Введение к работе
Актуальность проблеми: Биосинтез НАД представляет собой Еажную научно-техническую проблему. Это обусловлено .тем, что указанное соединение имеет большие перспективы применения в биологических, биотехнологическкх и медицинских исследованиях, а также служит исходным соединением для получения НАДН и НАДО. Для промышленного производства НАД в основном используют микробиологический метод. Известно, что в клетках наряду с de novo синтезом НАД,
ипп^лтитй" TJotTTrticiQ'pnq г» агтгтотіортжтіпгїг\-№ тлят» -nnnrti гятпя ФлтптФпг^оип
существует сэлвидзн путь, основанный на способности клеток утилизировать экзогенные предшественники для синтеза пиридиновых нуклеотидов. Именно эта способность клеток лежит в основе микробиологического получения коферментов, нуклеотидов и их производных штаммами-продуцентами, чем и объясняется интерес к данному процессу.
Одним из наиболее эффективных продуцентов НАД является микроорганизм Brevlbacterlum anmoniagenea АТСО 6872, который осуществляет сверхсинтез НАД из экзогенных зденинэ и никотината (или никотинамида) по сэлеидж пути.
Однако, биотехнологический успех определяется не только
о. TTTjrxmqM nnnrvTyarpnrpmrvynrrxY тфсічиіілптї—ттпттттсітіпіп'о т» T*v
Ui/ІЛі iJUU lit UUUiUU luiuj ШЦіІЛ Ш1 U1IUTIUU hljis^\j *-4u 1 A ML жіиі.
биосинтетической активностью, но и знанием биохимических механизмов и систем их регуляции, которые определяют образование и накопление целевых продуктов. Зачастую же информация _о процессах, происходящих при микробиологическом синтезе, не всегда отвечает тому уровню, который необходим для осуществления хорошо контролируемого промышленного процесса. В связи с этим, проблема изучения регуляции активности ферментов, участвующих в сэлвидж пути синтеза НАД, становится особенно актуальной.
-3- .
Важная роль в сэлвидж синтеза НАД отводится никотинат-фосфорибозилтрансферазе (НФРГазе), ферменту, наиболее чувствительному к регуляторним воздействиям. Катализируемая им реакция образования мононуклеотида никотиновой кислоты из никотинэта и ФРПФ является первой стадией в сэлвидж пути синтеза НАД и, как считают многие авторы, лимитирует скорость всего процесса. Поэтому изучение регуляции данного фермента является составной частью решения проблемы микробиологического способа получения НАД.
Цель и задачи исследования: Целью данной работы было изучение регуляции первого фермента пиридиновой ветви СЭЛЕИДЖ синтеза НАД - никотинат-фосфорибозилтрансферазы и определение ее значения в этом биосинтетическом пути. В связи с этим были поставлены следующие задачи:
-выделить и очистить НФІТазу из В. ammonlagenea АТСС 6872;
-изучить свойства фермента и получить его кинетические
характеристики;
-исследовать ретроинтибирующее действие продуктов реакции;
-изучить влияние конечных продуктов и промежуточных метаболитов синтеза НАД на активность фермента.
Научная ноЕизна: ВперЕые была очищена никотинат-фосфорнОозилтрансфэраза из В. ашпопісщвпєз АТСС 6872, известного продуцента нуклеотидов широкого ряда. Изучены сеойствэ и регуляция этого фермента и показано, что он является объектом ретроингибируицего действия конечного продукта и промежуточных метаболитов сэлвидж синтеза НАД.
Практическое значение работы: Полученные результаты не только вносят вклад в теорию сверхсинтеза, но к могут повлечь за собой разработку практических рекомендаций и новых подходов для
промышленной биотехнологии НАД и его производных.
Апробация работы: Основные результаты работы были доложены на научно-практической конференции "Экологические проблемы микробиологии и биотехнологии в Байкальском регионе" (Улан-Удэ, 1995), на Международном симпозиуме "Витамины и здоровье населения Беларуси и смежных регионов" (Гродно, 1ЭЭ5).
Публикации: По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы и I принята к печати.
Структура и объем работы: Диссертационная работа состоит из