. Методы математической обработки результатов исследования 56
3. Результаты собственных наблюдений 57
3.1. Ультруктура секреторных кардиомиоцитов интактных крыс 57
3.2. Исследование секреторных кардиомиоцитов в раннем постреперфузионном периоде 61
3.3. Секреторные кардиомиоциты в изолированном по Лангендорфу сердце крысы 78
3.4. Влияние антигипоксанта Мексидола на секреторные кардиомиоциты в целостном организме в раннем постреперфузионном периоде и в изолированном по Лангендорфу сердце крысы 88
3.5. Исследование секреторных кардиомиоцитов в отдаленном постреперфузионном периоде 103
3.6. Секреторные кардиомиоциты в условиях хронической гипертензии разного генеза .118
4. Обсуждение полученных результатов .142
Заключение .173
Выводы 176
Список сокращений и условных обозначений 179
Список литературы .
- Предсердный натрийуретический пептид – основной гормон секреторных кардиомиоцитов: действие в органах-мишенях и факторы, влияющие на его образование и выделение
- Модель изолированной перфузии по Лангендорфу
- Иммуноцитохимическое и иммуногистохимическое определение предсердного натрийуретического пептида в миокарде правого предсердия
- Влияние антигипоксанта Мексидола на секреторные кардиомиоциты в целостном организме в раннем постреперфузионном периоде и в изолированном по Лангендорфу сердце крысы
Предсердный натрийуретический пептид – основной гормон секреторных кардиомиоцитов: действие в органах-мишенях и факторы, влияющие на его образование и выделение
В кардиомиоцитах ПНП синтезируется в виде прогормона (проПНП), состоящего из 126 аминокислотных остатков. Перед тем, как попасть в кровоток, предшественник расщепляется, образуя у человека 98-аминокислотный терминальный фрагмент (неактивный) и 28-аминокислотный карбокси-терминальный фрагмент, являющийся зрелым ПНП. Оба фрагмента циркулируют в плазме [61, 119, 276, 286, 288, 303].
По литературным данным, высвобождение пептида из гранул кардиомиоцитов осуществляется путем экзоцитоза или диффузии [73]. Установлено участие кавеол в процессе высвобождения ПНП: гранулы с проПНП напрямую взаимодействуют с этими мембранными структурами, где, предположительно, происходит его расщепление с помощью протеазы корина на два активных фрагмента и выход их из клетки [222, 267, 271, 314]. Корин относится к II типу трансмембранных белков с внеклеточным каталитическим доменом, локализованным в плазмалемме, поэтому предполагается, что распадение молекулы проПНП происходит в момент секреции гормона в кровоток [316]. Известно, что для образования активной формы протеазы необходимо также отщепление от первоначально синтезируемой молекулы [224]. В нормальном состоянии только небольшое количество фермента активируется в кардиомицитах. При сердечной недостаточности, повышении АД выявлено увеличение мРНК корина в левом желудочке. Предполагается, что регуляция его у человека осуществляется в основном на уровне протеолитического расщепления [210]. Корин выявили в проксимальных канальцах почки, где также осуществляется преобразование проПНП в ПНП [182].
При попадании в кровоток ПНП активирует одновременно три типа рецепторов – NPR-А, NPR-B и NPR-C, расположенных на мембранах органов – «мишеней». Рецепторы А и В связаны с цГМФ – зависимым сигнальным каскадом (ПНП обладает большей афинностью к NPR-A), состоят из пяти доменов, включающих: внеклеточный лиганд-связанный (с которым непосредственно контактирует ПНП), короткий трансмембранный, гомологичный киназе, домен димеризации и гуанилилциклазный [217, 266]. При связывании пептида с NPR-А, NPR-B, мембраносвязанная гуанилатциклаза превращает гуанозинтрифосфат в циклический гуанозинмонофосфат (цГМФ), который активирует цГМФ – зависимые энзимы и ионные каналы: протеинкиназы, фосфодиэстеразы и др., которые реализуют физиологические эффекты ПНП [226, 254, 266].
