Введение к работе
Актуальность проблемы. Инсулин играет важную роль в процессах знедеятельности и ему принадлежит центральное место в регуляции углеводного лена у животных и человека.
Важное практическое значение инсулина определяется тем, что этот гормон роко используется в современной медицине для заместительной терапии при (бете.
Инсулин во многих отношениях может служить моделью пептидных гормонов. еле того, как он был выделен (Banting, Best, 1922), инсулин явился первым белком, даторого установлена аминокислотная последовательность (Sanger at al, 1955), івьш белком, синтезированным химическими методами (Du, Zahn, Katsoyanis, ,4).
Именно для инсулина впервые было показано, что молекула может [тезироваться в виде более крупного предшественника (Sterner at зі, 1968). (errrop инсулина оказался первым выделенным и охарактеризованным рецептором ітидньїх гормонов (Cuatrecasas, 1972).
Кроме того, инсулин оказался первым белком, полученным для коммерческих гей с использованием технологии рекомбинактных ДНК (Goeddell, 1979).
Однако молекулярные механизмы действия инсулина и общие закономерности имосвязи между структурой и активностью этого гормона остаются до конца тисненными. Поэтому весьма актуальным является проведение периментальных исследований по получению структурных аналогов инсулина, чению их свойств и оценке функциональной роли определенных участков фомолекулы гормона.
Цель настоящего исследования: Создать новые пептидные аналоги инсулина, ойчивые к протеолизу, как основы для получения в дальнейшем лекарственной рмы пептидного препарата, применяемого при иясулиизависимом диабете.
Конкретные задачи исследования:
-
На основе имеющихся литературных данных по синтетическим аналоп инсулина, по аналогам, полученным направленным мутагенезом и с учете результатов при применении метода компьютерного моделирован! пространственной структуры молекул (программа ONIX, ИБМХ РАМ! сконструировать новые пептидные аналоги инсулина, непосредствен) ответственные за связывание гормона с рецептором и обладают инсулиноподобной биологической активностью.
-
Методом твердофазного синтеза получить пептиды, отражающие строен: центра связывания с рецептором, очистить их. Выделить пептидные аналої инсулина в окисленной и восстановленной формах.
3. Изучить лабильность ннсуяиноподобных пептидов воздействи
протеолнтических ферментов.
4. Осуществить скрининг биологического действия пептидных аналоп
инсулина в двух формах на культуре клеток.
5. Провести тестирование на животных со стрептозотоциновь
экспериментальным диабетом.
Принципиальная новизна и научно-техническая ценность предлагаемой рабої состоит в том, что получены новые пептидные аналоги инсулина, обладающі биологической активностью, сравнимой с активностью нативного инсулина in vivo in vitro.
Результаты работы могут быть использованы :
в медицине для разработки в дальнейшем лекарственных форм пептиднь препаратов (пептидомиметиков), устойчивых к протеолизу, с улучшенные фармакохарактернстиками, применяемых при инсулинзависимом диабете.
в фундаментальных научных исследованиях механизмов молекулярної узнавания (гормон-рецептор), в выявлении минимальных, функционально-значнмь участков связывания белков с рецептором.
Апробация диссертации состоялась 13. 1. 1997 г. на межлабораторной конфе-іенции НИИ биомедицинской химии РАМН.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на страницах машинопис-ого текста, включая 33 рисунка, 10 таблиц я 2 схемы. Состоит го следующих азделов: Введаше, Литературный обзор, Материалы и методы, Результаты (сспериментов, Обсуждение полученных результатов, Выводы, Список литературы.