Введение к работе
Актуальность проблемы. Углеводные детерминанты в составе гликолипидов и гликопротеинов клеточной поверхности являются ключевыми структурами, во многом определяющими характер межклеточных контактов в норме и патологии. Широкое распространение получило представление об углеводах как "детерминантах узнавания", задающих адрес миграции клеток. Углевод-опосредованная адгезия является одной из стадий инициации оплодотворения, инвазии лейкоцитов через эндотелий сосудов, взамодействия клеток-киллеров с патогеном, а также метастазирования злокачественных опухолей.
Изменения в составе углеводов на поверхности клетки, сопутствующие как нормальной дифференцировке клеток, так и онкотрансформации выявляются с помощью углеводсвязывающих белков, прежде всего, моноклональных антител (МА). Использование МА, обладающих высокой специфичностью, позволяет изучать изменения в гликозилировании мембранных и сывороточных белков и липидов.
Получение высокоспецифичных МА против углеводных детерминант осложнено гетерогенностью, малой доступностью и низкой иммуногенностью природных гликоконъюгатов. Использование гомогенных синтетических антигенов позволяет решить эти проблемы и открывает возможности изучения механизма формирования иммунного ответа к углеводным антигенам. Цель работы. Основной задачей данного исследования являлась разработка конкретного подхода к получению МА с помощью полностью синтетических углеводных антигенов и изучение иммунохимических свойств полученных антител. В соответствии с этим работа подразделялась на следующие этапы :
-
получение МА против антигенов Ley к SiaLe* при иммунизации мышей неогликоконъюгатами;
-
определение эпитопной специфичности полученных антител и изучение их взаимодействия с опухолевыми клетками;
3) определение с помощью широкого спектра синтетических углеводных
антигенов эпитопной специфичности МА, полученных другими исследователями;
4) сравнение иммунохимических свойств МА, полученных к синтетическим и
природным углеводным детерминантам.
Научная новизна. Разработан подход к получению МА к углеводным антигенам, в основе которого лежит использование нового типа иммуногена, представляющего собой олигосахарид, ковалентно присоединенный к иммунологически инертной матрице - липофилизованному полиакриламиду. Получены гибридные клетки, продуцирующие антитела к тетрасахаридам Ley и SiaLe", для цитологических и гистологических исследований отобраны наиболее специфичные МА. С помощью синтетических антигенов проведено исследование эпитопной специфичности МА, полученных другими исследователями, При этом показано, что эпитопом для антитела LU-G7, специфически связывающегося с клетками рака молочной железы, является дисахарид Le. В результате анализа МА, предоставленных участниками V и VI Международных Рабочих Совещаний по типированию лейкоцитов человека, выявлено несколько десятков анти-углеводных антител, для некоторых из них определена эпитопная специфичность.
Апробация полученных данных. Результаты работы были представлены на XI Международном симпозиуме по углеводам (Париж, Франция, 1992), XII Международном симпозиуме по гликоконъюгатам (Краков, Польша, 1993), на V Международном Рабочем Совещании по типированию лейкоцитов (Бостон, США, 1993), на IV Российско-Корейском симпозиуме по биотехнологии (Москва, 1994), на III Международном симпозиуме по биоорганической химии (Дагомыс, Россия. 1995), Международной конференции по биологии и химии сиаловых кислот (Москва, 1994), на III Школе по клеточным и молекулярным аспектам иммунологии (Пущино, 1996). на VI Междунаром Рабочем Совещании по типированию лейкоцитов (Кобе. Япония. 1996).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 14 работ.
Структура и объем диссертации. Диссератация состоит из введения, обзора литературы, результатов и их обсуждения, экспериментальной части и выводов. Содержание диссертации изложено на 120 страницах машинописного текста, включающих 25 рисунка, 29 таблиц и список цитируемой литературы из 240 наименований.