Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Инсульт как медико–социальная проблема (обзор литературы) 11
1.1 Современные представления о генетических предикторах развития инсульта 12
1.2 Генетические варианты развития инсульта 16
1.3 Рискометры и шкалы оценки степени выраженности неврологического дефицита при инсульте 18
1.4 Генотерапия в современной медицине 21
1.5 Роль некоторых кандидатных генов в развитии инсульта 23
ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования 30
2.1 Характеристика групп, включенных в исследование 30
2.2 Методы исследования (клинико-инструментальные, молекулярно генетические, статистические) 38
ГЛАВА 3 Клинико-генетические особенности однонуклеотидных полиморфизмов rs1004467 ГЕНА CYP17A1, rs699 ГЕНА AGT, rs1378942 ГЕНА CSK 42
3.1 Полиморфные аллельные варианты rs1004467 гена CYP17A1 у больных с ишемическим инсультом, с гипертонической болезнью без инсульта и лиц контрольной группы 42
3.1.1 Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1004467 гена CYP17A1 у больных с ишемическим инсультом со степенью выраженности неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS 53
3.1.2 Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1004467 гена CYP17A1 у больных с ишемическим инсультом и группы сравнения 57
3.1.3 Ассоциация полиморфизмов rs1004467 гена CYP17A1 с факторами риска инсульта з
3.2 Полиморфные аллельные варианты rs699 гена AGT у больных с ишемическим инсультом, с гипертонической болезнью без инсульта и лиц контрольной группы 64
3.2.1 Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs699 гена AGT у больных с ишемическим инсультом со степенью выраженности неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS 75
3.2.2. Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs699 гена AGT у больных с ишемическим инсультом и группы сравнения 79
3.2.3 Ассоциация полиморфизмов rs699 гена AGT с факторами риска инсульта 82
3.3 Полиморфные аллельные варианты rs1378942 гена CSK у больных с ишемическим инсультом, с гипертонической болезнью без инсульта и лиц контрольной группы 87
3.3.1 Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1378942 гена CSK у больных с ишемическим инсультом со степенью выраженности неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS 97
3.3.2 Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1378942 гена CSK у больных с ишемическим инсультом и группы сравнения 101
3.3.3 Ассоциация полиморфизмов rs1378942 гена CSK с факторами риска инсульта 104 Заключение 109
Выводы 113
Практические рекомендации 115
Список сокращений и условных обозначений 116
Список литературы
- Рискометры и шкалы оценки степени выраженности неврологического дефицита при инсульте
- Методы исследования (клинико-инструментальные, молекулярно генетические, статистические)
- Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1004467 гена CYP17A1 у больных с ишемическим инсультом со степенью выраженности неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS
- Полиморфные аллельные варианты rs1378942 гена CSK у больных с ишемическим инсультом, с гипертонической болезнью без инсульта и лиц контрольной группы
Рискометры и шкалы оценки степени выраженности неврологического дефицита при инсульте
Всякое сосудистое событие увеличивает вероятность развития нового цереброваскулярного нарушения в несколько раз по сравнению с популяцией в целом. Так, наличие первичного инсульта повышает вероятность повторного в 9 раз, а инфаркта миокарда (включая стенокардию и внезапную сердечную смерть) – в 3–4 раза. При заболеваниях периферических артерий в 4 раза возрастает вероятность развития фатальных инфарктов миокарда и в 2–3 раза увеличивается риск инсульта и транзиторных ишемических атак (ТИА) [81; 82; 214].
Одна из моделей суммарного сердечно-сосудистого риска была разработана на сновании самого продолжительного проспективного исследования (Framingham Heart Study, 1941–1984 гг.), проведенного в американском городе Фрамингем. В исследование были включены 5209 (2336 мужчин и 2873 женщин). Результаты работы показали, что наследование по обеим линиям увеличивает риск развития инсульта или ТИА, чем наследование этих же заболеваний по одной из родительских линий. Было установлено, что наряду с инсультом и ТИА, наследуемыми являются и основные факторы риска: ГБ, гипертрофия миокарда, гиперлипидемия, гипергликемия, атеросклероз [178; 212; 217].
