Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Выделение и культивирование МСК 11
1.2. Иммунофенотипическая характеристика МСК 15
1.3. Проявления функциональной активности МСК по отношению к Т-лимфоцитам 21
1.4. Проявления функциональной активности МСК по отношению к В-лимфоцитам 27
1.5. Проявления функциональной активности МСК при аллерген-специфических реакциях лейкоцитов 30
1.6. Изменение функционального состояния МСК при их взаимодействии с компонентами иммунной системы 32
Глава 2. Материалы и методы 37
2.1. Получение и культивирование МСК 37
2.2. Культивирование В-клеточных линий 38
2.3. Дифференцировка МСК 39
2.4. Морфологическая характеристика МСК 39
2.5. Определение пролиферативной активности МСК 40
2.6. Иммунофенотипирование культур МСК 40
2.7. Получение и активация клеток мононуклеарной фракции крови 40
2.8. Выделение популяции В-лимфоцитов 41
2.9. Сокультивирование МСК и клеток мононуклеарной фракции периферической крови 2.10. Сокультивирование МСК и клеток линий Namalva либо U266 42
2.11. Оценка пролиферации лимфоцитов 42
2.12. Иммунофенотипирование лимфоцитов 43
2.13. Иммуноферментный анализ 44
2.14. Оценка уровня продукции иммуноглобулинов 44
2.15. Иммунофлуоресцентная микроскопия 45
2.16. Статистическая обработка результатов 46
Глава 3. Результаты
3.1. Особенности получения МСК из пупочного канатика 47
3.2. Сравнение свойств МСК, культивируемых в нормоксии или в гипоксии 49
3.3. Ростовые характеристики и дифференцировка МСК 55
3.4. Иммунофенотип МСК 58
3.5. Проявления функциональной активности МСК при сокультивировании с лимфоидными клетками 65
3.5.1. Изучение влияния МСК на Т-лимфоциты 65
3.5.1.1. Влияние МСК на активацию Т-лимфоцитов 66
3.5.1.2. Влияние МСК на пролиферацию Т-лимфоцитов 68
3.5.2. Изучение влияния МСК на В-лимфоциты 69
3.5.2.1. Влияние МСК на пролиферацию В-лимфоцитов 69
3.5.2.2. Тестирование функциональной активности МСК на лимфобластоидных и миеломных клетках 73
3.5.3. Влияние МСК на аллерген-специфические реакции лейкоцитов при атопической гиперчувствительности 75
3.6. Влияние клеток мононуклеарной фракции и лимфоцитарных митогенов на функциональное состояние МСК 82
3.6.1. Экспрессия Toll-подобных рецепторов на мембране МСК 82
3.6.2. Локализация транскрипционного фактора NF-B в МСК при действии лимфоцитарных митогенов или при сокультивировании с лимфоидными клетками 84
Глава 4. Обсуждение 99 Выводы 127
Благодарности 128
Список литературы 129
- Проявления функциональной активности МСК по отношению к Т-лимфоцитам
- Морфологическая характеристика МСК
- Ростовые характеристики и дифференцировка МСК
- Экспрессия Toll-подобных рецепторов на мембране МСК
Проявления функциональной активности МСК по отношению к Т-лимфоцитам
Активное изучение МСК, выделенных из различных источников, привело к необходимости более точного описания МСК по сравнению с использованием только культуральных методов (морфология, способность к адгезии к культуральному пластику и колониеобразованию, дифференцировка в остеобласты, хондроциты и адипоциты). Трудность идентификации МСК как отдельного типа клеток заключается в отсутствии на их поверхности специфичных маркеров, по которым можно было бы однозначно определить МСК. Разными авторами был предложен достаточно большой список антигенов для фенотипирования МСК (Mafi et al., 2011). Минимальный набор маркеров для идентификации МСК, составленный Международным обществом клеточной терапии, включает в себя следующие антигены: CD73, CD90 и CD105 а также отсутствие маркеров гемопоэтических клеток CD34, CD45, CD14 (Horwitz et al., 2005).
CD73 является 5 -нуклеотидазой, которая катализирует преобразование нуклеотидмонофосфатов в нуклеозиды. Кроме МСК, CD73 экспрессируется на лимфоцитах, эндотелиальных клетках, клетках гладкой мускулатуры, эпителиальных клетках, и фибробластах (Airas, et al., 1997; Strohmeier et al., 1997; Hashikawa et al., 2003; Tamajusuku et al., 2006). CD73 участвует в регуляции межклеточной адгезии, а также во взаимодействии с фибронектином и ламинином (Stochaj et al., 1989).