Третий тип рецепторов NPR-C считается ответственным за клиренс ПНП, ассоциирован с сигнальным G – белком [252]. Состоящий из 37 аминокислот цитоплазматический сегмент рецептора располагается в клубочковых и сосудистых структурах почек, а также в надпочечниках, легких, мозге, сердце и стенке сосудов [266]. Выведение ПНП осуществляется двумя независимыми путями: - ферментативная деградация с помощью нейтральной эндопептидазы, гидролизующей пептидные связи аминокислот в его молекулах, наибольшее количество которой выявляется в эпителиальных клетках проксимального канальца нефрона; - связывание с рецепторами типа С с последующим эндоцитозом и лизосомальной деградацией. В условиях постоянной повышенной продукции ПНП нейтральная эндопептидаза играет ведущую роль в связи с угнетением экспрессии С-рецепторов [61, 131, 276].
Основным свойством пептида является снижение АД, которое осуществляется несколькими способами. ПНП увеличивает натрийурез и диурез опосредованно через почечную гемодинамику и путем прямого воздействия на собирательные трубочки. Пептид вызывает дилатацию приносящих и констрикцию выносящих артериол, способствует повышению давления в клубочковых капиллярах и увеличению фильтрации. ПНП стимулирует аккумуляцию цГМФ в мезангиальных клетках, что приводит к их релаксации и расширению эффективной поверхности для фильтрации; ингибирует ангиотензин II, положительно влияет на натриевый и водный транспорт в проксимальных извитых канальцах. В собирательных трубочках коркового вещества пептид подавляет обмен воды путем антагонизма действия вазопрессина; стимулируя образование цГМФ, блокирует абсорбцию натрия в собирательных трубочках мозгового вещества; ингибирует синтез ренина в почках и альдостерона в надпочечниках [137, 173; 244].
Гормон снижает объем жидкости в кровотоке за счет увеличения проницаемости эндотелия сосудов и вазодилятации [163, 183, 119, 221, 315]. К кардиоваскулярным эффектам относятся уменьшение пред- и пост-нагрузки на сердце за счет перераспределения объема жидкости; увеличение венозного сопротивления и натрийуреза приводит к уменьшению воды в межклеточном пространстве [61, 216, 221, 266].
Установлено влияние ПНП на электрофизиологическую функцию сердца, которое осуществляется двумя механизмами: 1) путем угнетения симпатической и активации парасимпатической компоненты автономной нервной системы; 2) через ослабление тока кальция в клетку за счет ингибирования каналов ICaL. При этом активированный пептидом цГМФ способствует работе кальциевой АТФазы, которая переносит внутриклеточный кальций в саркоплазматический ретикулум и снижает риск кальциевой перегрузки [274]. Исследователями было показано, ПНП предотвращает так называемое электрическое ремоделирование, которое может приводить к фибрилляции предсердий [197, 200, 291].
Гормон снижает симпатический тон в периферических сосудах за счет подавления барорецепторов, угнетения выброса катехоламинов из окончаний автономной нервной системы и через ингибирование в центральной нервной системе. ПНП уменьшает порог активации вагусных афферентов, подавляя рефлекс тахикардии и вазоконстрикции, что со сниженной пред-нагрузкой обеспечивает устойчивый уровень АД [221, 266].
Пептид вызывает торможение роста гладкомышечных и эндотелиальных клеток сосудов [207, 237, 298, 301]; обладает антимитогенной активностью, ограничивая пролиферативную или гипертрофическую реакцию миокарда в ответ на повреждение и ишемию [61]; модулирует рост сосудистой стенки при атеросклерозе, гипертензии и рестенозе после ангиопластики [216, 221, 266]. В опытах in vitro ПНП вызывает апоптоз миоцитов, подавляет рост фибробластов и отложение коллагена в сердце, снижает пролиферативное ремоделирование [61, 131, 225, 232, 298]. Установлено, введение гормона ингибирует действие норадреналина, которое усиливает рост кардиомиоцитов и фибробластов [173, 266]; стимулирует дифференцировку последних в миофибробласты [251]. Также показано паракринное действие пептида в развивающемся миокарде желудочков, обеспечивающее баланс между пролиферацией и дифференцировкой сердечных прогениторных клеток [196]. ПНП уменьшает гипертрофию кардиомиоцитов при сердечно - сосудистой патологии [150, 190, 215, 246]. Выявлено, аннексин А6 (миокардиальный кальций-зависимый фосфолипидсвязывающий белок), запускающий ПНП-зависимый противогипертрофический ответ, располагается в сарколемме и мембранных структурах (в т.ч. везикулах), участвует в транспорте пептида, слиянии секреторных пузырьков с плазмалеммой в ходе экзоцитоза [150, 161, 211, 227, 247].