Фрамингамская шкала. Эта шкала была предложена для предсказания десятилетнего срока риска смерти от ИБС, нефатального инфаркта миокарда, инсульта. Для расчета риска учитываются 5 факторов: два не модифицируемых (пол, возраст) и три модифицирующих: (курение, уровень систолического АД и общий холестерин). Прогнозируемый риск имеет следующие градации: ( 10 %) и высокий ( 20 %). Значения 10–20 % оценивается как средний, а уровень больше 40% оценивается как очень высокий риск [177; 218; 229].
Русифицированный вариант этой модели был адаптирован для России, однако в практической медицине широкого применения не нашел. «Пятипроцентная шкала» была предложенная российским ученым. Ее автор – российский ученый Широков Е. А. Шкала проста в использовании в практической медицине. Суть шкалы заключена в подсчете годового риска развития инсульта. Учитываются клинические и инструментальные методы диагностики факторов риска развития инсульта. Каждый из признаков оценивается в отдельности и равен 5 % и суммарно. В качестве факторов риска определяют: ГБ, заболевания сердца включая нарушения ритма и внутрисердечной проводимости, стенозы брахиоцефальных артерий, гиперкоагуляцию. В результате подсчета риск инсульта может составлять от 5 % до 40 % в зависимости от количества имеющихся у пациента состояний, которые могут провоцировать риск инсульта.
Шкала ABCD2 – клинический инструмент, помогающий предсказать ранний риск инсульта в течение первых 2,7 и 90 дней после ТИА. Шкала разработана С. К. Джонстоном с соавторами на основе 6 когорт, в целом включавших 4799 пациентов с ТИА, которые были осмотрены в течение 48 часов от начала заболевания [166]. Шкала ABCD2 базируется на 5 параметрах. Оценивается каждый параметр, затем результат суммируется, и итоговая оценка колеблется от 0 до 7баллов. Недавно было обнаружено, что шкала также полезна в прогнозировании риска возвратного инсульта в течение первых часов после ТИА или малого ишемического инсульта [171].
Шкала CHA2DS2-VASc. Первоначально была предложена шкала CHADS2 для расчета риска развития инсульта у пациентов с фибриллфяцией и трепетанием предсердий (ФП, ТП), но в последующем была предложена расширенная шкала CHA2DS2-VASc, более четко отражающая клинический прогноз развития инсульта. Шкала строится на основании суммирования клинических соматических состояний пациента.
При оценке результатов максимальное количество по данной шкале составляет 9 баллов. Вероятность развития тромбоэмболических состояний в течение года оценивается в процентах (95% доверительный интервал (ДИ)) и варьирует от 0 % до 15,2 % в зависимости от совокупности клинических соматических состояний пациента. В 2012 году эта шкала была включена в рекомендации Европейского кардиологического общества [162; 172]. Как видно из описания вышеуказанных шкал, ни одна их них, кроме фрамингамской шкалы, не учитывает генетический фактор риска, хотя его наличие при оценке увеличивало бы процентную вероятность не менее чем на 5 %.
Современные методики оценки указанных рисков объединены под общим название рискометры. Составление таких рискометров, с учетом фенотипических и генотипических факторов риска, в настоящее время является одной из приоритетных задач персонализированной медицины [184; 187].
Однако когда сосудистая катастрофа уже состоялась, клинические признаки инсульта оценивают по симптомам дефицита неврологического статуса.
