Введение к работе
Актуальность темы,
Печень является основным органом, поддерживающим постоянный уровень холестерина в плазме крови (Gruudy, 1986). Это достигается за счет ряда взаимосвязанных процессов: а) синтеза холестерина; б) синтеза и секреции липопротеидов, транспортирующих холестерин; в) захвата и катаболизма обогащенных холестерином липопротеидов, а именно, (5-ЛОНП, ЛНП и ЛВП ; г) окисления холестерина до желчных кислот и удаления его в составе желчи.
Наследственные и индуцированные несбалансированным питанием нарушения з одном или сразу в нескольких указанных метаболических процессах могут приводить к развитию дислипопротеидемий (Grundy, 1984; Grundy, 1985; Genest et al., 1985). В связи с этим современная фармакотерапия основана на использовании препаратов, эказывающих либо комплексное воздействие на обший баланс холестерина в гепатоците, либо избирательно воздействующих на тот яли иной процесс (Thompson, 1989).
К препаратам с комплексным эффектом относится, в частности, інтиоксидант пробукол. Пробукол увеличивает скорость захвата ЛНП, інгибирует синтез холестерина, а также, как предполагают, :тимулирует процессы, обеспечивающие захват холестерина в составе 1ВПг и ЛОНП (DISP, 1989). К другим важным свойствам пробукола ітноснтся его способность ингибировать окислительную модификацию ІНП, вследствие чего снижается захват модифицированных ЛНП іакрофагами сосудистой стенки и тормозится процесс формирования .теросклеротического поражения (Care» et а!., 1987; Steinberg, 988). Однако то, что пробукол является относительно слабым
гиполипидемическим препаратом и имеет умеренную антиоксидантнук активность делает актуальны?,! поиск новых более активных егс аналогов.
Ко второй группе лекарств с избирательным механизмом действия относятся конкурентные ингибиторы биосинтеза холестерина, такие как мевинолин, симвастатин, правастатин (Goldstein, 1988; Endo, 1992). Миопатии - основной побочный эффект указанных препаратов (Tobert, 1988). Среди новых разрабатываемых препаратов наиболее перспективными представляются производные холестерина, близкие по структуре внутриклеточным регуляторам активности ГМГ-Ко А редуктазы (Smith, 1989). Б отличие от конкурентных ингибиторов этого фермента производные холестерина супрессируют процесс транскрипции гена ГМГ-Ко А редуктазы и целого ряда белков, вовлеченных в биосинтез изопреноидов її метаболизм холестерина в печени. Другим механизмом их действия может быть активация процесса деградации специфической мРНК ГМГ-Ко А редуктазы (Kandutsch, 1984; Saith, 1989). Моаными ингибиторами холестерина среди этих соединений оказались производные 5Н-а-холестана с полярными заместителями в -вложении 15. Не исключено, что синтетический стерол 5Н-а-холест-8(14)-ен-3--ол-15-он (15-кетостерол), является природным регулятором биосинтеза холестерина, поскольку обнаружен в тканях животных (Emmons, 1988). Исследования на культивируемых клетках печени и на животных показали, что 15-кетосзрол эффективно -ингибирует ГМГ-Ко А редуктазу и обладает выряженной гиполипидемической активностью. Однако полная чнформация"о влиянии этого вещества на метаболизм холестерина в печени все еще отсутствует и требуются дальнейшие
ісследования in vitro и in vivo с целью его применения в качестве гиполипидемического препарата. Большие перспективы также связывают : его аналогами и производными холестерина с заместителями по 3-му голожению (Fung et al., 1980).
В настоящее время первичная культура гепатоцитов кролика >ассматривается в хачестпе удобной модели для изучения механизмов іействия гиполипидемических препаратов.
Цель исследования: Цель настоящей работы состояла в изучении
>егуляции метаболизма холестерина в гепатоцитах некоторыми
гинтетическими приззодными холестерина и антиоксидантами фенольной
іриродьі.
о В задачи исследования входило:
I) выяснить влияние 15-кетостерола и его нового синтетического
іроизводного 3(3(2-гиярсксиэтскси)-5о:-холест-8( 14 )-еи-15-он, а
также производных холестерина,молекула которых содержит функцио-
«альныэ заместители при 3 атоме, на следующие параметры метаболиз-
«а холестерина в культивируемых гепатоцитах: а)синтез холестерина;
>)секреция апо В-содержаших липопротеидов; в)синтез желчных
:и слот;
І) изучить влияние пробукола и других антиоксидантов фенольной
іриродьі на некоторые параметры метаболизма холестерина и
іипопротеидов в первичной культуре гепатоцитов. 3 экспериментах на
аппах оценить гипохолестеринемическую активность отобранных в ходе
:крининга in vitro фенолзамещенных антиоксидантов (ФЗА).
Научная новизна работа..
З результате проведеного in vitro тестирования трех новых
производных холестерина с заместителями по 3-му положению выявлено соединение наиболее а-тивно ингибирующее синтез холестерина и снижающее секрецию апо В-содержащих липопротеидов 3/3-(2-аминоэтокси)холест-5-ен. Обнаружено, что среди фенолзамещен-ных антиоксидантов аналог пробукола /3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил/-/3',5*-ди-трет-бутил-4'-гидроксибензил/-сульфид (5) эффективно и избирательно ингибирует секрецию апо В-содержаиих липопротеидов и обладает гипохолестеринемической активностью.
Впервые охарактеризованы эффекты 15-кетостерола на метаболизм холестерина в культивируемых гепатоцитах контрольных и гиперхоле-стеринемических кроликов. 15-кетостерол: а) снижает секрецию апо В-содержащих липопротеидов, по-видимому, опосредованно, ингибируя синтез холестерина и снижая его внутриклеточное содержание; б) не оказывает влияния на продукцию желчных кислот. Производные холестерина с заместителями по 3-му положению ингибируют биосинтез холестерина и секрецию апо В-содержаших липопротеидов гепатоцита-ми. Установлено, что пробукол в терапевтической концентрации оказывает комплексное влияние на метаболизм холестерина и липопротеидов в гепатоцитах ингибирует синтез холестерина, стимулирует специфическое связывание 1251-ЛНП и синтез желчных кислот.
Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные демонстрируют, что первичная культура гепатоцитов кролика является удобной клеточной моделью для проведения первичного скрининга in vitro новых соединений, позволяющей оценить влияние веществ на основные параметры метаболизма холестерина, включая продукцию желчных кислот. Результаты работы обосновывают целесообразность
проведения поиска более активных соединений среди аналогов 15-кетостерола и других производных холестерина, а также антио'ссидантоа фенольной природы с целью создания эффективных гиполипидемических препаратов. Аналог пробукола, избирательно подавляющий секрецию ало В-содержаших липопротеидов, может оказаться перспективным при создании гиполипидемического препарата для лечения некоторых форм дислипопротеидемий.
Апробация работы. Научные результаты, представленные в диссертации, были доложены на 7-ом Международном симпозиуме по липопротеинам и атеросклерозу (Дрезден, Германия, 1991), на 59-ом конгрессе Европейского Общества по изучению атеросклероза (Лиссабон, Португалия, 1992), на XV симпозиуме Международного общества кардиологов (Миссури, США, 1993), на 62-ом Конгрессе Европейского Общества по изучению атеросклероза, (Иерусалим, Израиль, 1993). Диссертация апробирована на меклабораторном семинаре в кардиологическом научном центре РАМН.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из разделов: "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты", "Обсуждение результатов", "Заключение", "Выводы" и "Список литературы". Объем работы страниц машинописного текста, она содержит 16 рисунков и 9 таблиц. Список литературы включает наименований.