CD90, также известный как Thy1, является гликозилфосфатидилинозитол-связывающим белком и вовлечен в регуляцию межклеточного взаимодействия и взаимодействия с матриксом (Leyton, 2013; Rege, Hagood, 2005). Активация CD90 влияет на процессы миграции (в том числе трансэндотелиальной) (Saalbach, et al., 2005), онкогенной трансформации (Liu et al., 2004), пролиферации (Hagood, et al., 2002) и апоптоза (Fujita, et al., 1996). Одной из основных функций CD90 является участие в процессе активации Т-лимфоцитов (Haeryfar, Hoskin, 2004). На поверхности МСК плотность CD90 является максимальной, по сравнению с другими маркерами (Siegel et al., 2013). Ранее экспрессия CD90 была описана для гематопоэтических стволовых клеток, лимфоцитов, фибробластов и нейронов (Craig et al., 1993; Rege, Hagood, 2006; Jurisic et al., 2010). Кроме того, высокий уровень экспрессии CD90 был показан для раковых стволовых клеток (Yang et al., 2008; He et al., 2012; Yan et al., 2013). Недавно на МСК жировой ткани мыши было показано, что клетки с более высоким уровнем экспрессии CD90 характеризуются лучшей способностью к колониеобразованию и остеогенной дифференцировке (Kawamoto et al., 2013). Кроме того, существуют данные о корреляции между иммуномодулирующей активностью МСК и уровнем экспрессии CD90 на их поверхности (Campioni et al., 2009).
CD105 (эндоглин) - это мембранный гликопротеин I типа, который функционирует в качестве дополнительного рецептора для лигандов суперсемейства трансформирующего фактора роста бета (TGF-), включая TGF-1 и TGF -3, активин А и BMP7 (Cheifetz, et al., 1992; ten Dijke et al., 2008). CD105 участвует в регуляции миграции и процессах реорганизации цитоскелета. Высокий уровень экспрессии CD105 наблюдается в местах воспаления, в сосудах, окружающих опухоль, а также сопровождает васкулогенез (Bernabeu et al., 2007). CD105 является одним из основных позитивных маркеров для идентификации МСК (Dominici et al., 2006). Однако популяции МСК могут быть гетерогенны по экспрессии данного маркера, причем уровень экспрессии CD105 коррелирует с их функциональной активностью (Rada et al., 2011; Aslan et al., 2006; Yu et al., 2010; Jiang et al., 2010; Levi et al., 2010). Ранее было показано, что доля CD105+ клеток в адгезионной фракции, полученной при выделении МСК, до 1 пассажа не превышает 61%, и повышается к 3 пассажу (Mitchell et al., 2006). Anderson с соавторами разделили МСК жировой ткани мыши на CD105+ и CD105- клетки, которые, по мнению авторов, являются отдельными субпопуляциями, обладающими различными свойствами. Для CD105- МСК была показана лучшая дифференцировочная способность в адипогенном и остеогенном направлениях по сравнению с CD105+. Кроме того, CD105- МСК обладали более выраженным супрессорным действием на пролиферацию Т-лимфоцитов in vitro. При этом CD105- и CD105+ МСК характеризуются одинаковым пролиферативным потенциалом, способностью к колониеобразованию и уровнем экспрессии остальных поверхностных антигенов. Кроме того, длительное культивирование CD105+ клеток приводило к снижению его экспрессии, характерной и для всей популяции, в то время как CD105- МСК не меняли своего фенотипа и оставались CD105 - негативными. Уровень экспрессии CD105 повышался при добавлении в культуральную среду TGF-1, но только на CD105+ МСК (Anderson et al., 2013).
