Введение к работе
- З -
Актуальность проблеыы. Роль и значение природных антител (ПАт) в формировании иммунологического статуса организма и развитии аутоиммунных патологий остаются невыясненными. Известно, что антитела (Ат), реагирующие с нативной ДНК (нДНК), являются важнейшим диагностическим показателем типичного аутоиммунного заболевания - системной красной волчанки. Наиболее характерным для этого процесса считается наличие в сыворотке крови (СК) высокоавидных Ат к нДНК, которые являются причиной нефрита, тяжелейшего осложнения при волчанке. Многочисленные исследования этих Ат на протяжении более чем 30 лет показали, что экспериментально их индуцировать не удается (stollar, 1988; Tomer et ai., 1988). Вместе с тем, имеются данные, свидетельствующие о том, что у здоровых людей имеются В-клетки, способные производить такие AT (Mach et al., 1984, Diamond et al., 1992). He удается обнаружить указанные Ат и в СК трансгенных мышей с имплантированным в В-клетки геном, кодирующим Ат, реагирующие с нДНК (Erikson et al., 1993). Кроме того, поликло-нальная стимуляция спленоцигов нормальных мышей in vitro вызывает синтез аутоантител (ААт), взаимодействующих с ДНК, в количествах почти на порядок больших, чем при стимуляции животных in vivo (Dziarski, 1982).
Эти данные дают основания предположить, что в организме имеется система регуляции активности ААт, реагирующих с нДНК. Изучение этой системы и исследование механизма, лежащего в основе ее функционирования, представляет большой научный интерес и актуально для практики, поскольку может расширить представления о патогенезе ряда аутоиммунных заболеваний а также о механизме регуляции гуморального иммунитета, осуществляющегося, как считается, через систему антиидиотипических at (Jerne, 1974; Halpern et al., 1984; Сажина Е.Г. И др., І9ЄІ8).
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было установить существуют ли среди нормальных иммуноглобулинов (ig) организма природные ААт (ПААт), реагирующие ,-с-"ЯДНК с высокой авидностью, выяснение причин, по которым эти Ат невозможно обнаружить в сыворотке крови здоровых людей и. исследование механизмов, лежащих в основе перехода таких Ат в скрытое
состояние.
В задачи исследования входили:
разработка метода выделения белков, реагирующих с нДНК с высокой авидностыо и их характеристика;
определение спектра перекрестных реакций;
изучение механизма связывания с нДНК;
влияние СК здоровых людей на связывание белок-нДНК.
Научная новизна. Проведенная работа выявила существование в СК сложной системы, регулирующей высокоавидное взаимодействие ig с нДНК, не связанной с антиидиотипическими Ат. Впервые показано, что в крови нормальных людей и животных имеются природные Ат, способные связываться с нДНК с высокой авидностыо, причем это взаимодействие возможно только в присутствии компонента неиммуноглооулиновой природы с молекулярной массой меньшей, чем у 7s ig, способного к самостоятельному связыванию как с нДИК, так и некоторыми сывороточными ig. Полученные результаты дают, основания полагать, что компонент, опосредующий взаимодействие ig с нДНК находится в СК здоровых людей в связанном (скрытом) состоянии, что делает в норме невозможным его взаимодействие с нДНК и/или с ig и, таким образом, может представлять собой способ регуляции активности Ат, альтернативный регуляции с помощью антиидиотипических Ат.
Практическая и теоретическая значимость работы. Приводимые данные имеют важное значение для понимании механизма регуляцію активности природных ААт, реагирующих с нДНК с высокой авидностыо, и расширяют представления о способах регуляции гуморального иммунитета, так как показывают возможность опосредованного через промежуточный компонент взаимодействия ig с лигандами и ставят вопрос о роли такой регуляции в патогенезе аутоиммунных заболеваний.
Ряд методов, разработанных в ходе выполнения работы, внедрены и применяются в лабораториях клинической биохимии и клинической иммунологии Медицинского Радиологического Научного Центра РАМН.
Основные положения, выносимые на защиту.
І. В препаратах нормальных иммуноглобулинов существуют компоненты, способные связываться с нДНК с бысокой авидностью.
~. Для образования высокопрочных комплексов белок-нДНК
имеет значение не только заряд молекулы, но и структурные особенности ДНК.
-
Для образования комплексов некоторых Ig различного происхождения (бычьих или человеческих) с нДНК необходимо присутствие дополнительного промежуточного компонента - посредника неиммуноглобулиновой природы.
-
Промежуточный компонент, необходимый для связывания Ig с ДИК имеет молекулярную массу меньше, чем у 7S Ig, и является негомогенным (состоит как минимум из ДЕух фракций).
-
Реакция связывания промежуточного компонента с нДНК ингибируется высокомолекулярными соединениями, присутствующий в СК здоровых людей.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на научной конференции отдела радиационной биохимии МРЩ РАМН (1992 г.), Международном симпозиуме по антифосфолипидному синдрому (Москеэ, 1993 г.), научной конференции Экспериментального сектора мТНЦ РАМН (1993 г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 2 в международных изданиях.
Структура и обЪеи диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (5 подразделов), изложения материалов и методов исследования, главы "Результатов и их обсуждение" (5 подразделов), заключения, выводов и списка литературы, включающего 159 источников, в том числе 10 отечественных и 149 иностранных. Работа изложена на 123 страницах машинописного текста, включает 23 рисунка и 2 таблицы.