Введение к работе
Актуальность темы. Поиски путей снижения заболеваемости, улучшения продуктивности сельскохозяйственных животных и качества получаемой от них продукции привели к изысканию биологически активных препаратов: специфических юмуностимуляторов, а также препаратов, стимулирующих естественную резистентность животных и птиц, особенно молодняка раннего возраста. Важная роль в этом отводится иммуномодуляторам пептидной природы.
В настоящее время в налей стране и за рубежом разрабатываются различного вида технологии по переработке непищевого бе-локсодержащего сырья, обеспечивающие получение кормовых добавок, высокоактивных в биологическом отношении. Наибольший интерес в этом плане представляют препараты, полученные путем ферментативного гидролиза белков, результатом которого являются продукты высокой биологической ценности - аминокислоты и пептиды.
Разработаны различные аминокислотно-пептидные препараты, получаемые ферментативным гидролизом крови животных и птиц, тканей внутренних органов и мышц, белков молока и т.д. Эти гидролиэаты используют непосредственно в виде добавок к пищевому рациону животных, а также в качестве аминокислотно-пептидной основы питательных сред для культивирования микроорганизмов или перевиваемых клеток при создании специфических препаратов (Н.П.Сивакова, 1981; А.Д.Чудинова, 1986; Л.А.Булашова, 1988; Н.Г.Шептун, 1989; А.П.Простяков, Л.Я.Телишевская, 1989; А.А.Комаров, 1991; К.Род-ригес Ыартинес с соавт., 1993).
Несмотря на значительные успехи, достигнутые в этом направлении, актуальной остается проблема получения гидролизатов с заданными свойствами.
Исследованиями последних лет изучено влияние аминокислотно-пептидных препаратов на обмен веществ животных, их деэинтоксика-
ционные и плазмозамещающие свойства, лечебно-профилактическое действие при различных патологических состояниях организма, а также действие на иммунитет (П.С.Васильев, В.В.Суздалева, 1982; Г.А.Белокрылов с соавт., 1986, 1989; Д.С.Колабская, 1987; Е.Я. Стан, 1983; К.К.Мовсум-Заде, В.А.Берестов, 1989; А.А.Комаров, А.П.Простяков, 1991; T.Parker et al, 1984; P.JolleB et al, 1984; C.J.Heijnen et al, 1988).
Однако роль и значение пептидов из состава белковых гадроли-затов изучены еще недостаточно. Поэтому все большее значение приобретает изучение биологически активного действия отдельных компонентов гидролизатов, что важно для создания новых пептидных и аминокислотно-пептидных препаратов для лечебных и профилакти-чесих целей.
Цель и задачи исследований. Целью наших исследований являлось разработать способ получения гидролизатов из белкового сырья животного происхождения о применением различных протеоли-тических ферментов, изучить биохимический состав и биологическую активность аминокислотно-пептидных препаратов с учетом их целевого назначения.
В связи с этим необходимо было решить следующие частные задачи:
определить оптимальные условия гидролиза белоксодержащего сырья при использовании различных ферментов;
сравнить полученные гидролиэаты по аминокислотному и пептидному составу, и основным биохимическим показателям;
определить биологическую активность гидролизатов на разных биологических моделях с проведением опытов в лабораторных и производственных условиях;
разработать и представить к утверждению нормативно-техническую документацию (НТд) на изготовление пептидного препарата
дія сельскохозяйственных животных "Пептидамин".
Научная новизна. Иэтодом гель-фильтрации (ГФ) на сефадексе 6 -15 изучен пептидный состав гидролизатов крови, полученных с помощью различных ферментов.
Разработан метод определения биологической активности пептидных фракций из состава белковых гидролизатов на ыодели тест-штаммов микроорганизмов и показано значение для микроорганизмов пептидов с молекулярной массой (И.м.) выше 1000 Д.
Методом последовательной хроматографии изучен состав ГФ-фракции с М.М. 1250 Д. Идентифицированы биологически активные пептиды, входящие в состан фракции 1250 Д. Изучен аминокислотный состав этих пептидов. Определено, что максимум биологической активности проявляют гидрофильные пептиды, содержащие большие количества основных аминокислот.
Использованный метод может быть предложен для изучения пептидных компонентов белковых гидролизатов. Сочетание методов гель-фильтрации, ВЗЇЇХ в обращенной фазе и хроматографии аминокислот позволяет получить наиболее полную информацию по пептидному составу белковых гидролизатов.
Модифицирован метод определения бактерицидной активности сыворотки крови цыплят при изучении естественной резистентности.
Практическое значение работы. Разработан способ получения пептидно-аминокислотного препарата с помощью щелочной грибной протеазы (протокрин) и определена технологическая схема производства пептидно-аминокислотного препарата пепсиновым гидролизом из отходов производства Московского завода сычужного фермента.
Показано, что препараты глубокого гидролиза (трипсиновые, панкреатиновые) могут быть использованы как аминокислотная основа для бактериальных питательных сред, а также как аминокислот-
но-пептидные добавки при вырадивании молодняка сельскохозяйственных животных.
Препараты частичного гидролиза (пепсиновые, мккробнопротеаз-ные, протокриновые) могут быть использованы для получения пептона или как пептидные добавки для бактериальных питательных сред, а также как пептидные препараты для повышения резистентности животных, особенно молодняка раннего возраста.
На основании результатов проведенных исследований разработана и утверждена нормативно-техническая документация на изготовление пептидного препарата "Лелтидамин".
Апробация -работы. Основные положения диссертационной работы доложены на ХШ научной конференции молодых ученых Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (1992); на Всероссийской конференции "Культуры клеток в биотехнологии и ветеринарии" (Москва, ВИЭВ, 1993); на заседаниях Ученого совета и проблемно-методических комиссии ВГШИ (I99I-I993).
Дубликации. По теме диссертации опубликовано 2 печатные работы и 3 статьи находятся в печати.
OfobfiM и структура диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 10 рисунками. Список литературы содержит 262 источника, в том числе 92 -иностранных. Приложение на 37 страницах.