CD44 является рецептором гиалуроновой кислоты и представляет из себя ассоциированный с цитоскелетом (с белком анкирином) трансмембранный гликопротеин молекулярной массой 80 - 95 кДа. CD44 экспрессируется на поверхности различных типов клеток, включая Т- и В-лимфоциты, моноциты, макрофаги, гранулоциты, фибробласты. CD44 принимает участие во взаимодействии клеток с межклеточным веществом, а также в активации лимфоцитов и их миграции в лимфоузлы (Aruffo, et al., 1990). CD44 необходим для взаимодействия клеток стромы костного мозга (т.е. МСК) с предшественниками В-клеток, что является обязательным условием созревания последних. Экспрессия CD44 на поверхности МСК необходима для их миграции к месту повреждения (Herrera et al., 2007). В тоже время в первичной культуре МСК, полученной из костного мозга (как человека, так и мыши), присутствует популяция клеток, не экспрессирующих CD44, затем, в процессе культивирования, все клетки становятся CD44+ (Qian et al., 2012).
НLA-I (MHC I) - лейкоцитарный антиген человека I класса (главный комплекс гистосовметимости). С помощью HLA-I осуществляется презентация белковых фрагментов Т-цитотоксическим клеткам, которые осуществляют лизис эффекторной клетки при распознавании чужеродных антигенов. Молекулы HLA также выступают в качестве лигандов для KIR (killer-cell immunoglobulin-like receptors) на естественных киллерах (ЕK) (Farag et al., 2002). HLA-I необходимы для защиты клеток от лизиса естественными киллерами, одной из основных функций которых является разрушение опухолевых клеток, у которых снижена или отсутствует экспрессия HLA-I («положительное» распознавание) (Ruggeri et al., 2001). Таким образом, уровень экспрессии HLA-I на поверхности МСК может быть существенной характеристикой при их аллогенной трансплантации, значительно влияющей на иммуногенность и выживаемость МСК, а значит и на эффективность клеточной терапии. Было показано, что МСК экспрессируют на своей поверхности HLA-I (Le Blanc et al., 2003). При этом в части работ упоминается об относительно низком уровне экспрессии HLA-I (Newman et al., 2009, Franquesa et al., 2012), однако прямых свидетельств этому утверждению не приводится. В работе Crop с соавторами было убедительно продемонстрировано, что МСК характеризуются относительно высоким по сравнению с другими типами клеток уровнем экспрессии мРНК HLA-I (Crop et al., 2010). Уровень экспрессии HLA-I на МСК повышается в присутствии INF (Klyushnenkova et al., 2005; Isa et al., 2010; Crop et al., 2010).
Морфологическая характеристика МСК
Для всех проанализированных культур МСК не было выявлено достоверно значимых различий между иммунофенотипом МСК (доля клеток, экспрессирующих CD90, CD105, CD44, СD10, CD13, CD73+, и не экспрессирующих CD45, CD34, CD117, CD14) при культивировании в условиях нормоксии и в условиях гипоксии (см. Главу 3.2.).
Пролиферативная активность МСК повышалась при культивировании в условиях гипоксии по сравнению со стандартными условиями, что выражалось в уменьшении времени удвоения популяции (Рис.3.7). Низкая концентрация кислорода при культивировании также способствовала увеличению длительности поддержания пролиферативной активности in vitro, то есть, возрастало количества пассажей, в течение которых МСК пролиферирровали. Такая закономерность была показана для всех проанализированных культур МСК вне зависимости от источника их получения.
Таким образом, пониженное содержание кислорода (5%) в газовой среде при культивировании оказывало стимулирующее действие на пролиферативную активность МСК из всех источников при сохранении их морфологических характеристик. Дальнейшее изучение функциональной активности МСК проводили при культивировании в условиях гипоксии. пассаж культивирования 9 Рисунок 3.7. Среднее время удвоения популяции МСК, полученных из костного мозга (А), жировой ткани (Б) и пупочного канатика (В), при их культивировании в условиях гипоксии (светло-серые столбцы) и нормоксии (темно-серые столбцы). Указано стандартное отклонение. 3.3 Ростовые характеристики и дифференцировка МСК
Для сравнительной характеристики пролиферативной активности МСК, полученных из разных источников, проанализировали 12 культур МСК костного мозга, 7 культур жировой ткани и 30 культур пупочного канатика. Возраст доноров костного мозга составлял от 21 года до 80 лет (46,2 ± 15,8), жировой ткани – от 37 до 90 лет (59 ± 20,4). В качестве критерия для сравнения пролиферативной активности использовали время удвоения численности популяций МСК.
