Введение к работе
|сс*ртаций_| І.
Актуальность работы. Альдолаза и сорбитолдегидрогеназа являются одними из ключевых ферментов разных путей метаболизма углеводов в клетке. Исследование их активности позволяет характеризовать состояние углеводного обмена как в отдельных органах, так и на уровне целого организма, кроме того, поскольку изоферментный спектр сыворотки крови становится похожим на изоферментные спектры повременного органа, знания об изоферментных спектрах разных органов и сыворотки крови в норме иогуг быть использованы в . целях диагностики.
В ветеринарии и аивотноводетве пока имеется иало данных об изоферыентах..Особый интерес представляют органомецифические ферменты такие как сорбитолдегидрогеназа и печеночная и ыыиечная альдолаза. Сведения о физико-химических и биологических свойствах этих ферментов в органах сельскохозяйственных животных, в той числе крупного рогатого скота, носят.фрагментарный характер. Имеются лишь единичные работы по выделению альдолаа из скелетных мышц быка ( Kensing e-t al,I967) и сорбиголдегидрогеназ яз печени быка (Судовцов, Харыухыыадова, 1987). Работы по выделению и очистке альдолазы и сорбитолдегидрогеназа из лечэви и сердца коров практически полностью отсутствуют, физико-химические характеристики ферментов не определены. Разработка эффективных методов выделения и очистки альдолазы и сорбитолдегиирогеназы может открыть новые возможности для получения биологически активных препаратов и их применения в иедицине и ветеринарии.
Цель и задачи исследования. Основной целью наших исследова
ний являлось выделение и очистка до гомогенного состояния альдо
лазы и сорбиголдегидрогеназы из сердца и печени коров, определе
ние физико-химических и биологических свойств ферментов из этих
источников, а также определение общей активности и изофермент-
ных спектров этих ферментов в сердце, печени и сыворотке крови
коров черно-пестрой и красной эстонской пород. ;
Для достижения указанной цели было необходимо решить слодую- щиа задачи: I) разработать способ выделения и очистки и получить препараты альдолазы и сорбиголдегидрогеназы из сердца и печен» коров, свободнее ог белковых и низкоиолвкулярпых прішесей; __?) исследовать физико-химические и биологические свойства аль-.. до л? з и сорбиголдегидрогеназ из перечисленных suae источниког;
3) исследовать породные различия активности и изоферментных спектров альдолази и сорбитоддегидрогеназы в сыворотке крови, сердце и печени коров черно-десгрой к красной эстонской пород.
Научная новизна работы. Впервые получены очищенные препарати и определены изоферыентные спектры альдолазы и сорбитолдегидрогеназы в сыворотке крови, сердца и печени здоровых коров черно-пестрой и красной эстонской пород.
Определена молекулярная масса, удельная активность, максимум активности в зависимости от рН среды и температуры для очищенных альдолаз и сорбитолдегидрогеназ из сердца и печени коров. ' Определены аминокислотный состав и влияние некоторых эффекторов .(ЭДТА, Zn,CI2) на активногть сорбитолдегидрогеназы.
Практическая ценность работы. На основе результатов исследований разработаны модифицированные метода выделения, очистки и определения биологических и физико-химических свойств альдолазы и сорбитолдегидрогеназы аз сердца и печени коров. Полученные данные об изоферментянх спектрах этих ферментов могут быть использованы в диагностических целях для определения поврежденного органа. Результаты диссертационной работы отражены в проблемной лекции доцента ЭСХА Пяллина Р. "Энзимы углеводного обмена", предназначенной для студентов ветеринарного,' зооинже-нерного и агрономического факультетов.
Кроме того, результаты исследований могут быть использованы как исходные в ветеринарной биохимии для характеристики углеводного обмена с.-х. животных.
Адробапия.Работы. Основные положения работы доложены на конференции "День науки зооинженерного факультета ЭС1А, посвященной ведущим эстонским ученым в области животноводства", Тарту, ЭСХА, июнь 1989; научной конференции молодых ученых и специалистов ЫВА, Москва, ИВА, свн^абр 1988, 1989.
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликованы 2 научные работы.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 116 стр. машинописного текста и состоит аз введения , обзора литературы , собственных исследований , обсуждения результатов , выводов , рекомендации по использовании научных выводов и списка латературк , включающего 139 работ ( 50 отечественных в 89 зарубежных авторов ). Диссертация
иллюстрирована 17 габлицаші й 26 рисунками.