Модель изолированной перфузии по Лангендорфу
Модель клинической смерти создавали 10-ти минутным пережатием сосудистого пучка сердца [74]. Выбор данной модели обусловлен наименьшей травматизацией животных и лучшей выживаемостью крыс при остановке системного кровотока, что необходимо для получения результатов в постреперфузионном периоде. Перед интубацией трахеи крыс наркотизировали барбитуратом натрия (25 мг/кг) внутрибрюшинно. Остановку кровообращения производили путем полного пережатия сосудистого пучка сердца внутриторакально без вскрытия грудной клетки и без пневмоторакса специальным Г-образным крючком, изготовленным из иглы для инъекций (рисунок 1).
Крючок вводили на уровне третьего межреберья справа по парастернальной линии, параллельно оси позвоночника. Кожу, межреберные мышцы и париетальную плевру прокалывали концом пережимающей части. Затем держатель поворачивали в положение, перпендикулярное позвоночнику, изгиб крючка заходил в плевральную полость. Далее крючок опускали вниз к позвоночнику до легкого упора и производили поворот держателя (рисунок 1(1)) против часовой стрелки на 100-110, а прижимающую часть зажима (рисунок 1(2)) подводили под сосудистый пучок сердца. Далее крючок поднимали перпендикулярно вверх, прижимая нижнюю полую и безымянные вены, легочную артерию, и аорту к грудине. Грудину придерживали пальцем. Трахея при этом не пережималась, кровообращение полностью прекращалось - это начало тотальной ишемии. Через 3 мин 30 с - 4 мин крючок извлекался из грудной клетки в обратной последовательности, животное продолжало находиться в таком состоянии до начала реанимации.
Реанимационные мероприятия проводили с помощью наружного массажа сердца и искусственной вентиляции легких. Эндотрахеально вводили 0,1 мл 0,1% раствора адреналина. Наружный массаж сердца осуществляли ударами указательного и среднего пальца или ребром ладони по грудине на уровне четвертого межреберья с частотой 120 ударов в минуту. В экспериментах с препаратом введение осуществляли после реанимации внутрибрюшинно в течение первого часа дробно (через каждые 20 минут) в дозе 25 мг/кг [110].
Для создания модели изолированного сердца у гепаринизированных (500 МЕ/кг) крыс вводили барбитурат натрия внутрибрюшинно (35 мг/кг), после наркотизирования вскрывали грудную клетку, выделяли аорту и иссекали сердце. Изолированное сердце подключали к перфузионной установке. Для перфузии по Лангендорфу использовали физиологический раствор Кребса-Хензелейта следующего состава (ммоль/л): NaCl 130, КС1 4, NaH2P(V2H20 1,1, NaHC03 24, MgCl2 1, СаС122Н20 1,8, глюкоза 5,6. Раствор насыщали карбогеном (95% 02 - 5% С02), рН составлял 7,3-7,4. Температуру раствора в перфузионной камере поддерживали с помощью термостата с функцией охлаждения, она составляла 37С [50, 51]. Для мгновенного перехода на перфузию с Мексидолом использовали два холодильника, один из которых заполняли контрольным раствором Кребса-Хензелейта, а в другой добавляли препарат в дозе 25 мг/кг [20, 59]. После подключения к установке 15 мин от начала перфузии был период адаптации. В серии с Мексидолом, перфузию с препаратом проводили в течение часа. При моделировании ишемии перфузионный раствор перекрывался на 10 минут, затем, после возобновления перфузии, в течение 60 минут длился восстановительный период (с введением Мексидола или без).
Модель перевязки левой почечной артерии по Когану была использована для исследования вазоренальной гипертензии (ВГ), которая развивалась через 30 суток после операции [37, 68, 111].
Крысу наркотизировали барбитуратом натрия (25 мг/кг) внутрибрюшинно и фиксировали к столику животом вниз. Выстригали шерсть на спине, в области нижних грудных и поясничных позвонков. Разрез кожи длиной 2-3см производили параллельно позвоночнику, на 0,5см латеральнее; верхний край разреза начинали с левой стороны на 1см ниже реберной дуги, т.к. левая почка расположена ниже правой. Рассекали подкожные фасции до обнажения апоневроза, который напоминал римскую цифру «V». Вершина «пятерки» располагалась на позвоночном столбе. Далее, делали надрез правой стороны «апоневротической пятерки». Пинцетами, тупым путем, расширяли щель между жировой клетчаткой и околопозвоночными мышцами. Аккуратно извлекали почку, смачивали физиологическим раствором, затем отпрепаровывали почечную артерию и накладывали лигатуру. В эксперимент отбирались животные, у которых развилась вазоренальная гипертензия через 30 суток после операции.