Шкала NIHSS (National Institutes of Health Stroke Scale). В настоящее время Шкала NIHSS применяется всё чаще для оценки тяжести неврологической симптоматики в остром периоде ишемического инсульта. Эта шкала позволяет определять степень тяжести неврологического дефицита Шкала NIHSS. Подсчет суммы баллов по этой шкале помогает ориентировочно определить прогноз заболевания. Сумма баллов менее 10 по шкале NIHSS, определяет вероятность благоприятного исхода через 1 год от 60 до 70 %, при оценке более 20 баллов вероятность благоприятного исхода составляет лишь 4–16 %. Эта шкала имеет также большое значение в неотложной неврологии, так как используется для планирования проведения тромболитической терапии (ТЛТ). Продолжение подсчета баллов по данной шкале после проведения ТЛП является механизмом и контроля ее эффективности. По разным данным, показанием для проведения ТЛТ является наличие неврологического дефицита более 3–5 баллов, по шкале NIHSS, предполагающего развитие инвалидизации. Тяжелый неврологический дефицит (более 25 баллов по этой шкале) является противопоказанием к проведению тромболитической терапии, поскольку она в этом случае не оказывает существенного влияния на исход заболевания [73].
Методы исследования (клинико-инструментальные, молекулярно генетические, статистические)
С учётом данного распределения первая группа составила 47 (27,6 %) пациентов, вторая группа – 112 (65,8 %) пациентов с ишемическим инсультом и третья группа, с наиболее тяжелыми проявлениями инсульта составила 11 человек (6,5 %).
Характеристика контрольной группы и группы сравнения.
Контрольная группа была сформирована ФГБНУ «НИИТПМ» в ходе международного проекта HAPIEE (Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe). Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом ФГБУ «НИИТПМ» СО РАМН. Всеми участниками исследования было подписано информированное согласие. Программа исследования включала: измерение АД, антропометрию (рост, вес, объём талии, бедер), социально-демографические характеристики, опрос о курении, употребление алкоголя (частота приема и типичная доза), уровень физической активности, оценку липидного профиля (общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеидов высокой плотности), опрос на выявление стенокардии напряжения, согласно опроснику (ROSE), электрокардиография (ЭКГ) – покоя в 12-ти отведениях.
Контрольная группа в данном исследовании представлена в количестве 157 человек без ГБ (106 мужчин и 51 женщины). В этой группе каждые 6 месяцев по данным двух и более исследований в течение нескольких лет с интервалом не менее шести месяцев зафиксировано АД не выше «нормального».
Группа сравнения представлена пациентами в количестве 251 человек с ГБ (160 мужчин и 91 женщины). В этой группе с установленным диагнозом ГБ оценивались: анамнез по ГБ, гипотензивная терапия, оценка наследственной отягощенности по ГБ. Выполнены клинические измерения АД в 2-х сессиях, с промежутком в 1 неделю.
Сравнительная характеристика групп (основной, контрольной и сравнения) по возрасту представлены в таблице 8. Таблица 8 – Сравнительная характеристика групп по возрасту Группа Средний возраст, лет Возраст, лет Квартили р М ± Маx Min 25 % 50 % 75 % Основная 54,73 ± 10,07 70 21 50,0 56,0 62,0 0,255 Контрольная 54,94 ± 6,64 69 45 49,0 54,0 60,0 0,255 Сравнения 59,21 ± 6,62 70 45 54,6 60,0 65,0 0,255 Показатели характеристик основной группы, контрольной группы и группы сравнения по возрасту указывают на возможность использования популяционных выборок при проведении сравнительного статистического анализа. 2.2 Методы исследования (клинико-инструментальные, молекулярно-генетические, статистические) Клинико-инструментальные методы. Диагноз острый инсульт устанавливался на основании совокупности данных, полученных в ходе сбора анамнеза, данных физикального осмотра, исследования соматического и неврологического статуса, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики, согласно национальному стандарту Российской Федерации (протокол ведения больных с инсультом от 01.09.2009 г). Данные представлены в таблице 9.
