Введение к работе
Актуальность темы. Многочисленные эпидемиологические клинические и экспериментальные данные указывают на существование корреляции между заболеваемостью и смертностью от сердечнососудистых заболеваний вследствии атеросклероза и распространенностью некоторых типов днелипопротеинимии (Никульева, 1980; Лопухин и др., 1983). Частота распространения и скорость развития атеросклероза коррелирует с так называемым индексом атерогенности: отношение холестерина лнпопротеидов низкой плотности (ЛПНГТ) и лнпопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) к холестерину лнпопротеидов высокой плотности (ЛПВП), или отношение апо-В/апоА (Gofman, 1966; Репин, 1987). Повышение уровня ЛПВП в плазме крови при приеме гнполиподемических лекарств рассматривается как наиболее надежный критерий эффективности фармакотерапии (Brewer, 1985; Репин, 1987). Однако механизм регуляции уровня ЛПВП в кровотоке плохо изучен и поэтому трудно однозначно объяснить антиатерогенное действие ЛПВП.
В настоящее время наиболее признанной является концепция обратного транспорта холестерина ( т.е. переноса его из периферических тканей в печень для экскреции, в котором ведущая роль принадлежит ЛПВП), впервые предложенная Glomset (1985). Именно способность "собирать" холестерин, этерифицировать его и превращать в формы, которые могут захватываться клетками печени и подвергаться в них дальнейшим превращениям, позволяют рассматривать ЛПВП как липопротсиды, препятствующие развитию гиперхолестеринимии. Теоретическая важность и актуальность изучения метаболизма ЛПВП в печени очевидна и вряд ли требует дополнительной аргументации.
В настоящее время рассматриваются три основные возможности доставки холестерина в печень для последующего окисления. 1- Так называемый селективный транспорт, в результате которого эфиры холестерина (ЭХ), находящиеся в составе ЛПВП, поступают в печень по градиенту концентрации вне зависимости от существования каких-либо рецепторных структур. 2 - Путь, обусловленный транслокацией ЭХ в обмен на жирные кислоты с ЛПВП на ЛПНП, с последующим захватом ЛПНП, обогащенных ЭХ, рецепторами ЛПНП (апо-Е/апо-В) печени. 3 - Рецспторный захват ЛПВП, обусловленный наличием соответствующих специфических белков па поверхности клеток печени. В последние годы появились многочисленные сообщения о наличии специфических мест связывания ("рецепторов") для ЛПВП с
молекулярной массой около 1 МКд на поверхности многих типов клеток, включая клетки печени. Однако, по-видимому, эти рецепторы не играют существенно!! роли в процессах удаления холестерина из периферических тканей и последующей его доставки в печень.
Недавно Fidge с соавт., 1992, исследуя связывание ЛПВП в мембранной фракции печени,. выявил дополнительный компонент, связывающий ЛПВП с более высокой афишюстыо. Учитывая различия в метаболизме ЛПВП в культуре гепатоцитов и данные, полученные в опытах in vivo, мы предположили, что в нспаренхимальном компартменте печени локализованы "рецепторы", характеризующиеся более высокой афишюстыо взаимодействия с ЛПВП и принимающие участие в метаболизме ЛПВП и холестерина в печени.
Цель и задачи исследования. ЦЕЛЬ:
ЗАДАЧИ:
-
ИЗУЧИТЬ ПАРАМЕТРЫ СВЯЗЫВАНИЯ ЛПВПЗ В КУЛЬТУРАХ ГЕПАТОЦИТОВ, КУПФЕРОВСКИХ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ.
-
ВЫЯВИТЬ РОЛЬ АПО-АІ И АПО-АП ВО ВЗАИМОДЕЙСТВИИ ЛПВП С ЛПВП-СВЯЗЫВАЮЩИМИ МЕСТАМИ В КУЛЬТУРЕ ГЕПАТОЦИТОВ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ.
-
ИЗУЧИТЬ РЕГУЛЯЦИЮ ЭКСПРЕССИИ ЛПВП-СВЯЗЫВАЮЩИХ МЕСТ В КУЛЬТУРЕ ГЕПАТОЦИТОВ И ЭНДОТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ ДЕКСАМЕТАЗОНОМ, ЭСТРАДИОЛОМ И ХОЛЕСТЕРИНОМ ИЗ ЛИПОПРОТЕИДОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ.
-
ИЗУЧИТЬ РОЛЬ ЛПВП-СВЯЗЫВАЮЩИХ МЕСТ, ЛОКАЛИЗОВАННЫХ НА РАЗЛИЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ В МЕТАБОЛИЗМЕ ЛПВП ПЕЧЕНЬЮ.
Научная новизна. На основании исследований, проведенных в
культуре эндотелиальных клеток печени, впервые показано наличие
высокоаффинных ЛПВП связывающих мест, локализованных па
эндотелии печени. Высокоафиннос связывание (Р2) выявлено только на
поверхности эндотелиальных клеток печени и не обнаружено на других
типах клеток, включая гспатоциты, купфферовские клетки, фибробласты кожи человека. Обнаружены различия в механизме регуляции экспрессии Р2 и известных ранее ЛПВП-рецепторов с Кд=20 мкг/мл (в дальнейшем называемых Р1). Так, дексаметазон дозозависимо и обратимо увеличивал концентрацию Р1 независимо от внутриклеточного содержания de novo синтезируемого холестерина, тогда как не влиял на количество Р2. Нагрузка клеток холестерином ЛПНП сопровождалась увеличением количества Р2 и не влияла на Р1. Впервые показано, что взаимодействие ЛПВП с эндотелиальными клетками печени приводит к ускоренному метаболизму частиц ЛПВП гепатоцитами.
Практическая ценность работы. Полученная культура эндотелиальных клеток печени может быть использована в качестве модельной системы для изучения молекулярных и клеточнх механизмов липидного обмена. Полученные данные о влиянии гормонов на экспрессию ЛПВП- связывающх мест могут служить основой для разработки новых методов и подходов при изучении роли эндокринных факторов в развитии атеросклеротических поражений организма. Апробация работы. Результаты работы доложены на межлабораторном семинаре в Кардиологическом научном центре РАМН, а также на 62 симпозиуме Европейского общества по изучению атеросклероза ( Иерусалим, 1993).
Структура и объем работы. Диссертация состоит из
введения, обзора литературы, описания методов исследования,
результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка
использованной литературы. Работа изложена на страницах