Сравнительное исследование правого предсердия и левого желудочка проводили у одних и тех же животных: правое предсердие полностью забирали для электронно-микроскопического анализа; близлежащие участки миокарда левого желудочка изучали на светооптическом и субмикроскопическом уровнях. Исследование левого желудочка на парафиновых срезах применяли для анализа структурно-функционального состояния миокарда, отражающего реакцию сердца в целом на воздействие патологического фактора.
Метод трансмиссионной электронной микроскопии
Электронно-микроскопический анализ миокарда правого предсердия и левого желудочка был проведен у всех экспериментальных групп, в том числе изолированных перфузируемых сердец крыс (таблицы 1, 2). Под нембуталовым наркозом (35 мг/кг) извлекали сердце, забирали полностью правое предсердие и часть левого желудочка; фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида на фосфатном буфере (рН=7,4) и в 1% растворе OsO4. Материал обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заключали в смесь ЭПОН-АРАЛДИТ [14].
Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме UС7 (Leica, Австрия). Полутонкие срезы толщиной 1 мкм окрашивали метиленовым синим и основным фуксином. Ультратонкие срезы толщиной 75 нм контрастировали уранилацетатом, цитратом свинца и анализировали в электронном микроскопе Morgagni 268D (FEI, США).
На электронных микрофотографиях с увеличением х14000 в программе AnalySIS Docu 3.2 (Soft Imaging System GmbH; поставленной фирмой FEI), проводили морфометрический анализ площадей митохондрий, миофибрилл, саркоплазматического ретикулума и саркоплазмы кардиомиоцитов правого предсердия и левого желудочка в следующих экспериментальных сериях: - интактных;
Иммуноцитохимическое и иммуногистохимическое определение предсердного натрийуретического пептида в миокарде правого предсердия
В ультраструктуре миоцитов левого желудочка выявили такие же незначительные изменения, как и в правом предсердии: расширение цистерн саркоплазматического ретикулума (рисунок 33); в отдельных участках миокарда межклеточный отек.
Таким образом, в эндокринных кардиомиоцитах в изолированном по Лангендорфу сердце крысы наблюдается увеличение количества гранул с ПНП по сравнению с показателями интактных животных. Общее число гранул численно совпадает с показателем животных через 60 мин ПРП на фоне незначительного расширения саркоплазматического ретикулума и развития умеренного межклеточного отека. Морфологическая картина миокарда изолированного сердца напоминает ультраструктуру кардиомиоцитов крыс в раннем ПРП. Эти данные подтверждают гипотезу о независимости гранулообразования в секреторых миоцитах от внешних нейроэндокринных факторов, а также являются доказательством, так называемой функциональной изоляции сердца крыс через 60 мин ПРП. В то же время, выведение пептида из гранул в саркоплазму в миоцитах изолированного сердца несколько ниже, чем через 60 мин ПРП (по количеству гранул В - типа).
С целью изучения влияния факторов ишемии/ реперфузии на особенности гранулообразования в эндокринных кардиомиоцитах и содержание в них ПНП поставлены эксперименты на изолированных по Лангендорфу сердцах с 10-ти минутной тотальной ишемией и последующей реперфузией.
С помощью субмикроскопического анализа миокарда правого предсердия и левого желудочка изолированного сердца после 10 минутной ишемии и последующей реперфузии выявили в ядрах кардиомиоцитов значительные инвагинации кариолеммы, единичные ядрышки. Хроматин определяется как в клетках контрольных сердец: наблюдается преобладание эухроматина, который образовывает небольшие глыбки и умеренно агрегируется у кариолеммы (рисунок 34).
Участок миокарда правого предсердия изолированного по Лангендорфу сердца крысы, после 10 мин ишемии и последующей реперфузии: в кардиомиоцитах выявлен лизис миофибрилл (показано стрелками). Ув. х3500.
