Введение к работе
Актуальность проблемы. Поиск векторов, специфично связьвающихся в организме с клетками, тканями и органами-мишенями, является: необходимым этапом в осуществлении направленного транспорта лекарств (Gr'egoriadl* et al, 1977; Poznansky et al, 1984). Весьма привлекательными кажутся попытки использования в качестве векторов моноклональных антител (МоАт) к антигенам, преимущественно экспрессированных в органе-мишени. Одним из таких антигенов может быть ангиотензин-превращающий фермент (АПФ). АПФ - один из ключевых ферментов ренин-ангиотензиновой системы, играет важную роль в регуляции сосудистого тонуса:, переводит Ангиотензин I в мощный прессорный агент Ангиотензин' П и участвует в инактивации активного вазодилятатора - брадикинина. Известно, что концентрация АПФ . резко увеличена в легких (Cushman et al, 1971). Кроме того, АПФ расположен на внешней мембране эндотелиальных клеток, сосудов и, следовательно, доступен для веществ, циркулирующих в крови (Ryan et al, 1975). ' В последнее время обнаружено, .что при различных легочных заболеваниях активность- АПФ в легочной ткани, бронхо-альвеолярном лаваже и в сыворотке может меняться (Hoilinger et al, 1980). Все эти данные позволяют рассматривать АПФ в качестве маркера повреждения легочного, эндотелия (HoVUnger et al, 1983).
В настоящее время все большее.внимание уделяется изучению биораспределения радиоактивномеченньк антител в норма и при патологии (Кеепаїі et at, 1985).' Во-первых, эти исследования предоставляют, принципиально новую инфориацию о доступности тех или иных тканевых антигенов для циркулирующих компонентов крови, что важно для понимания механизмов взаимодействия кровь - стенка
сосуда (idelson et al, 1987).. Во-вторых, они служат основой для разработки новых методов диагностики при помощи иммуно-сцинтиграфии (Anderson et al, 1986). Яркими примерами такого подхода могут служить методы визуализации зоны инфаркта миокарда (Khaw et al, 1987), тромбов (Som et al, 1986) И опухолей (Larson et al, 1985).
В предварительных экспериментах было показано, что при введении в кровоток [***i] -меченых моноклональных антител (МоАт) 9В9 против АИФ наблюдается необычайно селективное накопление этих антител в легких. Этот факт, а также то, что в норме АПФ в легких локализован только на внешней поверхности эндотелиальных клеток сосудов, позволяют предполагать возможность использования моноклональных антител 9В9 для визуализации сосудов легких, а,также в качестве вектора для направленного транспорта веществ в
Легкие. ..,.'- "; : -''
Цель исследования. Изучение биораспределения и накопления в легких моноклональных антител 9В9 против ангиотензин-превращащего фермента.
Задачи исследования.
-
Изучение фармакокинетики и накопления в легких МоАт 9В9.
-
Изучение физиологических эффектов введения МоАт 9В9 in vivo.
3. Получение Fab'2 и Fab фрагментов МоАт 9В9 и сравнение их
накопления в легких с целыми молекулами антител.
4. Изучение накопления в легких МоАт 9В9 у животных с различными
моделями повреждения легких.
Научная новизна и практическая ценность работы. В работе впервые обнаружен факт необычайно селективного накопления моноклональных антител 9В9 против ангиотензин-превращанцего
фермента при введении этих антител в кровоток. Детально исследовано биораспределение и кинетика накопления в легких лабораторных животных разных видов МоАт 9В9, меченных разными изотопами. Изучены физиологические эффекты введения МоАт 9В9 і п vivo, которые в отличие от поликлональных антител к АПФ не вызывают заметного повреждения эндотелия легких. Показано, что селективное накопление в. легких МоАт 9Б9 резко снижается у животных с экспериментальными .моделями повреждения легких. Полученные результаты показывают, что іЬАт 9В9 против АПФ могут стать основой для разработки нового подхода для визуализации сосудов легких,, для оценки состояния сосудов при повреждении легких, а так^же могут быть использованы в к'ачэстве вектора для направленного транспорта веществ к легким. .
Апробация работа Диссертация ' апробирована на
кежлаборзторнои семинаре Института экспериментальной кардиологии ВКНЦ Ш СССР .(Москва^ .1990). . Материалы диссертации доложены такав на: йездународном сишозимумв по ингибированию АПФ (Лондон, 1989); IV Европейской сяшозимуиэ по гипертонии (Милан, 1989); Конгрессах' Европейского общества ядерной медицины (Страсбург, 1989; Амстердам, 1990); XV Всемирном конгрессе шждународного союза, аягиологов (Рим, 1989); V Всемирном конгрессе ядерной шдацины и биологии (Монреаль, 1990).
Публикации. По штериалаи диссертации опубликовано 8 работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания штодов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы. Работа излогена на 130 страницах машинописного .текста, содзрашт 22 рисунка и 9 таблиц.