Введение к работе
Актуальность темы. Повышение производства продуктов животноводства за счет увеличения продуктивности сельскохозяйственных животных и расширенного воспроизводства стада является одной из главных задач десятой пятилетки.
В связи с этим особое значение приобретает разработка и внедрение методов управления процессами размножения сельскохозяйственных животных, повышения их плодовитости и профилактики бесплодия.
В решении указанных задач, наряду с внешними факторами, стимулирующими половую функцию животных, важное место принадлежит применению синтетических и естественных гормонов, в том числе гонадотропних гормонов, полученных из сыворотки крови Жеребых кобыл (СЖК). ^
Применение натнвной СЖК или КЖК связано, как известно, с повторными инъекциями животным значительных количеств чужеродных сывороточных белков, что может привести к появлению, на фоне измененной реактивности организма, различной степени тяжести аллергических реакций.
Первые наблюдения, касающиеся случаев анафилаксии у овец и коров при введении им СЖК во время производственных опытов 1940—1943 rr.t описаны М. М, Завадовскнм (1963). В-последующем о случаях анафилактического шока у коров, в том числе и со смертельным исходом, сообщали: Buhner; 1958; Н. А. Дудоров, 1963; В. Морев и Е. Малишев-ский, 1964; И. К. Назаренко с соавт., 1964; А. А. Осетров с соавт., 1964; П. И. Шаталов с соавт., 1965 и др. Как следствие анафилактического шока авторы отмечали снижение или утрату коровами молочной продуктивности, ухудшение качества молока. Анафилактические реакции у овец при введении СЖК наблюдали В. В. Волков, 1946; А. Ш. М. Амарбаев, 1963; И. Я- Чистяков, С. X. Убайдов, 1977 и др. Овцы, перенесшие анафилактический шок, как правило, не приходили в охоту и оставались яловыми. Следует особо отметить, что анафилактические реакции при введении СЖК наблюдались, в ряде случаев, на фоне предшествующей вакцинации животных против инфекционных заболеваний, т. е. по типу параллергии.
Реальные возможности предотвращения у животных указанных аллергических реакций, свячаньт с получением ИЗ СЖК
НАУЧНАЯ БИбЛИОТЕКА
Моск. сельскохоэ. академии
им. К. А» Тииир^ва,
&&
препаратов очищенных гонадотропних гормонов. Современные
методы очистки основываются на работах Cartland a. Nelson,
выполненных в 1937 г. Авторы предложили способ получения
очищенных гонадотропинов из СЖК. включающий последо
вательное осаждение сывороточных белков с помощью 50%
концентрации ацетона или этилового спирта с последующим
выделением гонадотропинов при 70% концентрации этих оса-
дителей. ; .. ,' :''і '--"'''! ",v-
В дальнейших исследованиях по очистке гормонов СЖК эта принципиальная схема, применительно к этапу получения первичного концентрата гонадотропинов была, в основном, сохранена. В частности, па ней основываются способы получения гормонов СЖК, разработанные в ЧССР (Quesnerova, 1966) и Советском Союзе (Ф. Ю. Рышка с соавт., 1971).
Широкие испытания на сельскохозяйственных животных отечественного препарата гравогормона, проведенные в СССР и НРБ П. И. Шаталовым, В. 3. Желевым, М. П. Богдановым, А. П. Джуровым, Г. А. Черемисиновым, А. Г. Неждановым, Е. И. Чудновским, С. П. Беляковым, А. И. Сергиенко с соавт., А. Д. Лельковым, И. Я. Чистяковым, Ч. А.- Рзаевым и др. свидетельствуют о том, что очистка гонадотропинов СЖК не,отражается на их биологической активности, а удаление из гонадотропного препарата значительного количества сывороточных белков снижает сенсибилизацию животного гетерологнч-пыми белками и, тем самым, предотвращает возможность воз* иикновешш анафилактических реакций, что очень важно в практическом отношении.
