Введение к работе
.-- . " '^
туальность проблемы исследования. Микоплазмы___-. прокариоты с
именьшим по размеру геномом, но способные к самостоятельному
спрсиззеденив - представляются наилучшим модельным организмом
я исследований регуляции активности генов на уровне всей
етки. Изучение микоплазм диктуется также практической
сбхгдимостью: многие виды играют существенную роль в патологии
лоь«к;і и сельскохозяйственных животных, а также являются
.новными и наиболее трудно детектируемыми " контаминантами
._:'-0';.и_'. хул-і^р. Сднакс, использсзаниэ ггикоплазм в качестве
ідельного организма затрудняет скудость знаний об их метаболизме
генах. Частично ограниченность знаний объясняется тем, что при
:у-іении микоплазм подходы классической биохимии и генетики
:азызаются малоэффективными. Потеря микоплазмами части
юсинтетических путей из-за уменьшения генома в процессе их юлюции делает необходимым получение предшественников синтеза ::-рсмолскул ;v2 сггзугтдзясй среды, но вызсд о пс-ере ммксплазмой іредсленксго метаболического пути из-за отсутстзия активности >ответст?<ующих ферментов у олного штамма, не может быть обобщен ; весь виз, т.к. нестабильность генома микоплазм приводит к їачительнк'м отличиям между штаммами.
Тем не MvHir-e, за последние годы удалось значительно расширить
іания, что связано с применением подходов и методоз молекулярной
юлогии для изучения метаболизма и генетики этих уникальных
ікроорганизмов. Задачей данной работы было клонирование,
іределение последовательности нуклеотидов и картирование
гкоторых консервативных в ззолюции генов, продукты которых играют
іжнуп роль в метаболизме макромолекул, а также построение
ізтгческой карти хромосомы Mycoplasma gallisepticuis втамм А5969.
-Л-- исследования Характеристика компонентов метаболизма
i;rt'жолокул Mycoplasma gallisepticum с ислолі зопа.чие.ч
пекулярне— биологического педх?,"?., з Таїсіє изучение хромосомы /ее.- ' -г'ла да11іг,сріісі:л.
звиа^а ре^ультатог. .' . В работе определены последовательности /клеотпяов и картированы гены, кодирующие АТР-связывающуп /бъединицу топсизомеразы типа II, бета-суС'^единицу РНК-
полимеразы, рибосомные РНК Mycoplasma gallisepticum. Построен
физическая карта хромосомы ^Mycoplasma gallisepticum А5969
проведено сравнение хромосом образцов штамма из разных коллекций.
Практическая ценность работы. Получение результаты, кроме решзни
актуальной задачи разработки модельного организма для исследовани
регуляции экспрессии генов на уровне целой клетки, . могут . быт
использованы -при разработке средств диагностики и лечени
микоплазменных заражений. Предложенный методи получения ДН
микоплазм для анализа пульс-электрофорезом позволяет получать
хранить в течение длительного времени ДНК охарактеризованны
штаммов, что важно для препаратов, используемых при сравнительно
характеристике штаммов. Предложенный метод " получени
последовательных делеций секвенируемого фрагмента может быт использован . для определения последовательностей нуклеотидо протяженных фрагментов ДНК.
Апробация работы. Материалы работы были представлены на школе семинаре FEMS "Быстрая диагностика микоплазм" (Иерусалим, Израиль 1991 г.), IX Конгрессе Международной Организации Микоплазмолого (1992 г., Аймс, США), X двустороннем Российско-Германско симпозиуме "Организация и экспрессия генома" (Суздаль, 1993 г.). Публикации." 'По* материалам дис'с"ертации опубликовано 6 "статей и статья находится в печати.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из раздело "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результат и их обсуждение", "Заключение", "Выводы", "Список литературы" Работа изложена на 1^2. страницах машинописного текста, включающег 29 рисунков, 2 таблицы и список литературы, содержаний 119 ссылок Обзор литературы посвящен особенностям биологии микоплазм современным подходам к исследованию их метаболизма.