Введение к работе
Актуальность, темы. Концентрация ионов Сл + в цитоплазме тромбоцитов (tCa2*^ ) является фактором, определяющим функциональную активность этих клеток. Активация тромбоцитов является существенным звеном ряда физиологических и патологических процессов, таких как тромбообразование и атерогенез [Siess, 1989; Sussraan,, 1965]. В связи с этим очевидна необходимость изучения факторов, регулирующих tea +]i в тромбоцитах.
В настоящее время относительно хорошо изучены механизмы гормон-индуцированного повышения [Ca2+J. в тромбоцитах. Важную роль в этом процессе играет вход ионов Са2+ в цитоплазму из внешней среды. Предполагается, что этот транспорт осуществляется по так называемым рецепторуправляемым каналам [Hallam, Rink, 1985]. Механизмы сопряжения этих каналов с активирующими их рецепторами не изучены. Не известно, в частности, участвуют ли в этом сопряжении GTP-связывающие белки.
В последнее время интенсивно изучается влияние компонентов плазмы на способность тромбоцитов к антивации. Было обнаружено, что липопротеиды низкой плотности обладают проагрегантной активностью [Bruckdorfer et al., 1984]. Повышение уровня этих липопротеидов может приводить к гиперреактивносги тромбоцитов [Aviram, Brook, 1987]. Механизмы активирующего воздействия ЛНП на тромбоциты исследованы недостаточно. Было высказано предположение, что под действием ЛНП в тромбоцитах повышается tea ь [Knorr et al., 1989]. Однако не исследована ни специфичность действий ЛНП, ни роль рецепторов ЛНП, ни
механизмы индукции или регуляции этого процесса.
Цель и задачи исследования. Целью работы было изучение
механизмов регуляции tea2*] в тромбоцитах человека
гормональными и негормональными активаторами GTP-свяэывающих
белков, а также липопротеидами низкой плотности.
В работе были поставлены следующие задачи:
1.Изучить влияние активаторов GTP-связывающих белков на функцию рецепторуправляемых кальциевых каналов тромбоцитов.
2.Исследовать влияние ЛНП на системы обмена кальция и фосфоинозитидов в тромбоцитах человека.
Научная новизна работы. Впервые показано, что рецепторуправляемые кальциевые каналы тромбоцитов активируются под действием фторида натрия, что указывает на участие GTP-связывающего белка в активации этих каналов. Впервые детально исследованы механизмы ЛНП-индуцированного повышения (Са *)і в тромбоцитах человека. Получены свидетельства в пользу того, что под действием ЛНП происходит активация Са -каналов тромбоцитов. Охарактеризовано индуцированное ЛНП фосфорилирование белков тромбоцитов. Описано ингибирование Са2*' -мобилизующего эффекта ЛНП активаторами протеинкиназы С и сАМР-зависимых протеинкиназ. Впервые показано, что эффекты ЛНП на системы обмена кальция и фосфоинозитидов, а также на фосфорилирование белков потенциируются адреналином. Впервые получены данные об участии рецептора ЛНП в действии этих липопротеидов на iCaZ*l. в тромбоцитах.
Практическое значение работы. Результаты данного исследования могут быть использованы в разработке методов фармакологической защиты клеток организма от повреждающего действия высоких
концентраций ЛНП в крови. В частности, потенциирование этого действия адреналином и блокирование действия ЛНП веществами, повышающими сАМР, указывает на перспективность применения в качестве защитных средств альфа-адренергических антагонистов, природных активаторов аденилатциклазы и ингибиторов фосфодиэстеразы сАМР.
Апробация работы. Результаты, полученные в настоящей работе, были доложены на симпозиуме "Возбудимые мембраны" (Киев, 1987) и Международном Конгрессе по патофизиологии (Москва, 1991). Публикации. По теме диссертации опубликовано шесть работ, три работы находятся в печати.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (материалы и методы исследования, результаты и обсуждение), выводов и списка литературы, включающего /7-3 источника. Работа изложена на V<4Цстраницах, содержит 25 рисунков и 5 таблиц.