Введение к работе
Актуальность проблемы: Процесс активации факторов свертывания ассоциируется с поврежденной поверхностью сосуда. Образование тромба, способного остановить кровотечение из крупного кровеносного сосуда, происходит за несколько минут. Толщина тромба измеряется миллиметрами. Распространение факторов свертывания на такие расстояния за счет диффузии не обеспечивает необходимой скорости нарастания фибриновой массы, так как концентрация факторов быстро убывает с удалением от активирующей поверхности.
Существует гипотеза о том, что активированные на поврежденной поверхности факторы свертывания проникают в кровоток и, за счет положительных обратных связей, вызывают активацию каскада гемокоагуляции (Атауллаханов, Гурия, 1994). При этом в данной зоне происходит скачкообразное увеличение концентрации активированных факторов и преодоление концентрационного барьера, необходимого для образования фибрина. Далее процесс переходит в зону, еще более удаленную от поверхности поврежденного сосуда. Таким образом возникает активационная волна, которая распространяется в просвет сосуда значительно быстрее фронта диффундирующих факторов свертывания и может обеспечить необходимую скорость роста фибринового сгустка.
В этой же гипотезе рассматривается вопрос об остановке роста сгустка. Предполагается, что вслед за волной активации возникает волна ингибирования, которая через некоторое время обгоняет первую. При этом происходит инактивация факторов свертывания и остановка фибринообразования.
Альтернативные гипотезы предполагают, что остановка роста фибринового сгустка происходит благодаря вымыванию факторов свертывания с поверхности сгустка потоком крови (Davie et al. 1991). На первое место в процессе остановки фибринообразования выдвигаются антикоагулянты плазмы крови (Pabinger, Schneider 1996), или их сочетание с фибинолизом (Vermylen et al. 1986).
Для того, чтобы определить, имеет ли место автокаталитическое распространение волны активации и ее последующая остановка или эти процессы определяются вымыванием факторов свертывания, необходимо проведение экспериментов по изучению роста фибринового сгустка в плазме крови в отсутствии ее перемешивания
Цели и задачи исследования: Цель нашей работы заключалась в изучении пространственного развития фибринового сгустка при локальной активации свертывания в плазме крови in vitro. В настоящей работе '; были сформулированы следующие экспериментальные задачи:
-
создать экспериментальную модель, позволяющую визуально регистрировать момент начала фибринообразования и процесс роста фибринового сгустка in vitro.
-
Исследовать особенности активации свертывающей системы фрагментом деэндотелизованного кровеносного сосуда и скорость роста образующегося фибринового сгустка. Определить возможность самопроизвольной остановки роста фибринового сгустка и участие протеина С в этом процессе.
3) Исследовать . влияние различных концентраций
антитромбина III в образце исследуемой плазмы крови на
процессы активации, развития и остановки роста фибринового
сгустка.
Научная новизна и практическая значимость работы В ходе экспериментов была отработана модельная система для наблюдения роста фибринового сгустка в плазме крови в отсутствие перемешивайия. Эта модельная система позволяет в стандартных условиях, с минимальными затратами плазмы крови и фрагмента кровеносного сосуда в качестве активатора свертывания, исследовать процесс развития фибринового сгустка in vitro и влияние отдельных компонентов свертывающей и антикоагулянтной систем крови на этот процесс.
Разработаны иммуно-ферментные тест системы для количественного определения фибриногена и антитромбина III в плазме крови.
Обнаружено наличие нескольких стадий в процессе развития фибринового сгустка: медленная активация свертывающей системы, стадия быстрого роста фибринового сгустка, замедление скорости роста сгустка до полной остановки.
Установлено, что коллаген стенки сосуда не является активатором гемокоагуляциошюй системы.
Обнаружено, что снижение концентрации протеина С в образце плазмы крови приводит к устранению эффекта самопроизвольной остановки роста фибринового сгустка.
Исследовано влияние концентрации антитромбина III в образце используемой плазмы крови на процесс фибринообразования и скорость роста сгустка.
Изучено влияние различных доз гепарина в используемой плазме крови на процесс развития фибринового сгустка.
Полученые данные вносят вклад в понимание механизмов развития фибринового сгустка, роли антитромбина III и протеина С в регуляции деятельности свертывающей системы крови и могут быть использоваїїьі для дальнейшего изучения принципов регуляции фибринообразования.
Апробация работы.
Результаты работы были доложены на XIV Международном Конгрессе по тромбозам (Montpellier, France 1996), опубликовано 5 научных работ. Работа была апробирована на межлабораторном семинаре Института экспериментальной кардиологии РКНПК.
Структура и объем диссертации.