В кардиомиоцитах левого желудочка имеет место незначительное тотальное расширение перинуклеарного пространства (рисунок 35). Вблизи комплекса Гольджи наблюдается увеличение количества секреторных гранул в миоцитах правого предсердия. Морфометрическим анализом опытных образцов показано увеличение А – типа на 13%, В – на 56% и общего количества гранул с ПНП – иммунореактивной меткой на 27% относительно показателей контрольной серии изолированных сердец. Соотношение А - и В - типов составляет 60% и 40%, соответственно (рисунок 36, Приложения, таблица 5). 84 # - достоверность различий с изолированным сердцем, р 0,05 (критерий Манна Уитни). Интересно отметить, что численные значения всех типов гранул и их общего количества у изолированных сердец после 10 мин ишемии с последующей реперфузией достоверно не отличается от показателей экспериментальных животных через 60 мин ПРП в условиях целостного организма (рисунок 37, Приложения, таблица 5).
Митохондрии кардиомиоцитов правого предсердия и левого желудочка определяются в основном конденсированной формы с плотным матриксом и кристами. Встречаются вакуолизированные формы. Миофибриллы в большинстве миоцитов имеют четкую неизмененную структуру, в единичных случаях выявляются участки расслоения, дезориентации миофибрилл в области вставочных дисков (рисунок 38) и разволокнения (рисунок 34).
Саркоплазматический ретикулум значительно расширен в большинстве клеток обоих отделов сердца. В саркоплазме определяются цитоплазматические гранулы, визуально в меньшем количестве, чем в контрольных изолированных сердцах (рисунок 32).
Рисунок 38. Ультраструктура кардиомиоцита левого желудочка изолированного по Лангендорфу сердца крысы, после 10 мин ишемии и последующей реперфузии: расслоение, дезориентация миофибрилл в области вставочного диска. Ув. х8900.
Внутриклеточный отек выявляли в единичных кардиомиоцитах (рисунок 34). Сарколемма сохраняет свою структуру, местами образовывает складки (инвагинации). В ткани миокарда обнаруживается выраженный межклеточный отек (рисунок 39).
Таким образом, в изолированном по Лангендорфу сердце крысы 10-ти минутная ишемия и последующая реперфузия приводят к нарастанию деструктивных процессов в эндокринных кардиомиоцитах и значительному повышению интенсивности процессов накопления в гранулах и выведения в саркоплазму ПНП. Показано превалирующее влияние факторов ишемии/реперфузии на гранулообразование и синтетическую активность предсердных миоцитов независимо от воздействия внешних нейрогуморальных факторов.
Влияние антигипоксанта Мексидола на секреторные кардиомиоциты в целостном организме в раннем постреперфузионном периоде и в изолированном по Лангендорфу сердце крысы
Таким образом, препарат Мексидол значительно увеличивает гранулообразование и синтетическую активность секреторных кардиомиоцитов в условиях раннего ПРП. При этом наблюдается сохранность мембранных структур, умеренное расширение цистерн саркоплазматического ретикулума на фоне улучшения микроциркуляции по сравнению с контрольной серией. Преобладание среди митохондрий форм с увеличенной площадью, по-видимому, приводит к достаточному обеспечению макроэргическими соединениями, что влияет на гранулообразование в эндокринных миоцитах правого предсердия (r=0,44). Влияние Мексидола на секреторные кардиомиоциты изолированного по Лангендорфу сердца и изолированного сердца после 10 мин ишемии с последующей реперфузией
Для выявления воздействия Мексидола на эндокринные кардиомиоциты в условиях полной изоляции сердца и при воздействии факторов ишемии/реперфузии провели ряд экспериментов на модели изолированной перфузии по Лангендорфу с созданием 10 мин ишемии и последующей реперфузии. Ультраструктурный анализ миокарда изолированного сердца после введения Мексидола выявил в ядрах кардиомиоцитов два типа изменений: одни имеют ровные контуры, содержат ядрышки, плотный матрикс и эухроматин с незначительной пристеночной агрегацией (рисунок 50).
Ультрастрактура миокарда правого предсердия изолированного по Лангендорфу сердца крысы, после введения Мексидола: ядра миоцитов с ядрышками, интерстициальный отек. Ув. х5600. В других миоцитах ядра не содержат ядрышки, имеют значительные инвагинации кариолеммы (рисунок 51). В ядрах обоих типов перинуклеарное пространство не расширено.