Биохимический анализ крови с показателями липидного спектра 194 100 Молекулярно-генетические методы исследования. Молекулярно генетическое исследование проводили в ФГБНУ «НИИТПМ». ДНК выделяли из лейкоцитов периферической крови (5–10 мл) по стандартной методике с использованием протеиназы с последующей экстракцией фенол-хлороформом [62; 65; 111]. Следуя методике, к образцу крови (10 мл) добавляли 5–6 объемов буфера А (10 мМ трис-НСl, pH = 7,5; 10 мМ NaCl; 3 мМ MgCl2), растирали сгустки в гомогенизаторе. Полученные после
центрифугирования осадки при 2500 g, промывали дважды буфером А и ресуспензировали в 0,5 мл буфера В (10 мМ ЭДТА; 100 мМ NaCl; 50 мМ трис-НСl, pH = 8,5). После добавления SDS до 0,5 % и протеиназы К до 200 мкг/мл смесь помещалась в инкубатор 8 – 10 часов при 37 градусах. Депротеинацию проводили последовательно водонасыщенным фенолом, смесью фенол-хлороформа (1 : 1) и, наконец, хлороформом. Следующим этапом было добавление изопропилового спирта, далее аккуратно перемешивали до образования клубочка, затем охлаждали в морозильнике (–20С) в течение 1 часа. Осадок, полученный центрифугированием на микроцентрифуге «Eppendorf», в течение 10 минут промывали 70 % этанолом (2 раза), высушивали и растворяли в воде до концентрации ДНК 0,5 мкг/мкл [59; 98].
Полиморфизм генов тестировали с помощью ПЦР в реальном времени в соответствии с протоколом фирмы производителя (зонды TaqMan, Applied Biosystems, США) на приборе AB 7900HT. Для проведения ПЦР в реальном времени использовался прибор АВ 7900HT (Applied Biosystems) и технология TaqMan. Прибор для проведения ПЦР в реальном времени состоит из амплификатора, блока анализа флуоресценции и компьютерного блока со специальным программным обеспечением, с помощью которого можно проанализировать полученный результат. TaqMan ПЦР основана на 5`-экзонуклеазной активности полимеразы. ДНК-зонд, имеющий флуоресцентный краситель на 5`-конце и гаситель флуоресценции на 3`-конце, комплементарен участку амплифицируемой области. Гаситель поглощает испускаемое флуоресцентной меткой излучение, а фосфатная группа в 3`-положении блокирует полимеразу. При отжиге зонд количественно связывается с комплементарным участком ДНК. Во время стадии элонгации полимераза синтезирует комплементарную цепь ДНК и, дойдя до участка, гибридизованного с зондом, начинает расщеплять его за счет 5 -экзонуклеазной активности. В результате флуоресцентная метка отделяется от гасителя, и ее свечение может быть детектировано. Увеличение флуоресценции будет прямо пропорционально количеству наработанного ПЦР-продукта. Количество ПЦР-продукта увеличивается с каждым циклом реакции вдвое. Поэтому зависимость количества продукта ПЦР от количества циклов выражается экспонентой[99;112;114]
В исследовании для анализа были отобраны ОНП трех генов: rs1004467 гена CYP17A1 rs699 гена AGT и rs1378942 гена CSK, ассоциированные с развитием ГБ по данным полногеномных ассоциативных исследований (GWAS).
Методы статистического анализа. Описательная статистика результатов исследования представлена для качественных признаков в виде процентных долей (P) и их стандартных ошибок доли (m): P ± m %. Для количественных – в виде средних арифметических (М) и стандартных отклонений ().
Проверка нормальности распределения значений переменных в группах наблюдения проводилась с использованием критерия Колмогорова – Смирнова.
Значимость различий качественных признаков в группах наблюдения оценивали при помощи непараметрического критерия 2 Пирсона и точного критерия Фишера. Для оценки значимости статистических различий между исследуемыми группами по количественным признакам проводили сравнение групп по непараметрическому ранговому критерию Манна – Уитни. Различия во всех случаях оценивали, как статистически значимые при р 0,05 [75].
