Введение к работе
Актуальность проблемы. Диссертация посвящена решению вопросов, связанных с созданием противовирусных соединений: афинных ингибиторов функций вирусных белков и производных олигонуклеотидов, образующих комплементарные комплексы с вирусными нуклеиновыми кислотами и направленно воздействующих на генетический материал вируса. Работы по конструированию производных олигонуклеотидов в настоящее время развернулись в большом числе лабораторий и фирм в разных странах. Считается, что на их основе возможно создание эффективных противовирусных препаратов.
Цель работы. Целью работы было исследование влияние различных модифицированных производных олигонуклеотидов на размножение вируса гриппа и функции мРНК этого вируса с целью выявления оптимальных для воздействия структур в вирус-специфических РНК и с целью поиска модификаций, повышающих эффективность олигонуклеотидов как ингибиторов функций вирусных белков и РНК.
Научная новизна работы. Впервые проведено исследование инги-бирования размножения вируса гриппа в эмбрионах и культуре клеток и синтеза белка и РНК в бесклеточных системах с помощью производных олигонуклеотидов. Проведен сравнительный анализ ингибирующего действия олигонуклеотидов и их производных, несущих на 5'- и (или) З'-концевом фосфате остатки ароматического 2-хлорэтиламина, холестерина, порфирина в различных системах. Показано, что эффективность ингибирования трансляции зависит от положения антисмыслового олигонуклеотида в структуре мРНК. Показано, что введение остатка холестерина в олигонуклеотид резко повышает их захват клетками, в то время, как обработка клеток диметилсульфоксидом, ДЕАЕ-декстраном и полилизином, применяемые для улучшения трансфекции клеток нуклеиновыми кислотами, не стимулирует связывание производных олигонуклеотидов с клетками.
Практическая ценность работы. Настоящая работа была выполнена в рамках программы по созданию производных олигонуклеотидов для подавления вируса гриппа, который относится к числу наиболее важных практически; эффективных методов терапии заболевания гриппом не имеется, вакцинация с целью предотвращения заболевания не эффективна вследствие высокой изменчивости антигенных характеристик вируса. Вирус гриппа является одним из наиболее изученных, имеется большой выбор Штаммов, отличающихся по патогенности, с которыми могут быть проведены эксперименты в любых вариантах модельных сие-
тем.
Публикация и апробация работы. Результаты диссертации опубликованы в 10 статьях в центральных журналах. Материалы диссертационной работы докладывались на Международном симпозиуме "Синтетические олигонуклеотиды: проблемы и перспективы их практического использования", Москва, 1991 и Международном совещании "Биосинтез белка", Пущино, 1991.
Объем и структура диссертации, диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, он включает 16 рисунков, 13 таблиц, список цитируемой литературы из 114 наименований. Работа состоит из 3-х глав, введения и выводов.