Наибольшее время удвоения популяции было характерно для культур МСК, полученных из костного мозга. Время удвоения популяции МСК костного мозга было достоверно выше на всех пассажах по сравнению с МСК, полученными из других источников (P 0,05). Пролиферация 4 из 12 культур МСК костного мозга сохранялась в течение 6 пассажей, остальные культуры пролиферировали 7 пассажей. После этого пролиферация прекращалась, большинство клеток в культуре были крупными (более 250 мкм) и имели полигональную форму, с неровными краями и множеством отростков. В течение 7-10 дней после прекращения пролиферации наблюдали массовое открепление клеток от культурального пластика и значительное увеличение доли погибших клеток. На данной стадии отмечали гибель культуры и ее утилизировали.
Время удвоения популяции МСК, полученных из жировой ткани и пупочного канатика, было схожим при культивировании до 6 пассажа. При дальнейшем культивировании (после 7 пассажа включительно) время удвоения популяции было достоверно выше (P 0,05) для МСК жировой ткани, по сравнению с МСК пупочного канатика. Из 7 культур МСК жировой ткани 4 прекратили пролиферировать после 7 пассажа, 2 – после 8 пассажа и клетки одной из культур пролиферировали в течение 9 пассажей.
Пролиферативная активность МСК пупочного канатика сохранялась в течение максимального количества пассажей по сравнению с МСК, полученными из костного мозга и жировой ткани. 22 культуры МСК пупочного канатика пролиферировали до 8 пассажа включительно, 5 культур - до 9 и 3 культуры - до 10 пассажа (Рис.3.8) Время удвоения популяции МСК пупочного канатика для проанализированных культур было практически одинаковым на 3-5 пассажах, но с 6 пассажа существенно различалось между культурами, полученными от разных доноров (от 52 до 194 часов). костный мозг жировая ткань S пупочный канатик 200
Среднее время удвоения популяций МСК, полученных из костного мозга, жировой ткани и пупочного канатика. Указано стандартное отклонение. Таким образом, МСК костного мозга обладали минимальным пролиферативным потенциалом из всех проанализированных культур. Пролиферативная активность МСК, полученных из жировой ткани и пупочного канатика была сходной на ранних пассажах, а при дальнейшем культивировании снижалась более резко у МСК жировой ткани. Пролиферативная активность МСК пупочного канатика сохранялась в течение наиболее длительного времени. Минимальное (относительно других пассажей для одной культуры) время удвоения для МСК вне зависимости от источника их получения наблюдали на 3 пассаже. В связи с этим, в последующих экспериментах использовали культуры на 2-4 пассажах.
МСК, полученные из костного мозга, жировой ткани и пупочного канатика обладали способностью к дифференцировке в адипогенном, остеогенном и хондрогенном направлениях. Анализ способности к дифференцировки проводили на 3 пассаже.
При исследовании способности МСК к дифференцировке через 3 сут после добавления в среду адипогенных стимулов в культурах появлялись клетки, содержащие липидные включения. После 2 недель культивирования такие клетки присутствовали во всех исследованных образцах (Рис.3.9.). При культивировании МСК в среде, содержавшей факторы индукции остеогенной дифференцировки, после 11-х суток клетки начинали формировать минерализированный матрикс, количество которого постоянно увеличивалось (Рис.3.9.).
Ростовые характеристики и дифференцировка МСК
Концентрация IgE в среде после культивирования клеток мононуклеарных фракций в ростовой среде (контроль), или в среде с аллергенами (аллерген), или при сокультивировании с МСК из разных источников в присутствии аллергенов. - данные, достоверно отличные от контроля (Р 0,05).
Таким образом, все культуры МСК блокировали индуцированное аллергеном увеличение концентрации IgE в смешанной культуре с клетками мононуклеарной фракции (Айзенштадт и др., 2015).
Суммируя результаты представленные в данном разделе, можно сделать вывод, что отличия в проявлении иммуносупрессорных свойств МСК различного тканевого происхождения проявляются только в части экспериментальных систем. Они проявлялись при анализе влияния МСК на пролиферацию Т- и В-лимфоцитов (при низкой концентрации МСК относительно эффекторных клеток), продукцию иммуноглобулинов В-клеточными линиями, а также изменение концентрации IL-10. МСК из костного мозга имели менее выраженное влияние, чем МСК полученные из пупочного канатика и жировой ткани.