Для оценки риска развития инсульта по конкретному аллелю или генотипу производили оценку отношения шансов (ОШ) и рисков в таблицах сопряженности 2 х 2 с расчетом доверительных интервалов (ДИ) по стандартной методике с помощью четырехпольной таблицы (Таблица 10), [79; 100].
Ассоциация полиморфных аллельных вариантов rs1004467 гена CYP17A1 у больных с ишемическим инсультом со степенью выраженности неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS
С целью изучения роли полиморфного аллельного варианта rs699 гена AGT в развитии инсультов проведено молекулярно-генетическое исследование образцов ДНК 183 больных с различными типами инсульта, 251 человек группы сравнения (больные с ГБ, не осложненной инсультом) и 157 человек контрольной группы (популяционная выборка относительно здоровых людей, жителей г. Новосибирска). Следует подчеркнуть, что ген ангиотензиногена (AGT) является участником цепи ренин-ангиотен-альдостероновой системы, регулирующей уровень АД.
Подразделение по типам инсульта было представлено следующим образом: 129 человек с ишемическим атеротромботическим инсультом (70,5 %), ишемическим лакунарным инсультом – 40 человек (21,9 %).
Результаты анализа частоты распределения генотипов и аллелей полиморфизма rs699 гена AGT среди больных с инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 30. Таблица 30 – Частота распределения генотипов и аллелей полиморфизма rs699 гена AGT среди больных с ишемическим инсультом и лиц контрольной группы Генотипы Инсульт (n = 183) Контрольная группа (n = 157) p п % ±т п % ±т ТТ 41 22,4 ± 3,1 50 31,8 ± 3,7 0,066 ТС 93 50,8 ± 3,7 78 49,7 ± 4,0 0,920 СС 49 26,8 ± 3,3 29 18,5 ± 3,1 0,092 Аллели: Аллель Т 175 47,8 ± 2,6 178 56,7 ± 2,8 0,026 Аллель С 191 52,2 ± 2,6 136 43,3 ± 2,8 0,026 ОШ; 95 % ДИ ОШ 1,429; 1,055-1,934 Генотип ТТ 41 22,4 ± 3,1 50 31,8 ± 3,7 0,050 Генотипы ТС+СС 142 77,6 ± 3,1 107 68,2 ± 3,7 0,050 ОШ; 95 % ДИ ОШ 1,618; 0,998-2,624 Примечание: р – уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой. Частота гомозиготного генотипа ТТ по распространенному аллелю у больных с инсультом составила 22,4 ± 3,1 %, гетерозиготного генотипа ТС – 58,8 ± 3,7 %, гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю – 26,8 ± 3,3 %. В контрольной группе 31,8 ± 3,7 % являлись носителями гомозиготного генотипа ТТ по распространенному аллелю, 49,7 ± 4,0 % – носителями гетерозиготного генотипа ТС, 18,5 ± 3,1 % и носителями гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена AGT. Установлена тенденция к уменьшению количества носителей гомозиготного генотипа ТТ по распространенному аллелю среди больных с инсультом (22,4 ± 3,1 %) по сравнению с контрольной группой (31,8 ± 3,7 %), Однако различие статистически не значимо (р = 0,066).
По редкому аллелю С выявлены статистически значимые различия. В группе больных с ишемическим инсультом количество носителей аллеля С выше (52,2 ± 2,6 %), чем в контрольной группе (43,3 ± 2,8 %), р = 0,026. Таким образом, аллель С гена AGT можно рассматривать как генетический фактор риска ишемического инсульта.
