Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Успехи современной иммунобиотехнологии стимулируют интерес к пассивной серопрофилактике и серотерапии инфекционных болезней. В то же время антивирусные антитела практически не используются для лечения инфекционных заболеваний, подавления репродукции вируса Исключая несколько случаев успешного применения антител для подавления вирусних инфекций,,, описанных - в. литературе, во многих случаях терапевтическая эффективность препаратов антивирусных антител являетея низкой.
Ключевые стадии репродукции вируса происходят внутри клетки, в то время, как антивирусные антитела не способны проникать внутрь клетки. Нативные иммуноглобулины, будучи неспособными преодолевать мембранный барьер и проникать в цитоплазму клетки, не в состоянии блокировать репродукцию вируса
В качестве одного из альтернативных подходов для решения этой проблемы Недавно был предложен метод искусственной гидрофобизации белков путем ацилирования остатками жирных кислот в системе обращенных мицелл. Такая модификация ведет к усилению мембранной активности белка и, в частности, обеспечивает его транслокацию через модельные биелойные мембраны. В экспериментах на клетках было показано (Слепнев, 1992), что модификация остатками жирных кислот приводит к существенному усилению связывания белков (в том числе иммуноглобулинов) с клеточной мембраной, а также их эффективному зндоцитозному захвату внутрь клеток.
На примере вирусов гриппа, респираторно-синциткального вируса и вируса герпеса было показано, что такая искусственная гидрофобизация придает антивирусным антителам способность подавлять репродукцию вирусов в инфицированных клетках. В экспериментах in vivo показано также, что модификация остатками жирных кислот существенно усиливает терапевтический эффект моноклональных антител к гликопротеину D вируса простого герпеса при лечении герпетического менингоэнцефалита и генерализованной инфекции. Механизмы этих эффектов подавления многом не ясны.
ОСНОВНОЙ ЦЕЛЬЮ РАБОТЫ является изучение влияния модификации
иммуноглобулинов остатками жирных кислот на их биологические
свойства, а также исследование механизмов усиления антивирусной
активности гидрофобизованных антител. , .
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. . В ходе работы был получен препарат иммуноглобулинов, модифицированных остатками стеариновой кислоты в системе обращенных мицелл и сохраняющих способность связывать антиген. Показано, что гидрофобизация антител приводит к усилению их способности встраиваться; в модельные липидные мембраны и мембраны клеток. Получены результаты, подтверждающие усиление антивирусного действия гидрофобизованньи антител к поверхностным антигенам вируса гриппа (гемагглюггинину); Впервые получены данные по усилению антивирусной активности антител к. внутренним белкам вируса гриппа (Ш- и NP-белкам). Полученные результаты позволяют преложить механизмы усиления антивирусного действия гидрофобизованных антител как к внутренним , так и к поверхностным белкам вируса гриппа
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЕ Усиление биологической:
активности иммуноглобулинов . с помощью искусственной
гидрофобизации может служить одним из средств для решения
проблемы подавления вирусной инфекции как на стадии заражения
клеток, так и в уже зараженных клетках. Гидрофобизованные
иммуноглобулины могут явиться также инструментом в изучении
процессов, связанных с мембранами, и, в частности, механизмов
репродукции вирусов. ". : . ; /
апробация РАБОТЫ. Основные результаты были доложены и обсуждены на 2-ой международной конференции ЮНЕСКО "Иммунология, вирусология и общество", Киев (1991), международной конференции . "Иммунотерапия" инфекционных заболеваний", Берлин (1991), < международном симпозиуме "Последние достижения в , области доставки лекарств", Солт Лейк Сити (1993).' : '
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертационная работа состоит из веєдєния, обзора литературы, методов, . результатов, их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на ; страчицах машинописного текста и включает 8 . таблиц и 15 рисунков.