Влияние клеток мононуклеарной фракции крови и лимфоцитарных митогенов на функциональное состояние МСК
Изменение функционального состояния МСК оценивали по уровню экспрессии TLR3 и TLR4, характеру внутриклеточного распределения NF-B с помощью методов проточной цитофлуорометрии и иммуноцитохимии. Для этого МСК культивировали совместно с клетками мононуклеарной фракции, активированными лимфоцитарными митогенами (ФГА или ЛПС). Контролем служили монокультуры МСК, которые инкубировали с ФГА или с ЛПС. Все эксперименты проводили в двух повторностях на 3 культурах МСК из каждого источника, полученных от разных доноров.
Уровень экспрессии TLR3 и TLR4 на поверхности МСК, полученных из костного мозга, жировой ткани и пупочного канатика, исследовали методом проточной цитофлуорометрии с использованием показателя средней интенсивности флуоресценции.
МСК конститутивно экспрессируют TLR3. При сравнении культур МСК жировой ткани и лимфоцитов периферической крови, полученных от одних и тех же доноров (3 здоровых донора) было показано, что уровень экспрессии TLR3 на поверхности МСК выше, чем на поверхности лимфоцитов (CD45+) (Рис.3.33).
Гистограмма интенсивности флуоресценции МСК костного мозга (черная линия) и лимфоцитов периферической крови (гистограмма с серым фоном), экспрессирующих TLR3. Пунктирная линия – изотипический контроль. Было продемонстрировано индуцибельное усиление экспрессии TLR3 на поверхности МСК. Наибольшее увеличение средней интенсивности флуоресценции МСК, экспрессирующих TLR3, наблюдали при их сокультивировании с клетками мононуклеарной фракции в присутствии лимфоцитарных митогенов: ФГА или ЛПС - на 105±22 % и 120±35%, соответственно. Воздействие ЛПС на монокультуру МСК приводило к увеличению интенсивности флуоресценции МСК, экспрессирующих TLR3, на 29,5±11,3 %. Уровень экспрессии TLR3, а также степень его изменения не зависели от источника МСК. (Рис.3.34.) костный мозг жировая ткань пупочный канатик
Средняя интенсивность флуоресценции МСК, экспрессирующих TLR3 в присутствии митогенов (ЛПС либо ФГА), либо при сокультивировании с интактными (МНФ) или митоген-активированными клетками мононуклеарной фракции (МНФ+ФГА или МНФ+ЛПС). Указано стандартное отклонение. - достоверные различия от контроля при р 0,05. МСК, полученные из разных источников, характеризуются уровнем экспрессии TLR4 (Рис.3.35), который был трудно детектируемым с помощью проточной цитофлуорометрии. Экспрессия TLR4 не изменялась при воздействии митогенов, а также в процессе сокультивирования с клетками мононуклеарной фракции (Рис.3.35).
Экспрессия Toll-подобных рецепторов на мембране МСК
Сокультивирование клеток мононуклеарных фракций с МСК из разных источников приводило к росту количества регуляторных Т-лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+CD127low, в то время как добавление алларгена в культуральную среду клеток мононуклеарной фракции не оказывало влияния на их численность. Повышение выживаемости и пролиферация Т-регуляторных клеток под влиянием МСК является хорошо описанным феноменом (English et al., 2009, 2013; Duffy, 2011) и рассматривается как один из основных мезханизмов, опосредующих иммуносупрессорное действие МСК. В первую очередь это было показано для Т-лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+FOXP3 в смешанной культуре МСК и иммуннокомпетентных клеток здоровых доноров. При использовании в качестве тест-объектов клеток мононуклеарной фракции крови пациентов с аллергией на пылевого клеща подобного эффекта не наблюдали (Kapoor et al., 2012). Расхождения могут быть обусловлены индивидуальными особенностями доноров. В частности, в нашей работе изначальное количество Т-регуляторных клеток и степень его изменения в присутствии МСК варьировала в образцах от разных доноров (Айзенштадт и др., 2015). Это хорошо видно при индивидуальном представлении данных по каждому из доноров клеток мононуклеарной фракции (Рис.4.1.).
Содержание регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+,CD25+,CD127low) относительно Т-клеток в составе мононуклеарных фракций после их культивирования в ростовой среде (контроль), или в среде с аллергенами (аллерген), или при сокультивировании с МСК из различных источников в присутствии аллергенов. По оси абсцисс – номера образцов. Звездочки с горизонтальными отрезками находятся над данными, достоверно отличными от контроля (Р 0,05).
