Введение к работе
'общая характеристика работы
Актуальность проблемы определяется тем, что фосфолшшды, являясь универсальным компонентом биологических мембран,Г играют важную роль в реализации основных функций клетки: пролифератив-ной, энергетической,. транспортной, реіг-пторной, разграничительной. Фосфолипиды, входя в состав мембпан внутриклеточных орга-Н9лл, участвую* в компартментализации обменных процессов. Jyinect-вуег. множество методов, изучения обмена фосфолипидов (Финдлей Дж. с соавт., 1990; КейтсМ., 1975). Одним из важнейших биохимических показателей является их. количественное содержание в различных биологических объектах. Приводимые в литературе данные о количестве фосфолипидов в одних и тех же структурах достаточно разноречивы (Крепо Е. М*| 1981; Котик А. о соавт., 1980; Ansell G. В. et-al., 1964). ~~ Объяснить ато можно тем, что используются различные методики выделения-, разделения и определения этих молекул, которые адаптированы к конкретным исследованиям и не всегда могут быть применимы к анализу других биологических структур. При оформлении окончательных результатов исследования наиболее распространенным способом выражения концентрации фосфолипидов является отношение массы фосфолипидов к массе.ткани, в которой они определялись. В исследованиях клеточных суспензій! используется отношение массы фосфолипидов.к числу клеток (Слюсарь Н. П.. 1993). Но принтом может возникнуть' погрешность, так как масса ткани существенно зависит от ее влажности, а количество клеток в пробе, взятой для подсчета, может отличаться от их числа в образце, взятом для определения фосфолипидов. Другим . способом выражения концентращш фосфолипидов является отношение массы фосфолипидов к массе тканевого белка- (Pediconi М. F. et al., 1990 ). Однако, ткань или ее
гомогенат не являются однородными средами и поэтому фрагмент ткани, взятий для определения белка, может несколько отличаться по его содержанию от образца, в котором исследуются липиды. Предполагаем, что определение белка в осадке, остающемся после экстракции липидов, позволит более точно рассчитать концентрацию фосфо-липидов в различных биологических объектах.
Имеются работы об использовании фосфолипидов как лекарствен
ных препаратов (Слюсарь Н. Н., 1993), а также о применении их для
приготовления липосом с целью транспорта различных лекарственных
веществ (Gresoriadis G., 1983). Показано, что использование фос
фолипидов позволяет стабилизировать мембраны, оказывать влияние
на функцию клеток и осуществлять .'транспорт лекарственных препара
тов. Однако, недостаточно изучены изменения тканевых фосфолипидов
под влиянием парентеральной фосфолипидной нагрузки ва фоне дейс
твия 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (МОТ). МФТП при
меняется для создания экспериментального паркинсонизма у живот
ных, а кроме того, его аналоги встречаются в продуктах и отходах
химической промышленности. ' '
Дедью настоящего исследования явилась разработка нового способа анализа содержания фоьфолипидов й тканях головного мозга и печени мышей и изучение особенностей обмена фосфолипидов под влиянием МФТП и парентеральной.фосфолипидной нагрузки.
Задачи исследования!
-
Разработать новый способ анализа содержания тканевых фосфолипидов путем использования солюбилиэации тканевого осадка, образующегося при экстракции липидов.
-
Исследовать изменения содержания фосфолипидов стриатума, коры головного мозга и печени мышей под влиянием ЬШП.
,-5-
—-__3_. Изучить изменения содержания фосфолипидов стриатума, коры
головного мозга и печени мышей при-парентеральной фосфолнпид..ой
нагрувкв; .. ---------
4. Выяснить особенности ' изменений фосфолипидного спектра стриатума,: корн головного мозга и печени мышей под влиянием МФТП и при парентеральной фосфолипидной нагрузке. ' ' *
Новизна исследования. Предложен оригинальный способ анализа содержания фосфолипидов в коре головного мозга и печени мышей, с использованием при этом солюбклизацию тканевого осадка, образующегося при экстракции липидов. Показано, что при растворении тканевого осадка не происходит потери количества белка, а это дает возможность определить его известными методами.
Впервые изучено влияние МЭТП на содержание фосфолипидов в
стриатуме, коре головного мозга и печени мышей. Установлено, что
под действием дата е стриатуме увеличена суммарное количество
фосфатидных кислот и кардиолипинов в сравнении с контрольными жи
вотными, в то время как в коре головного мозга увеличено содержа
ние фосфатидилинозитов; в печени обнаружено уменьшение содержания
фосфатидилэтаноламинов и увеличение количества фосфатидилинозитов
по сравнению о контролем. Следовательно, МВТП способен оказывать
влияние на обмей фосфолипидов в Исследуемых биологических объек
тах, - - .
Установлены изменения основных фосфолишщных фракций стриатума, коры головного мозга и печени мышей при парентеральной фоо-Фолипидной нагрузке из фоне действия МФТП . Предполагается, что .парентеральная фосфолппидная нагрузка способна оказывать влияние на фосфолитщный обмен в исследуемых тканях, изменяя при этом их содержание. .Показано, что парентеральная фосфолипвднзя нагрузка
.- б -
J.
меняет количество не только соответствующих фракций фосфолипидов,' но и других групп фосфосодержащих липидов.
Теоретическое и практическое значение работы. Разработанный способ анализа фосфолипидов может быть испольгован в различных, областях медико-биологических исследований: биохимии, клинической биохимии, биотехнологии, биомембранологии- Результаты исследований представляют интерес для патофизиологов, использующих М$ТП для создания экспериментального паркинсонизма. Кроме того, они могут быть использованы в исследованиях бйомембран, терапии фос-фолипидами и липосомадьного лечения, в гірофпатологии.
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о необходимости исследований новых путей модификации фрсфодипидного состава тканей головного мозга и печени.
Апробация работы. Основные положения диссертации и отдельные фрагменты работы докладывались и обсуждались на научной конференции Тверского государственного медицинского института.- Тверь, 1992; научной конференции Тверской государственной медицинской академии "Современные вопросы диагностики и лечения".- Тверь, 1994; международной конференции по изучению липосом,- Фрайбург, Германия, 1995; международном симпозиуме "Восстановительная нев-рология-3".- Иркутск, 1996; мёжкафедраяьном заседании сотрудников ТГМА.- 1996. .
Публикации. По теме'диссертации опубликовано Б научных работ и 2 .рационализаторских предложения.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собс-, твенных исследований, обсуждения результатов исследований, выво-