В таблице 31 представлено распределение генотипов гена AGT среди женщин с ишемическим инсультом и женщин контрольной группы
Частота распределения генотипов и аллелей полиморфизма rs699 гена AGT среди женщин с ишемическим инсультом и женщин контрольной группы Генотипы Женщины с инсультом (n = 72) Контрольная группа (n = 51) р п % ±т п % ±т ТТ 18 25,0 ± 5,1 15 29,4 ± 6,4 0,785 ТС 37 51,4 ± 5,9 23 45,1 ± 7,0 0,694 СС 17 23,6 ± 5,0 13 25,5 ± 6,1 0,973 Аллели: Аллель Т 73 50,7 ± 2,6 53 52,0 ± 4,9 0,950 Аллель С 71 49,3 ± 2,6 49 48,0 ± 4,9 0,950 ОШ; 95 % ДИ ОШ 0,952; 0,575-1,577 Генотип ТТ 18 25,0 ± 5,1 15 29,4 ± 6,4 0,785 Генотипы ТС+СС 54 75,0 ± 5,1 36 70,6 ± 6,4 0,785 ОШ; 95 % ДИ ОШ 0,822;0, 368-1,835 Примечание: р – уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой.
При анализе полученных данных выявлено, что частота носителей гетерозиготного генотипа ТС гена AGT среди женщин с инсультом (51,4 ± 6,9 %) была выше, чем в контрольной группе (45,1 ± 7,0 %), но результаты статистически незначимы (р = 0,694). У женщин с ишемическим инсультом, по сравнению с женщинами контрольной группы, статистически значимых различий выявлено не было. По результатам исследования установлено статистически значимое преобладание гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю в группе мужчин с инсультом (28,8 ± 4,3 %), по сравнению с контрольной группой (15,1 ± 3,5 %), р = 0,025. Установлено статистически значимое уменьшение частоты гомозиготного генотипа ТТ по распространенному аллелю в группе больных мужчин с инсультами (20,7 ± 3,8 %), в сравнении с мужчинами контрольной группы (34,0 ± 4,6 %), эмп = 2,209 (Таблица 32, Рисунок 4).
Носительство аллеля риска С в группе больных с ишемическим инсультом составило 54,1 ± 2,6%, что статистически значимо выше, чем в контрольной группе – 40,6 ± 3,4 %, р = 0,006. Следовательно, носительство гомозиготного генотипа СС и аллеля риска С у мужчин является генетическим фактором риска ишемического инсульта. В таблице 33 представлено распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs699 гена AGT среди больных с ишемическим атеротромботическим инсультом и контрольной группой. При выделении в отдельную группу больных с атеротромботическим подтипом ишемического инсульта (n = 129), установлена тенденция преобладания носителей гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю в группе больных (26,4 ± 5,2 %) в сравнении с контрольной группой (18,5 ± 3,1 %), однако, результаты не являются статистически значимыми
Полиморфные аллельные варианты rs1378942 гена CSK у больных с ишемическим инсультом, с гипертонической болезнью без инсульта и лиц контрольной группы
Инсульт – это конечный результат многих сложных процессов взаимодействия метаболических путей, ни один из которых в отдельности может привести к исходу. Исследования полногеномных ассоциаций позволяют оценить особенности вариаций внутри генома и охарактеризовать инсульт и связанные с ним фенотипы Исследования ассоциаций на уровне генома (Genome wide association studies) позволяют выявить генетические вариации, связанные с мульфакториальными заболеваниями. Так создана открытая база данных HapMap содержащая информацию о частотах распределения множества полиморфизмов. По данным современных источников российской и зарубежной литературы, результаты исследований, проводимые, в поисках генетических предикторов развития инсультов неоднозначны, а порой и противоречивы. Однако, факт непосредственного вклада генетической составляющей в развитие и течение инсульта как мультифакториального заболевания находит свое подтверждение.
Включенные в исследование полиморфизмы rs1004467 гена CYP17A1, rs699 гена AGT, rs1378942 гена CSK были изучены на различных популяциях как отдельно друг от друга, так и во взаимодействии друг с другом с точки зрения влияния на развитии различных патологических состояний, в том числе и на возникновение инсульта, как было отмечено ранее.
