Введение к работе
посвященные органам обоняния, появились еще в середине прошлого века, обоняние до сих пор является едким из наименее понятых видов сенсорной рецепции. Все предложенные к настоящему времени модели трансдукции сигнала в обонятельной рецепторної* клетке включают в качестве ключевого компонента регудятсрнке ГТФ-связывапцие белки (0-белки), причем обнаружение двух запах-зависимых систем вторичных мессенджеров подразумевает участие по крайней мере двух разных типов G-белков [lancet, 1985; Boekftoff et al., 1990]. В то же время отсутствуют прямые доказательства связи конкретных G-белков с другими компонентами системы передачи сигнала в обонятельной рецепторной клетке. Таким образом, особая роль G-белков в качестве связующего звена между рецептором и эффектором делает их изучение весьма перспективным для понимания молекулярных механизмов обонятельной рецепции. Однако, рассматривая место регуляторних ГТФ-связывапцих белков в системах трансдукции сигнала, не следует ограничивать внимание только G-белками. В обонятельном эпителии некоторых животных были обнаружены другие ГТФ-связывающие белки, ассоциированные с запах-связывашими гликопротеидами [Novoselov et al.1989; FeserJco et al. 19881. Хотя по ряду формальных признаков эти белки нельзя было отнести к классическими G-белкам, некоторые их свойства, тем не менее, указывали на регуляторные функции данных белков.
Цель работы. Целью данной работы было идентифицировать и исследовать по возможности все ГТФ-связывашгие белки (не только G-белки) из обонятельной рецепторной клетки и попытаться определить их функции.
Научная новизна работы.
1. Впервые в обонятельном эпителии крысы был обнаружен специфи
ческий водорастворимый ГТФ-связывапций белок (белок 45кДа).
2. Показана видовая и тканевая специфичность бежа 45кДа.
Аналоги белка 45кДа обнаружены в обонятельном эпителии хомяка и
морской свинки.
3. Белок 45кДа локализован в цитозоле обонятельных жгутиков и
обонятельной слизи, и составляет значительную часть (порядка 2$)
всех водорастворимых белков обонятельного эпителия.
-
Белок 45кДа взаимодействует с поликлональнами антителами, выработанными против синтетического пептида, соответствующего участку аминокислотной последовательности. общему для а-субгедзнщ всех известных G-белкоЕ.
-
Обнаруженный ГТФ-связывавдий белок был выделен в чистом виде. Он существует в растворе в виде мономера и выявляется яри ДДС-злектрофорезе как полипептид с молекулярной массой около 45кДа. Изоэлектряческая точка белка - 5.2-5.3.
-
Белок 45 кБа эффективно связывает ГГФ.
Практическая ценность. Полученные в диссертационной работе теоретические и методические результаты могут быть использованы для более глубокого понимания молекулярных механизмов обонятельной рецепции, особенно при анализе событий, происходящих в обонятельной слизи. Использованные в работе методические подходы могут быть такке применены для выявления других ПФ-связыващих белков в различных тканях организма.
Апробация работы. Основные результаты, полученные при выполнении настоящей работы, докладывались на семинарах лаборатории биофизики рецепции ИБК РАН, на егегодной Конференции Института Сиофазики клетки РАН (1994 г.), на YII Всероссийском Симпозиуме "Механизмы сенсорной рецепции" (Москва, 1992), на Международной Конференции "Mechanisms or sensory cheroreceptlon In vertebrates" (Пушино, 1992),
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и состоит из обзора литературы (Гл.1), описания материалов и методов, использованных в работе (Гл.2), изложения полученных результатов и их обсуждения (Гл.З), выводов и списка литературы из 205 наименований. Диссертация иллюстрирована 14 рисунками.