Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка способа получения лекарственных препаратов на основе иммобилизованных протеаз Bac. subtilis Троицкий, Александр Васильевич

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Троицкий, Александр Васильевич. Разработка способа получения лекарственных препаратов на основе иммобилизованных протеаз Bac. subtilis : автореферат дис. ... кандидата медицинских наук : 03.00.04 / Ин-т цитологии и генетики.- Новосибирск, 1998.- 23 с.: ил. РГБ ОД, 9 98-7/1541-3

Введение к работе

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

В настоящее время особый интерес вызывает разработка доступных и
эффективных способов иммобилизации протеаз, поскольку такие
стабилизированные биокатализаторы начинают интенсивно

использоваться в медицине в качестве фармакологических средств для лечения гнойно-воспалительных процессов. Их терапевтический эффект обусловлен высокоспецифичным, селективным лизисом белков некротических тканей, всегда присутствующих в гнойно-воспалительном очаге и поддерживающих патологический процесс. Удаление нежизнеспособных, некротизпрованных тканей приводит к стимуляции процессов репарации и регенерации тканей. Неполитическое действие иммобилизованных протеаз широко используется в хирургии, стоматологии, пульмонологии, гинекологии, офтальмологии .

Большинство опубликованных работ по иммобилизации протеаз относится к получению их нерастворимых форм, в то время как по получению и исследованию биохимических свойств растворимых иммобилизованных протеаз в литературе имеются лишь единичные сообщения (Л. В. Земцова и соавт., 1981; Р. И. Салганик и соавт., 1983). В значительной мере это объясняется тем, что перечень пригодных для иммобилизации водорастворимых полимеров весьма ограничен, к тому же многие из них инертны и не поддаются активации традиционными химическими методами.

Наиболее перспективными полимерными носителями для получения водорастворимых иммобилизованных ферментов медицинского назначения являются полиэтиленоксиды. Полиэтиленоксид 1500 выпускается отечественной промышленностью и применяется в медицине для изготовления композиционных лекарственных форм (мазей, эмульсий, линиментов). Полиэтиленоксид практически нетоксичен и в организме не подвергается биотрансформации, выделяясь при парэнтеральном введении в неизменном виде (В.Ф. Карташев, 1984). Однако, ввиду высокой химической инертности полиэтиленоксида 1500 возникают сложности с его активацией. Наиболее перспективным, по нашим представлениям, может стать физико-химический метод активации полиэтиленоксида с использованием ионизирующего излучения.

Одним из основных критериев при выборе фермента для иммобилизации с целью получения препарата медицинского назначения является его доступность и экономичность. Протеолитические ферменты, получаемые из животного сырья (пепсин, трипсин, химотрипсин) и растительного (папайи), неперспективны вследствие ограниченности сырьевой базы. В отличие от них, бактериальные протеазы доступны.

При получении иммобилизованных на полиэтиленоксиде протеаз наше внимание привлекли протеазы Bac.subtilis, выпускаемые отечественной промышленностью в больших масштабах для биотехнологических целей.

Цель работы - создание медицинских препаратов на основе протеаз Bac.subtilis, иммобилизованных на полиэтиленоксиде 1500 и гидрофильном геле полиэтиленоксида 1500 (далее полиэтиленоксид).

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

  1. Исследовать влияние ионизирующего излучения на водные растворы полиэтиленоксида с целью введения в полимер химически активных групп для последующей иммобилизации протеаз.

  2. Разработать способ радиационной иммобилизации протеаз на полиэтиленоксиде.

  3. Изучить физико-химические свойства иммобилизованных на полиэтиленоксиде протеаз.

  4. Разработать радиационный способ получения гидрофильных гелей полиэтиленоксида.

В результате проведенных исследований установлено, что поли-тиленоксид в растворе под действием ионизирующего излучения окисляется с образованием карбонильных групп.

Полиэтиленоксид, активированный радиационным способом, способен связываться с протеазами Bac.subtilis, образуя иммобилизованную форму фермента.

Впервые разработан радиационный способ иммобилизации протеаз Bac.subtilis на полиэтиленоксиде позволяющий получать стерильную форму лекарственного препарата.

С использованием ионизирующего излучения впервые получен гель полиэтиленоксида и гелевая форма иммобилизованной протеазы.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

На основе проведенных исследований разработаны лекарственные препараты имозимаза и стоматозим, представляющие собой иммобилизованные радиационным способом на полиэтиленоксиде и геле полиэтиленоксида протеазы Bac.subtilis. Препараты прошли полный цикл доклинических исследований в соответствии с утвержденной программой МЗ РФ. Препарат имозимаза официально разрешен приказом министра здравооохранения РФ для применения в медицинской практике и включен в Государственный Реестр лекарственных препаратов, регистрационный N94/128/5.

Анализ результатов по использованию имозимазы в клинической практике показал высокую терапевтическую эффективность препарата в хирургии, стоматологии, пульмонологии, гинекологии, офтальмологии.

Разработан высокочувствительный метод количественного определения полиэтиленоксида в физиологических средах, который позволил исследовать фармакокинетику иммобилизованных на полиэтиленоксиде протеаз при различных путях введения экспериментальным животным.