Введение к работе
Актуальность проблемы. Пространственная организация белок-
синтезирующего аппарата является одним из механизмов
посттранскрипционной регуляции синтеза белка, определяющим компартментацию трансляции индивидуальных матриц, лежащую в основе клеточной полярности, и, вероятно, общую эффективность трансляции.
Одним из возможных способов такой регуляции является связь компонентов белоксинтезирующей машины с актиновым и тубулиновым цитоскелетом (Nielsen с соавт., 1983; Hesketh, Pryme, 1991; Клячко, 1998).
Прикрепление полисом к актиновому цитоскелету было обнаружено более 20 лет тому назад для культивируемых клеток животных (Lenk с соавт., 1977). Связь между растительными полисомами и цитоскелетом была показана заметно позже в лаборатории проф. Э. Дэвиса в США (Davies с соавт., 1991) и в группе белоксинтезирующих систем растений ИФР (Zak с соавт., 1995). В работах Клячко с соавт. была выделена фракция цитоскелет-связанных полисом (ЦСП) из листьев бобов и проростков пшеницы, исследован ряд характерных для нее нерибосомных белков, показано присутствие в этой фракции полимерного актина, а также обнаружена ее повышенная функциональная активность в бесклеточной системе трансляции. Однако аспект возможных количественных изменений доли ЦСП в тканях в зависимости от действия физиологических факторов не был изучен. Вместе с тем, именно ответы на вопросы, является ли эта доля вариабельной и коррелирует ли она с физиологическим состоянием ткани, являются актуальными для понимания роли взаимодействия полисом с цитоскелетом как механизма посттранскрипционной регуляции белкового синтеза.
#вийМво1ЇІльн—"1
Цель и основные задачи работы. В связи с вышесказанным основной целью данного исследования явилось проследить возможную корреляцию между интенсивностью белкового синтеза в тканях растений и степенью связывания полисом с актиновым цитоскелетом, а также попытаться найти возможные белковые посредники в этом взаимоді
3 *
В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:
Выбрать метод фракционирования субпопуляций растительных полисом, по возможности предотвращающий разрушение полисом и цитоскелета. Подобрать буфер для выделения ЦСП, градиент концентраций сахарозы, время центрифугирования, а также подходящий растительный материал для работы.
В системе изолированных семядолей тыквы чувствительных к действию цитокининов и АБК, для которой хорошо изучено влияние ЭТИХ і фитогормонов на трансляцию (Кулаева, 1982), провести количественную оценку доли ЦСП.
Исследовать влияние других факторов (возраст проростков, освещение) на долю ЦСП в семядолях тыквы. '
Исследовать влияние низких концентраций циклогексимида, вызывающих сборку полисом вследствие подавления элонгации белкового синтеза, на долю ЦСП с целью выяснить, коррелирует ли эта доля с интенсивностью трансляции или с процессом сборки полисом.
5) Провести сравнительный анализ полипептидного состава различных
субпопуляций полисом с целью поиска белков - возможных посредников во
взаимодействии полисом и цитоскелета.
6) С использованием моноклональных анти-актиновых антител
исследовать влияние света и цитокинина на содержание актина в исследуемых
тканях.
Научная новизна работы. Проведенная работа показала, что доля полисом, связанных с цитоскелетом, варьирует в зависимости от действие факторов, влияющих на интенсивность белкового синтеза в тканях: она уменьшается в ситуациях, подавляющих белковый синтез (старение, действие циклогексимида) и, наоборот, увеличивается под влиянием факторов, стимулирующих синтез белка и сборку полисом (цитокинины, освещение). Аналогичных данных нет в научной литературе.
Практическая значимость работы. Полученные в работе данные вносят заметный вклад в наши представления о пространственной организации белоксинтезирующего аппарата растений. Выяснение закономерностей варьирования доли ЦСП, коррелирующей с интенсивностью белкового синтеза в клетках растений, существенно для понимания механизмов посттранскрипционной регуляции трансляции. Примененный в работе метод анализа состава популяции полисом оказался перспективным для быстрой диагностики состояния белоксинтезирующей системы. Полученные в работе данные открывают перспективы дальнейшего изучения роли цитоскелета в регуляции активности трансляции в растительных тканях.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на 4-м Съезде ВОФР (Москва, 1999), на VII молодежной конференции ботаников (Санкт-Петербург, 2000), на школе "Горизонты физико-химической биологии" (Пущино, 2000), на международной конференции "Signalling systems of plants" (Москва, 2001), на ежегодном Съезде физиологов растений (Уфа, 2001), на международной конференции "Phytohormones in plant biotechnology and agriculture" (Москва, 2002), на международной конференции "The plant cytoskeleton: functional diversity and biotechnological implications" (Киев, 2002).
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 2 статьях и 7 тезисах конференций.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на страницах