Различия также могут быть связаны с выбором маркеров для идентификации Т-регуляторных клеток (Klein et al., 2010). Аналогично с результатами нашей работы формирование популяции Т-регуляторных клеток с фенотипом CD4+CD25+CD127low наблюдали при сокультивировании МСК и клеток мононуклеарной фракции пациентов с обострением бронхиальной астмы (Li et al., 2013).
Согласно современным представлениям, снижение количества и (или) функциональной активности Т-регуляторных клеток может влиять на развитие аллергической патологии (Akdis et al., 2005). Например, сниженное количество регуляторных Т-клеток было показано у пациентов с бронхиальной астмой и аллергическим ринитом (Ling et al., 2004). С другой стороны, повышение доли CD4+CD25+FOXP3+ Т-регуляторных клеток наблюдали в образцах периферической крови пациентов с атопическим дерматитом, при этом была установлена положительная корреляция между количеством Т-регуляторных клеток, индексом SCORAD (Scoring of atopic dermatitis, Kunz et al., 1997) и содержанием эозинофилов (Ito et al., 2009). Снижение функциональной активности Т-регуляторных клеток может быть компенсировано увеличением их численности (Zhang et al., 2014). Таким образом, действие МСК при аллергии может быть опосредовано индуцированным ими увеличением численности Т-регуляторных клеток.
Сокультивирование с МСК также приводило к повышению концентрации IL-10, что может служить одним из возможных механизмов описанного выше снижения доли Т-лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR. Ранее, на Т-лимфоцитах толстой кишки было показано, что IL-10 снижает экспрессию HLA-DR и CD86 на T-лимфоцитах (Ebert et al., 2005). Кроме того, IL-10 вызывает снижение экспрессии B7 и HLA-DR на профессиональных антиген-презентентирующих клетках (Braunstein et al., 1997). Таким образом, увеличение концентрации IL-10 ингибирует процесс презентации антигена. IL-10 синтезируется рядом клеток иммунной системы – регуляторными Т- и В-лимфоцитами, дендритными клетками, Т-хелперами 17 и 2 типа (Kubo, Motomura, 2012). Поэтому в смешанной культуре сложно идентифицировать вклад какого-либо одного типа клеток в наблюдавшееся увеличение концентрации IL-10. Однако само по себе повышение содержания этого цитокина с плейотропным иммуносупрессивным действием (Moore et al., 2001) является важным следствием сокультивирования с МСК. Степень изменения концентрации IL-10 в смешанной культуре МСК и клеток мононуклеарной фракции зависела от источника получения культуры МСК. Максимальные значения концентрации IL-10 были получены при сокультивировании с МСК пупочного канатика, а минимальные – с МСК костного мозга, что совпадает с уровнем экспрессии CD90. МСК блокировали инициированную инкубацией с аллергенами продукцию IL-4 и IgE. Данные, полученные нами in vitro (Айзенштадт и др., 2015), соответствуют результатам исследований, описывающих иммуномодулирующее действие МСК в животных моделях, где было также показано снижение концентрации/продукции как IL-4, так и IgE в периферической крови или бронхо-альвеолярном лаваже при введении МСК (Nemeth et al., 2010; Kavanagh, 2011; Goodwin et al., 2011; Abreu et al., 2013; Cho et al., 2014).
С другой стороны, ранее было описано увеличение концентрации IL4 in vitro в присутствии МСК при активации Т-лимфоцитов форболмиристат ацетатом (ФMA) (Laranjeira et al., 2015). Кроме того, повышение продукции IL-4 под воздействием МСК было показано на животных моделях Тх1 опосредованных заболеваний, например в модели рассеянного склероза (Bai et al., 2009), острой реакции трансплантат против хозяина (Lim et al., 2014), острого панкреатита (Meng et al., 2013). В нашей работе незначительное увеличение концентрации IL-4 в присутствии МСК было показано in vitro при сокультивировании МСК и клеток мононуклеарной фракции в присутствии ФГА. Таким образом, согласно анализу литературных данных, а также наших результатов, МСК оказывают разнонаправленное действие на продукцию IL-4 в зависимости от стимулирующего агента, предъявляемого иммуннокомпетентным клеткам и соответственно типа иммунного ответа. В случае смещения баланса Тх1/Тх2 в сторону Тх1-опосредованного типа иммунного ответа, МСК приводят к увеличению продукции IL-4, в сторону Тх2 – уменьшению.