В ходе нашего исследования установлена ассоциация гомозиготного генотипа АА rs1004467 гена CYP17A1 с риском развития ишемического инсульта. Носителями этого генотипа в основной группе являлись (73,4 ± 3,3 %) по сравнению с контролем (61,8 ± 3,9 %). Исследования этого полиморфизма определили его ассоциацию с риском развития ГБ на популяциях Японии (ОШ 2,743), но полиморфизм не был исследован в отношении возникновения инсульта. В нашей работе проведено исследование гендерных различий выбранного полиморфизма и получены статистически значимые различия в отношении его влияния на развитие одного из подтипов ишемического атеротромботического инсульта у представительниц женского пола. Так у женщин основной группы гомозиготный вариант генотипа АА встречался у (71,2 ± 5,4%), а у женщин контрольной группы (35,3 ± 6,7 %), (ОШ 2,559). В то время работы Xi. B. et al. не показали связи rs1004467 гена CYP17A1 с ГБ [137].
Однако, в другом исследовании китайских ученых Liu C. et al. показана взаимосвязь этого полиморфизма с повышенным систолическим давлением у представителей обоих полов (ОШ 1,22).
Кроме того, учитывая тот факт, что важную роль в развитии ишемической болезни мозга играют процессы изменения гемодинамики, интерес представляют и гены, кодирующие белки, участвующие в регуляции процессов солевого и жидкостного гомеостаза и поддержании сосудистого тонуса. Анализ литературных данных позволяет рассматривать ангиотензиноген (AGT) одним из ключевых элементов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы.
Поскольку поиск генетических маркеров инсульта в целом основан на проявлении факторов риска, основным из которых общепризнано считается ГБ, то основные результаты исследования этого полиморфизма rs699 гена AGT, связаны с изучением его влияния на это заболевание.
Достоверно известно, что носительство гомозиготного генотипа СС а также носительство аллеля риска С ассоциировано с развитием ГБ. Исследования, проведенные на популяции Cеверного Китая, не выявили достоверной ассоциации rs699 гена AGT и ГБ.
В работе Park H. K., Kim M. C. при исследовании rs699 и rs4762 гена AGT на 197 пациентах с ишемическим инсультом и внутримозговым кровоизлиянием, оцененным по шкалам NIHSS и шкале Бартел, сделали вывод о том, что rs699 гена AGT не был связан с развитием инсульта и не влиял на тяжесть течения инсульта. Тогда как rs4762 гена AGT был определен как фактор генетического риска инсульта и был ассоциирован со степенью неврологического дефицита (р = 0,014).
Проведенный нами анализ распределения частот полиморфизмов и аллелей rs699 гена AGT позволил установить, что гомозиготный генотип ТТ и аллель Т являются протективным защитным фактором в развитии острого неврологического дефицита средней степени тяжести сосудистого происхождения; носительство аллеля С можно рассматривать как фактор генетического риска развития инсульта с неврологическим дефицитом средней степени тяжести; при легкой и тяжелой степенях неврологического дефицита ассоциаций генотипов и аллелей полиморфизма rs699 гена AGT не выявлено.
Частота распространенности редкого генотипа не отличалась от общепопуляционных цифр. Но на выборке нашего исследования, полученные статистически значимые результаты, указывают, что генотип СС rs699 гена AGT является генетическим предиктором развития ишемического инсульта у мужчин. Так носительство редкого генотипа СС rs699 гена AGT у мужчин основной группы определено чаще (28,8 ± 4,3 %), по сравнению с мужчинами контрольной группы (15,1 ± 5,1 %), (ОШ 1,695).
Гетерозиготный генотип ТС rs699 гена AGT ассоциирован со средней степенью тяжести неврологического дефицита, оцененного по шкале NIHSS (20,2 ± 3,8 %) в группе больных с инсультом и (31,8 ± 5,13 %) (ОШ 1,572). В нашем исследовании установлено, что редкий аллель С rs699 гена AGT ассоциирован с риском развития ишемического инсульта. Частота его встречаемости в основной группе составила 52,2 ± 2,6 %, по сравнению с группой контроля – 43,3 ± 2,8 %, (ОШ 1,429).