В кардиомиоцитах правого предсердия определяется комплекс Гольджи с большим количеством секреторных гранул с иммунореактивным материалом к ПНП: морфометрическим анализом показали достоверное увеличение всех типов по сравнению с показателями изолированных сердец без введения Мексидола.
Распределение гранул с ПНП изолированного сердца: контроль, введение Мексидола, ишемия (10 мин) и введение Мексидола: - достоверность различий с изолированным сердцем, р 0,05 (критерий Манна-Уитни). Большинство митохондрий кардиомиоцитов правого предсердия и левого желудочка сохраняет свою структуру, часть органелл имеет просветление матрикса с частичной деструкцией крист, в единичных случаях вакуолизированные. Миофибриллы определяются неизмененными. Саркоплазматический ретикулум не расширен. В единичных случаях наблюдается расхождение вставочных дисков. В саркоплазме выявляются цитоплазматические гранулы, внутриклеточный отек не наблюдается. Сарколемма в большинстве клеток сохраняет целостность, встречаются области с потерей четкости ее контуров, разрыхление и истончение. Интерстициальный отек определяется в некоторых участках миокарда (рисунки 50, 51).
В серии экспериментов с моделированием 10-минутной ишемией на изолированном сердце и последующей реперфузией с введением Мексидола ультраструктурный анализ ткани миокарда изолированного сердца выявил следующие изменения в кардиомиоцитах правого предсердия и левого желудочка. В одних ядрах определяются ядрышки, ровные контуры или незначительные инвагинации кариолеммы, эухроматин, равномерно распределенный в виде зернистости в кариоплазме и по периферии ядра. Другие ядра не содержат ядрышек, имеют выраженные инвагинации кариолеммы, гетерохроматин, агрегированный в глыбки вблизи кариолеммы. Во всех случаях наблюдается умеренное тотальное расширение перинуклеарного пространства иногда с локальной дилатацией (рисунок 53).
В кардиомиоцитах правого предсердия наблюдается значительное количество гранул вблизи комплекса Гольджи, иммуномеченных к ПНП, однако их количественный анализ не выявил достоверных отличий от показателей изолированных сердец после введения препарата без ишемии/реперфузии (рисунок 52, Приложения, таблица 8). Соотношение А и В - типов гранул составляет 67% и 33%, соответственно.
При сравнении показателей изолированных сердец после 10 мин ишемии и реперфузии с Мексидолом и показателей животных через 60 мин ПРП после введения препарата выявили: количество А – типа и общее количество гранул с ПНП – иммунореактивным материалом достоверно не отличаются. Гранул В – типа в изолированном сердце на 25% меньше, чем в сердце в условиях целостного организма (рисунок 54, Приложения, таблица 8).
Саркоплазматический ретикулум визуально в половине миоцитов не расширен, в остальных клетках определяется умеренное расширение его цистерн. В саркоплазме выявляются цитоплазматические гранулы в большем количестве, чем в миокарде изолированного сердца после ишемии без введения Мексидола.
Таким образом, перфузия с Мексидолом оказывает стимулирующее действие на гранулообразование и синтетическую активность секреторных кардиомиоцитов как в контрольной группе изолированных сердец, так и после 10 мин ишемии и реперфузии. Действие препарата происходит на внутриклеточном уровне без влияния внешних факторов и связано с его мембранопротекторными свойствами.
Субмикроскопический анализ миокарда через 60 суток ПРП выявил глубокие структурные нарушения. В ядрах кардиомиоцитов правого предсердия и левого желудочка наблюдается два типа изменений. Одни не содержат ядрышек. Кариолемма имеет сильные инвагинации, гетерохроматин образовывает крупные глыбки в кариоплазме со значительной агрегацией по периферии. Встречаются ядра с дегенеративными изменениями. В других ядра содержат ядрышки, эухроматин, равномерно распределенный в кариоплазме, с небольшой агрегацией у кариолеммы. В большинстве ядер перинуклеарное пространство не расширено, в единичных случаях наблюдаются умеренное тотальное и выраженные локальные его расширения (рисунок 56). Вблизи дилатированного комплекса Гольджи выявляли вторичные лизосомы (рисунок 57); наблюдается большое количество гранул с иммунореактивной меткой к ПНП: анализ показывает увеличение А – типа на 60%, В – на 41%, общего числа гранул на 53% по сравнению с показателями интактных животных (рисунок 58, Приложения, таблица 9). Распределение гранул А и В составляет 66% и 34%, соответственно.