Цель и задачи исследований. Известный в настоящее время в СССР способ получения в сухом виде очищенных от балластных белков гонадотропинов из СЖК (препарат гравогор-мон) основан на осаждении неактивных сывороточных белков при 50% концентрации этилового спирта с последующим выделением гонадотропинов при 75% концентрации этилового спирта. Это обеспечивает 25—30-кратную степень очистки го-надотропных гормонов по белку и конечный выход их в пределах 60% от исходной биологической активности СЖК. Однако, переход к производству гонадотропинов нз СЖК на промышленном оборудовании сопровождается, как правило, снижением качества очистки и количественного выхода гормонов.
В связи с этим целью наших исследований являлась разра
ботка нового способа выделения гонадотропинов нз СЖК, по
зволяющего увеличить выход гормонов по отношению к их со
держанию в исходной СЖК и улучшить качество очистки.
Представлялось также целесообразным уменьшить, по срав
нению с существующими способами, затраты времени на про
изводство препарата, а также отработать условия очистки,
обеспечивающие ведение процесса при комнатной темпера
туре.
Научная новизна работы. Анализ данных литературы последних лет показал, что различные модификации метода Cartland a. Nelson (1937), применительно к стадии получения первичного концентрата гонадотропннов из СЖК, с использованием ацетона или этилового спирта, не обеспечивают существенного улучшения качества очистки. Поэтому нами при разработке способа очистки гонадотропних гормонов из СЖК впервые использована схема, включающая последовательное применение двух видов химических осаднтелей белков: риванола и ацетона. Кроме того, известные в литературе условия применения каждого из указанных осаднтелей модифицированы нами, с целью повышения качества очистки, технологичности и экономичности процесса.
В частности, в отличие от применяемых для осаждения сы
вороточных альбуминов и альфа-бета-глобулннов 0,4% кон
центрации водного раствора риванола и соотношения объемов
СЖК и осадителя белков 1:3—1 :3,5, нами использован кон
центрированный 15% раствор риванола при соотношении объ
емов СЖК и осадителя 9:1. Это позволило избежать 4—
4,5-кратного разведения исходной СЖК на первой стадии очи
стки гормонов. ^
Схема получения первичного концентрата гонадотропннов по Cartland a. Nelson усовершенствована нами за счет сокращения экспозиции отстаивания белков с 16 до 1 часа, исключения второй стадии осаждения белков при 50% концентрации ацетона и рН 6,0 и ведения процесса очистки полностью при комнатной температуре.
Практическая ценность работы. Разработанный нами способ получения в сухом виде очищенных от балластных белков гонадотропннов из СЖК (гонадотропний препарат «Ова-ритропин»), обеспечивает ведение процесса очистки гормонов при комнатной температуре и выполнение его в течение одного рабочего дня, вместо 3—4 суток по способу Cartland a. Nelson и двух суток — по способу получения гравогормона {Ф. Ю. Рышка и др. 1971). При этом качество очистки «Овари-тропина» в 5—6 раз лучше, а выход гормонов по гонадотропной активности на 10—15% выше {без удорожания стоимости его производства).
Апробация работы и ее реализация. Государственным комитетом по делам открытий и изобретений при Совете Министров СССР принято решение о выдаче авторского свидетельства на разработанный способ получения «Оваритропи-аа» из СЖК-
Полученные новым способом серии препарата прошли комиссионную проверку в апреле-мае 1977 г. во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов МСХ СССР и признаны годными для применения
в качестве стимуляторов половой функции у сельскохозяйственных животных.
Публикация результатов исследований. Материалы исследований, изложенные в диссертационной работе, опубликованы в пяти статьях и доложены на конференции молодых ученых в 1976 году и межлабораторной конференции ВИЭВ 5 декабря 1977 г., а также на заседании методического Совета ВИЭВ в декабре 1977 г.
Объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы. Материал, изложен на 125 странииах машинописи, содержит 21 таблицу и 1 рисунок. Список используемой литературы включает 154 наименования, из них 63 на иностранных языках.
Приложение к диссертации: копни актов проверки «Овари-тропина» на лабораторных и сельскохозяйственных животных на 7 листах.